Способ определения антиокислительной активности химических соединений

 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сыворотки крови. Способ может быть применен в биологии при исследовании антиокислительных свойств веществ и в фармакологии при испытании фармакокинетики и фармакодинамики лекарственных препаратов, используемых для коррекции процессов перекисного окисления липидов при различных патологических состояниях. Для этого в крови, подвергнутой озонированию без добавления исследуемого вещества и с добавлением его методом индуцированной ионами железа хемилюминесценции, определяют интенсивность свободно-радикального окисления. При этом концентрация озона составляет 0,26-0,35 мг/л, время озонирования 5-7 мин. Способ отличается простотой и малой трудоемкостью. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) А1 (51) g G 01 N 33/52

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

llPH ГКНТ СССР (21) 4211988/28-14 (22) 16.03.87 (46) 07.10.89. Бюл. Р 3/ (71) Горьковский медицинский институт им. С.N. Кирова (72) К.Н, Конторшикова, С.П. Перетягин и Е.И. Кузьмина (53) 612.015{088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1045127, кл. G 01 N 33/48, 1985. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сыворотки крови. Способ может быть примеИзобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизическим методам исследования параметров сы-» воротки крови с целью определения антиокислительной активности химических соединений (фармакологических препаратов) .

Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляется следующим образом.

У лабораторного животного под наркозом забирается гепаринизированная (0.,1 мг/кг массы животного) кровь.

50 мп свежегепаринизированной крови помещают в стеклянный оксигенератор, который термостатируют при 3/ С. Про2 нен в биологии при исследовании антиокислительных свойств веществ и в фармакологии при испытании фармакокинетики и фармакодинамики лекарственных препаратов, используемых для коррекции процессов перекисного окисления липидов при различных патологических состояниях. Для этого в крови, подвергнутой озонированию без добавления исследуемого вещества и с добавлением его методом индуцированной ионами железа хемилюминесценции, определяют интенсивность свободнорадикального окисления. При этом концентрация озона составляет 0,26

0,35 мг/л, время озонирования 5—

7 мин. Способ отличается ))ростотой и малой трудоемкостью. 2 табл. изводят перфузию образца крови в оксигенератор озоном с концентрацией

0,260-0,350 мг/л при экспозиции 5

7 мин и скорости 1 л/1 мин. После этого к аналогичному образцу крови добавляют исследуемое вещество и производят обработку образца крови озоном описанным способом. В сыворотке свежегепаринизированной крови, крови подвергнутой озонированию без добавления исследуемого вещества и с добавлением его индуцируют хемилюминесценцию. Дпя этого перед началом анализа сыворотку крови объемом 0,5 мл в течение 5 мин выдерживают в бане с температурой 37 С. Затем в кювету вносят 8,5 мл О, 105 М раствора КС1, приготовленного на фосфатном буфере з 1> 5 1 Ç /E 0 5 (pl! 7/ - . 5) О, 2 мл 1/."-н ой гидро:- ер екиси третичного бут.-(ла и, мл раст Вор:I — 2 ион ОВ,».,lj /5" ВаJT еHT«(Ого же В за 1 0 м(«(РеБ0. 7((О., Затем j(!oBeTy c jjl?есенньь(и .«.« растворами ставят в светонепроницаемую камеру устройства, тщаTe?«üvî пере.>(((?иВают содержимое кюветы и закрываюг камеру, При закрытой створке г;рерызателя светового г>отс E(et теtl(()BO камеры 10 измеряют /(ля коктрогя (!(у«(о>зой-. сигнал измерктел ьк о(о тракта ус т о ойс тза . Затем створка темковой камерь o j «(p.,!Ba— ется и происхоцит измерение интексивности свечения приготовлен:(ого )HCTBQ-(55

Ва (фо?(? ц?7;7 учета a посч т,:ующе ., а зев ..ти 3 е с B (3 т o B 07 О и О т 0 7< а х е ми?? 10 ми н е с 1, p H

nt,, .;> )" i,11 (7 с ;л>, > t (t«>«jri"

Т(Из l((1(>ь! B С(((7!HП>! B!tQP (")(1 TВп В, >ц) г:,((рп(ем 0, 0 ьв ct Ворот>п крnB 7;. 113(((.ря;л:I (р;-„Л,, l 1) И(; t ?1(B i(i) :, Е (r 71(B! «jie(Iòe!1-,— !EI И j,((С>В их ко,.(ПJTекс 07) В: ывср От к« (р Оз>! 3

«! е««>.; .,- 1 м«j! (, ((11(-) г 0" («; «1,>««(к -.«1.1(р,«ъ ) «>

3" .« IЬ j а Г(.! l >T n; (3« Г i«- Р(К(«З«: В 0 1я 1 (. . я jirl г.и(()ров и «:("1:còp- Top;cт;=ойст ..::l . .СтеП Е?: 7«3 3j; .1 «Ж(-1(Н О С ТИ а Т t! <-. К?: C I j t i T (>1 7, -, (,L; - БОйс !" B 1:(:c? .едуемОГО 1)ещ;-c BB 07(0?!иВают 30;);1çíêöå хемипюмикесцev. иji

1(С>к«: » 01 1, Г(?Г (II И КО " ): П?: Ю(! "« ) т >а Ь (?1;-,, 1 ««

:(р и м е р (. Лабора гopHOI

)п«(jjol l! i): (с ()ба«;() —,—;Q B ?(r!pl(030? «3 а 61«вЂ”

1)а «т-„ (poBb . Затем г(0 >О мл (? В(жс.

