Способ получения производных дистамицина а или их гидрохлоридов

 

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения производных дистамицина А и их гидрохлоридов общей ф-лы R<SB POS="POST">1</SB>R<SB POS="POST">2</SB>N - A - C(O)[NH-......-C=CH - N(CH<SB POS="POST">3</SB>) - C - CH C(O)] <SB POS="POST">N</SB> NH - CH<SB POS="POST">2</SB> - CH<SB POS="POST">2</SB> - C(NH<SB POS="POST">2</SB>)=NH, где N = 3 или 4

A- @ , когда один из R<SB POS="POST">1</SB> и R<SB POS="POST">2</SB> - водород, а другой - а) -C(O) - N(NO) - R<SB POS="POST">3</SB> при R<SB POS="POST">3</SB> - C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">4</SB>-алкил или C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">4</SB>-галоидалкил

б)-C(O)-(CH<SB POS="POST">2</SB>)<SB POS="POST">M</SB> - R<SB POS="POST">4</SB> при M = 0, R<SB POS="POST">4</SB> - азиридинил или оксиранил

A- @ , КОгдА R<SB POS="POST">1</SB>=R<SB POS="POST">2</SB>-C<SB POS="POST">1</SB>-C<SB POS="POST">4</SB>-галоидалкил, которые обладают противоопухолевой и противовирусной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных и малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией замещенной аминокислоты или ее хлорангидрида с соответствующим 4-(N - нитрозо - N -метилуреидом) кислоты с последующим выделением целевого продукта либо в свободном виде, либо в виде гидрохлорида. Новые соединения показывают значительную эффективность при наложении с репродуктивной активностью патогенных вирусов и защиту клеток от вирусных инфекций (в том числе и ДНК-вирусов). 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (1% (11) (ю 4 С 07 D 207!34

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTY ч, i Lr1 когда один из R< и R2Ri 1i-А — CQ HN

NH

11Н вЂ” СН2 — СН вЂ” С

2 NH

2 (21) 4202591/23-04 (22) 18.05.87 (3I) 86122!8 (32) 20, 05.86 (33) GB (46) 07.12.89. Бюл, Р 45 (7l ) фармиталиа Карло Эрба С. P,Ë. (IT) (72) Этторе Лаццари, Федерико Аркамоне, Серджо Пенсо, Иария Антониетта

Верини и Никола Ионгелли (IT) (53) 547 . 746. 07 (088. 8) (56) Nucleic Acids Res, Mol. Biol, 1975, 15, 285. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ДИСТАИИЦИНА А ИЛИ ИХ ГИДРОХЛОРИДОВ (57) Изобретение касается гетероцикличес к цх веществ, в час тиос ти получения производных дистамицина А и их гидрохлоридов общей ф-лы R(R N-А (,(Q)ын-„р=сн x(cHy-с= н с(0) мн— in

-СН2-СН2 — С(МН21=МН;, где n = 3 или

Изобретение относится к области получения новых производных дистамицина А общей формулы водород, а другой — а) -С (0) -N (NO-R3 при R> — С <-С4- алкил или С(-С4-галоицалкил; б) -С (О) — (СН2),„-К4 при m=0, R 4 — азиридинил или оксиранил, Аф У7- Д

s x s

1 сн когда Rl=R2 — С,-С4-галоидалкил, которые обладают противоопухолевой и противовирусной активностью, что может быть использовано в медицине.

Цель — создание новых активных и ма-. лотоксичных веществ укаэанного класса ° Синтез ведут реакцией замещенной аминокислоты или ее хлорангидрида с соответствующим 4-(N-нитрозо"И-метилуреидом) кислоты с последующим выделением целевого продукта либо в свободном виде, либо в виде гидрохлорида. Новые соединения показывают значительную эффективность при наложении с репродуктивной активностью патогенных вирусов и защиту клеток от вирусных инфекций (в том числе и ДНК-вирусов) ° 1 табл.

1 где n = 3 ипи 4;

А — радикал когда один иэ

К, и К2 — водород, а другойгруппа -СО-И-R Э, B котоРой

N0

В. — С -С -алкил незамещенЭ„4 4

t ный ипи.замещенный атомом га-.

