Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов

 

Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике менингитов. Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение способа, а также сокращение сроков исследования. Для этого предварительно готовят 2%-ный раствор агара на 0,1 М бифталатном буфере или 0,5%-ном гипотоническом растворе NACL с PH 6,2, раствор полимиксина М сульфата в концентрации 2-4 тыс. ЕД/мл, сухую массу тест-культуры М. LYSODEIRTICUS из расчета 0,15% к общему объему среды, которую растирают в ступке с 1-2 каплями буфера или гипотонического раствора. В расплавленный агар добавляют равное по объему количество раствора полимиксина, смесь охлаждают до 44-55°С, после чего добавляют культуру микрококка и наносят по 4 мл на предметные стекла. В застывшей среде делают лунки диаметром 2 мм на расстоянии 1 см друг от друга. Лунки заполняют образцами спинно-мозговой жидкости, после чего предметные стекла выдерживают в термостате в течение 15-120 мин. О наличии лизоцима судят по появлению зоны лизиса вокруг лунки в течение указанного периода наблюдения. При обнаружении лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 5 G Ol N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЧНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4284519/28-14 (22) 1 3. 07. 87 (46) 07.01.90. Бюл. У 1 (71) Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии, вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) Е.М. Бабич, С.А. Деркач, И.Б. Васильева, К.К.Макаренко и С.В.Валюх (53) 616.07(088.8)

t (56) Мотавкииа Н.С., Ковалев Б.N.,,Шаронов А.С, Микрометод количественного определения лизоцима. - Лабораторное дело, 1979 11- 12, с ° 722-723. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ И ВИРУСНЫХ МЕНИНГИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к медицинской микробиологии, и может быть использовано при диагностике менингитов. Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение способа, а также сокращение сроков исследования. Для этого предварительно готовят

2Х-ньй раствор агара на 0,1 М бифталатном буфере или 0,5Х-ном гипотоническом растворе ЯаС1 с рН 6,2, раствор полимиксииа М сульфата в концентИзобретение относится к медицине, в частности медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике менингитов.

Целью изобретения является повыше1 ние чувствительности и упрощение

2 рации 2-4 тыс. ЕД/мл, сухую массу тест-культуры М. Cysodeikticus из расчета 0,157. к общему объему среды, которую растирают в ступке с 1-2 каплями буфера или гипотонического раствора, В расплавленный агар добавляют равное по объему количество раствора полимиксина, смесь охлаждают до 4455 С, после чего добавляют культуру микрококка и наносят по 4 мл на предметные стекла. В застывшей среде делают лунки диаметром 2 мм на расЪ стоянии 1 см друг от друга. Лунки заполняют образцами спинно-мозговой жидкости, после чего предметные стекла выдерживают в термостате в течение

15-120 мин. О наличии лизоцима судят по появлению зоны лизиса вокруг лунки в течение указанного периода наблюдения. При обнаружении лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение указанного времени — вирусную. Использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность диагностики менингитов на 307 по сравнению с известным способом, упростить способ за счет простоты подготовки и учета реакции и сократить сроки проведения исследований до 2 ч. 1 табл. способа, а также сокращение сроков исследования.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят 2_#_-ный раствор агара из бактоагара Дифко или простого агар1534396 агара отечественного производства на

0,1 М бифталатном буфере или

0,5%-ном гипотоническом растворе

NaCl с рН 6,2, Готовят раствор поли-. миксина М сульфата в концентрации

2-4 тыс. ЕД/мл, для чего берут навеску порошка или таблетку антибиотика, содержащую 500 тыс. ЕД и растворяют в 250-175 мл буфера или солево-го раствора. Навеску сухой массы тест; культуры М. 1узоде1к1лспз берут из расчета 0,15Х к общему объему среды и тшательно растирают в ступке с 1-2 каплями буфера или гипотонического раствора. В расплавленный 2%-ный агар добавляют равное по объему количество приготовленного раствора полимиксина, смесь охлаждают до температуры 44-55 С, осле чего соединяют с при- 20, готовленной навеской культуры микро, кокка и наносят по 4 мл на предметные стекла. Б застывшей среде делают лунки диаметром 2 мм на расстоянии см одна от другой. ?5