7 гепаp: (v;3)(poBàljj?oé крови vol:ещае- ся

В с т (к(..1;;i! ь(и о?(ск7 е- ератo;), где пер†(зы? I o6p(, (з(зц o":.,0".1 ир) 10 г 03 nvi эм . кок ц«нтрапис : О, 26 >!I /,tj - ..;;.-:ек (с 5::(1?к „ к вто()сь(у ()6>-.а l ; . г;Оба?-з;(яют витамьп Е

В концеь !1 ijij>! 50 мг/кт Вес l > ((о(;Вергают .-ер((>уз..-гп озопом так же, как перВы! 06РП:) «и . 5 Ie I(Tj)E(«i))«жныР .() ()Ои() кr (тоь(е((1(1!Ст по 2 мл ?(рози, кс подвергнутой перфузки и образны пер?зь(й и кто«(, > рой, пслучают сыворотку кг>о?ви пектри- ". ((>) Гир Ова?Iие 1 г(р1! 1 б 00 ОО «ми?(В т «зч (>>гие ii) мип. Затем (о 0. 5 м . Ка кцой

jIpo6b(Выцержизают з баке 1«ри 5! С з тгченис 5 мин В специа?Кьном к>лветком устро ic гве х-?м>?(о)(и?(оь(ет>)а. (< каждой г?poáe д(>оа ..(яют 8,5 мп О, 105 К раствора КС1 „О, 2 мл 1 Х-пой гицр опер ски си j"peTEj7Ij(o! о бутпла и 1 мп pacTBopv ионов дзухваленткого жепеза l еЮ, > /((0 и ГjtjaTe?«ы1« пе(>Рме(гиlзают со де()жи)(ос, !а т см к((>1)еты " г> нес с,кыь(5( растзо-,а>iп(помещаь.т !з сзетокепро!«Н(>a" -(((«ю кам(р? и измеряют интегральную

i(i!тенсизкость хемилюминесценции. .2емилюминесценция исходной крови ! 5 ., 2 им>,.g с, сыворотки крови,? о)верг— I путой перфузии озоком — />5/(,/7 имп, /с, Оз()нированной сыворотки и с витамин)м Е 134,2 имп,/с.

Пример 2. Свежегегаринизированную кровь помещали в стеклянпый с>ксигенератор, гце первый образец

Озонировали с концентрацией озона

Р «Г « и, 35 мг/л з течекие 3 мин, к послецуюгзим«трем образцам той же крови добавляли витамин « в концентрации 25, 50 и 75 мг/кг и подвергали гействию озоном как первый обра"-:eu. 7)o Ie че .-,;;:с,.((j 1пl 1,«лу чали с.тедую!Г«ие л /? Ьтаты: хам? (!0(!Hj?ecj)екция сывоооткроли пос.(; о ок(«п>ог;ания coc TBB

> rr f я?? ..) Ь 0 6 ими, / с, .х е мил (В м и!! е с ц ен ци я

: 1«ПЗ(;Pal К?-. «(PnBИ С ВИТНМИНОМ Е В КОНцентp;;;,E(E 25 мг/кг снизила интенсивп«ст ь свече>зия,-,о 320, 2 имп

50 мг/кг — ло 168., 2 имп. /с, а 75 мг/кг-(О,, 5> .„ 1.!> !1, / (табл. 1;1 2 представлены данные

5:0. >I люмипгс цен>?ии при разчых режимах

«пос оба, 1rj 3" о() С T(?-"Ip Озз ):(не СущЕС BpHHO .":-:7: ) ти"."«> процедуру опр е>; е.т eHHB анти-,, >кислитепь?:(й а ктив ности, О 7) М )r" Л а т.! 3 О б р Е Т Е Н И B

6 è ñ « 06 0 lpe««е?1 PHH> антиокислител ь,:ОП;-:Ктиз!OC! КИМИ 7ЕСКИХ ССЕДИНЕНИй

«-1 к/()«к j j j". и (В Q 0 ()д н О р а з и к, >„-7 ь ч Q 7 Q

)!(-I ЕНИЯ 1?ИПИДОВ В TCCТ CHCТF .>Š —.;pEjcvTñ «Вии и Отсутствии -IсслецуемОГО соецикения с последую!((5Н! измерением быстрой вспь.II(I(H хемилюминесценции и опредепение?(антиокислительной актив!

<осТ» по степени тупения хемилюминесценции в образцах, содержащих исслед-ej!Qe соедлкение, о т л и ч а ю— и и с я тем, - To, с целью упро(((еп(я способа за счет сокращения чис«а трудоемких операций, в качестве т(:.-..-,. -("истРмь! испОльзyj()T цельн ч?0 крОВь, снободнорацикальное окисление индуцируют, пропуская через образец крови озон в KOEI?jeHTpBIg(H 0,26-0,35 MI /ë в ге)кение 5-7 мин, а перед измерением хeмилюминесveнции дополнительно усиливают ее введением в образец ионов

;(вухваленткого )(елеза, 6

Таблица

1513405

Степень выр аженности хемилюмиОбщий белок, Я

Гемоглобин, мг/Ж несценции, имп./с

Таблица2

Бремя экспозиции ьжн

10-15

5-7

1-3

Хемилюминесценция, имп,/с

105+15 407+20 411+1?

Составитель Н. Гуляева

Техред Л.Олийнык Корректор Л. Бескид, Подписное

Тираж 789

ВНИИПО Государственного комитета по изобретениям и открьггиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Концентра"з ° мг/л

0 105

О, 260

О, 350

О, 590

Редактор Н. Бобкова

Заказ 6076/46

205 + 21

400 + 26

490 + 29

510 + 28

21, 1+2,43

22, 1+2,60

23,4+2,80

39,3+3,10

101, 1+5,6

104, 0+16, 7

106,012, 1

90, 1+5,7