1528316 лоида, или группа -СО-(СН )„-, где m = О, à R4 — азиРидинил или оксирфу4ил или А — радикал

5 г

N N . 1. Г3. или

)Я S сн, 10 где Р,, и R — одинаковые и означают

С1-С -алкил, замещенный галоидом, или их гидрохлоридов, обладающих про- 15 тивоопухолевой и противовирусной активностями.

Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получения новых производных 20 дистамицина А, обладающих ценными фармакологическими свойствами при низкой токсичности.

Пример 1. Р -/1-1 етил-4-/1— метил-4-/1-метил-4-14-N -метил-N — 25 нитрозоуреидобензол/ — 1-карбоксамидо) пиррол-2 — карбок самидо/пиррол-2карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин, гидрохлорид.

Раствор 0,1 мл триэтиламина в 1 мл 30 диметилформамида (ДКФ) прибавляют в течение 5 мин к перемешиваемому раствору 0,41 г N-деформилдистамииина в

2,5 мл ДМФ при комнатной температуре в атмосфере азота. Через 15 мин малыми порциями прибавляют 0,17 г 4-(Nнитрозо-N-метилуреидо) бензойной кислоты и О, 16 г дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь 2 ч пе ремешивают и прибавляют 25 мл этилового 40 эфира. Твердый продукт, собранный фильтрованием, оч пцают колоночной хроматографией на силикагеле смесями этилацетата, метанола и уксусной кислоты, получают 0,175 г целевого сое- 45 динения, т.пл. 205-21 0 С (с разложением), из изопропанола.

Аналогично может быть получен

1 -/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил-4(4-N -/2-хло рэ тил-N -нитрозоуреидо50 бензол/-1-к арбокс «мидо) -пиррол-2карбоксиамидо/пиррол-2-карбоксиамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамио дин, гидрохлориц, т. пл. 82 С (разложение) .

Пример 2. Р -/1-Иетип-4-/1метил-4-/1-метил-4- (4-N, N-бис-,/2хлорэтил/аминотиофен-2-карбок самидо)пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбок самицо/пиррол-2-к а рбоксамидо/п ропионамидин, гидрохлориц, I стадия. Промежуточная 4-N Nбис-/2-хло рэтил/аминотиофен-2-карбоновая кислота.

Исходя из 1,74 г метил-4-нитротиофен-2-карбоксилата получают О, 90 г метил-4 — аминотиофен-2-карбоксилата, т.пл. 81-82 С.

Вводят 4 г холодной окиси этилена в растор 0,9 г метил-4 †аминотиофен2-карбоксилата в 12,5 мл 407.-ной водной уксусной кислоты при 5 С при перемешивании. Смесь выдерживают всю ночь при комнатной температуре в запаянной колбе, затем концентрируют до малого объема и разбавляют 25 мл воды. Прибавляют твердый бикарбонат натрия и смесь экстрагируют этипацетатом. При выпаривании органического растворителя получают 1,3 г метил/N,N-бис/2-оксиэтил/аминотиофен-2карбоксилата в виде светло-коричневого масла, которое эатвердевает при стоянии, т,пл. 68-69 С (из смеси о

60:40 этилацетат: гексан), Растворяют 1, 3 г бис-оксиэтиламинопроизводного в 1, 96 мл оксихлорида фосфора и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 45 мин. После выпаривания в вакууме темный остаток обрабатывают 7,75 мл концентрированной соляной кислоты при 100 С в течение 3 ч . Сме с ь охлаждают, п риб авл яют

21 мл холодной воды и экстрагируют полученный раствор этилацетатом. После выпаривания органического растворителя и очистки твердого остатка хроматографией на колонке с силикагелем, элюируя смесью этилацетата и метанола, получают 0,49 г 4-N, N-бис/2-хлорэ тип/амино тиофен-2-карбоновой кислоты, т.пл. 135-137 С (из смеси

60:40 бензол:гексан).

II стадия. Целевое соединение.

Раствор О, 1 мл триэтиламина в

О, 5 мл ДИФ прибавляют к раствору

0,4 r деформилдистамицина дигидрохлорида в 4,5 мл ДМФ при комнатной температуре в атмосфере азота.

Смесь обрабатывают О, 23 r 4-N,Nб ис -/2-хло рэ т ил/ а мино т ио фе н -2-к а рбо— новой кислоты и 0,77 г дициклогексилкарбодиимида малыми порциями. Полученную в результате смесь перемешивают всю ночь, затем фильтруют и выпаривают досуха в вакууме, Твердый ос-: таток очищают хроматографией на сили30

5 ;15283 кагеле, используя в качестве элюентасмесь .этилацетата и этанола (9:1 и

8:2 по объему). Получают 0,22 r целеного соединения, т.пл. 199-204 С (после перекристаллиэации из изопропилового спирта) .

Аналогично могут быть получены следующие соединения: -/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил10

4-(4-N, N-бис -/2-хло рэтил/аминоимида» зол-1-метил-2-карбоксамидо) пиррол-2карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамиВ дин, г идрохло рид; 15 -/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил4-(5-N, N-бис -/2-хлорэ тил/аминоимидазол-1-метил-2-карбоксамидо) пиррол-2карбоксаиидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин,, 20 гидрохло рид; (3-/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил4- 4-Я, N-бис -/2 — хло рэ т ил/аминот иа зол2-карбоксамидо) пиррол-2-карбоксамидо/ пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар- 25 боксамидо/пропионамидин, гидрохлорид; -/1 -метил-4-/1 -метил-4-/1 -метил4-(5-N,N-бис-/2-хлорэтип/аминотиазол2-карбоксамидо)пиррол-2-карбоксамидо/пиррол- 2-карбоксамидо/пиррол-2карбоксамидо/пропионамидин,гидрохлоРидПример 3, $ -/1-Метил-4-/1метил-4-/1-метил-4- (4-И, И-бис-/2хлорэтил/ аминобензол-I -к арбок самидо пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар35 боксамидо/пиррол-2-к арбоксамидо/пропионамидин, гидрохлорид °

Раствор О, 195 г бикарбоната натрия в 3 мл воды прибавляют к охлажденному раствору О, 4 г дефо рмилдистамицина в 21 мл этанола. К этой смеси прибавляют по каплям раствор

О, 32 г 4-N, N-бис-/2-хлорэтил/аминобензоилхлорида в 3 мл бензола.. Смесь о 45 перемешивают 3 ч при 5 С, а затем

l2 ч при комнатной температуре.

После выпаривания в вакууме получают твердый остаток, который хроматографируют на колонке с силикагелем, элкируя смесями хлороформа и метанола (9: 1 и 7: 3 по объему), получают

0,22 г целевого продукта, т.пл. 295 С о (с разложением), из изопропилового спирта и этилового эфира °

Аналогично получают следующие сое55 динения: !

1 -/1-ме тип -4-/1 -метил-4-/ 1-мет ип4-/1-ме т ил -4- (4-N, N-6 ис -/ 2-хло рэ тил/

16 6 аминобензол-! -карбоксамидо) пиррол-2карбок самидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин, гидрохлорид; -/1 метил-4-/1-метил-4-/1-метил4- (З-N, N-бис-/2-хло рэтил/аминобензол1-карбоксамццо пиррол-2-к арбоксамидо/пиррол-2-к арбок с амидо/пиррол-2карбоксамидо/пропионамидин, гидрохлоРид 1

P-/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил-.

4- j4-/оксиранкарбонил/аминобен зол-1карбоксамидо) пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-к арбоксамидо/пропионамидин,гидрохлорйд;

Р-/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил4-(3-/оксиранкарбонип/аминобензол-1карбоксамидо!пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин,хлоргидрат;

Р-/1 -метил-4-/1-метил-4-/ 1-метип4-(4-/1-азиридинкарбонил/аминобензол1-карбоксамидо!пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2карбоксамидо/пропионамидин,гидрохло

P 1 -/1-ме тил-4-/1-метил-4-/1-ме тип4- (3-/1 -аз иридин/ к ар 6ониламино бенз ол1-карбоксамидо)пиррол-2-карбоксами до/п иррол-2-к ар бок с амидо/и иррол-2к арбо к с амидо/п ро п ион амид ин, r идрохлоР °

B таблице приведены данные in vitro по противоопухолевой активности,. относящиеся к соединениям Р /1-метил4-/1-метил-4-/1-метил-4-(4-N, N-бис/2-хлорэ тил/аминобензол-1-карбоксамидо) пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2карбок самидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин, гидрохлорид (код FCE

245 1 7) и Р-/1-метил-4-/l-метил-4-/1ме тил-4- (4-N, N-бис -/2-хло рэ тил/аминотиофен-2-карбоксамидо) пиррол-2-карбок самидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин гид" рохлорид (код FCE 24690) по сравнению дистамицином А.

Противоопухолевая активность in

vitro была оценена с помощью цитотоксикологического исследования, проводимого на клетках murine Z 1210 лейкемии, Z-РАИ устойчивых к лейкемии клетках и клетках Р388 лейкемии, а также на клетках !!ела. Клетки происходили из опухолей in vivo и адаптировались в культуре клеток. Клетки были использованы до десятого пассажа. Цитотоксичность onределена путем

1528316

10 или А — радикал

30

45 подсчета выжитых клеток через 4 ч после обработки и 48 ч роста на не содержащей лекарства среде. Для клеток lieZa использован тест по ингибированию колоний. Процент роста клеток на обработанных культурах сравнивается с таковым для контроля. Величины

LD O (дозы, ингибирующие 507. клеточного роста по отношению к контролю) рассчитаны по кривым доза — ответ, Предлагаемые соединения также показали значительную эффективность при наложении с репродуктивной актив— ностью патогенных вирусов и защиту клеток тканей от вирусных инфекций.

Так, они показывают активность против

ДНК-вирусов таких, как, например, ге р— пес (например, герпес симплекс и герпес зостер), PHK-вирусов таких, как риновирусы и аденовирусы, и против ретровирусов таких, как саркома-вирусы.

Вирусы герпес, коксаки (coxsachie) и ресгираторно-сенцитиальные были испытаны в жидкой среде по следующей методике. Серийные двукратные разбавления соединений от 200 до 1, 5 мкг/мл распределены в дубликатах О, 1 мл/лунку в 96 лунках микроплат для культуры ткани. Сразу же добавляются клеточные суспензии (2 ° 10 клеток/мл), зараженные примерно 5 ° 10 TCLD вирус/клет-3 ку в 0,1 мл/лунку. После 3-5 дней ино кубации при 37 С в 57.— ном СО культу— ры клеток оценивают при наблюдении под микроскопом и определяют минимальную ингибирующую концентрацию, которая определяет уменьшение цитопатич еско го эффекта по сравнению с зараженными контролями.

Формул а изобретения

Способ получения произвоцных дистамицина А общей формулы

Я! ,.Ы-A-Со Н

1 12

N NH

-co кн — сн -сн -с г, 11Н

I г

СН, где n = 3 или 4;

А — радикал когда один из

К1 и R< — водород, а другой группа -СО-N-R, в которой

N0

R — С -С4,-алкил, незамещенный или замещенный атомом галоида или группа -СО (СН ) -Rp где m = О, à R4 — азиридинил или оксиранил, N 5

9 Я, Г3, или % 3.

S N S

20 3 где R и К вЂ” одинаковые и означают

С -C -алкил, замещен25 ный галоидом, или их гидрохлоридов, о т л и ч а ю" шийся тем, что соединение общей формулы 1И

CO- NН CH — СН вЂ” С

1 2

СН3

35 где п — имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы где Х вЂ” гидроксил или га. inrev;

R R и А имеют указанные.зна(Ф чения, с последующим выделением целевого

50 продукта в свободном виде или в виде гидрохлорида.

1528316

Со един ен ие

Z l 210 Z1 210/РАМ P388 HeZa

3,9

О, 014

0,037

136

0,430

О, 985

0,21

0,22

198

О, 985

1, 365

Дистамицин А

FCE 24517

FCE 24690

Цитотоксичность оценена через 4 ч после обработки. » Питотоксичность оценена через 48 ч после обработки.

Тест по ингибированию колоний проводили

+%% через 24 ч после обработки.

Составитель И, Бочарова

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Дидык Корректор Э.Лончакова

Заказ 751 9/58

Тираж 352

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент" ° г.Ужгород, ул. Гагарина,101