Перед исследованием предметные стекла со средой предварительно подогревают в термостате в течение 1520 мнн. Лунки заполняют испытуемыми образцами спинно-мозговой жидкости« 30 после чего предметные стекла выдерживают в термостате в течение 15120 мин. 0 наличии гпязоцима судят по появлению зоны лизиса. вокруг лунки в течение указанного периода времени. При обнаружени я лизиса в течение 15-120 мин диагностируют бактериальную этиологию менингита, а при

"1 отсутствии лизиса в течение указанно-" го времени — вирусную. 40

Пример 1, Больной Н., 12 лет, поступил с предварительным диагнозом: острый менингит неучтенной этиологии. Больному произведена спинномозговая пункция. При исследовании спинно-мозговой жидкости установлено: ликвор прозрачньнл, цитоз 198«

«10 кл/л, нейтрофилы 48%, лимфоциты

52%, белок 0,33 г/л, сахар 2,4 ммоль/л, хлориды 125 ммоль/л. С целью установ- ления этиологии менингита изучена лизоцимная активность спинно-мозroвой жидкости больного. Гельбактериальную смесь готовивших впрок на 20 предполагаемых исследований. За еди1лицу расчета принимали 4 мл среды, необходимые для одного предметного стекла, и оптимальное число возмож ых исследований на нем (2-3 пробы ликвора). Для выполнения намеченного количества исследований потребовалось 28 мл гельбактериальной смеси.

14 мл 2%-ного раствора агара готовили из простого агар-агара отечественного производства на 0,5Х-ном растворе хлористого натрия, рН 6,2. Раствор полимиксина М сульфата, содержащий

4 тыс. ЕД/мл, готовили путем растворения 1 таблетки антибиотика (500 тыс.

ЕД) в 175 мл 0,5%-ного раствора хлористого натрия, Навеску сухой культуры М. 1ysodeikticus (42 мкг) тщательно растирали в ступке с 1-2 каплями гипотонического раствора NaC1 К 14 мл расплавленного

2%-ного arapa добавляли 14 мл приготовленного раствора полимиксина 1" о сульфата, смесь охлаждали до 50 С, после чего соединяли с навеской культуры микрококка. Среду разливали по

4 мп на 7 предметных стекол. В застыв-. шей среде делали по 3 лунки на расстоянии 1 см одна от другой. С помощью пастеровской пипетки заполняли лунку исследуемым образцам ликвора, после чего предметное стекло клали на дно чашки Петри и просматривали через каждые 10-15 мин в течение 2 ч.

Появление зоны лизиса, визуально воспринимающееся как просветление среды вокруг лунки, началось через

115 мин, что позволило сделать заключение о бактериальной природе менингита у данного больного и назначить. этиотропную терапию. Результаты бактериологического исследования спинно-мозговбй жидкости больно о подтвердили менингококковую этнологию заболевания на третьи сутки.

Н р и м е р 2. Больной К., 16 лет, госпитализирован с диагнозом: менингококковая инфекция? менингит. Ликворологические данные: цитоз 700»

«10 кл/л, нейтрофилы 55%, лимфоциты

45%, белок 0,48 мг/л, сахар

2,8 ммоль/л, хлориды 115 ммоль/л.Результаты бактериоскопии мазка ликвора отрицательные. Определение лнзоцимной активности спинно-мозговой жидкости проводили по предлагаемому способу„ Гельбактериальную смесь готовили так же, как в примере 1, за исключением того,- что доза полимикси" на в среде была 1 тыс. ЕД/мл. Ход исследования, тот же. Появление зоны лизиса вокруг лунки с ликвором больноФормула изобретения

Способ дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных менингитов, включающий определение лизоцима в биологической жидкости методом диффузии в агаре с тест-культурой М. lysodeikticus, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, упрощения способа и сокращения сроков исследования, определение проводят в спинно-мозговой жидкости, при этом в агар добавляют

1-2 тыс. ЕД/мл полимиксина М сульфата, после чего визуально определяют зоны лизиса среды и при обнаружении лизиса в течение 15-120 мнн диагностируют бактериальную этнологию менингита, а при отсутствии лизиса в течение указанного времени — вирусную.

Из них обнаружен лизоцим, абс.Х

Время появления зон лизиса, мин

Способ обнаруже- Больные Всего ния лизоцима менингитом обследовано

15-60 61-120 121-180

48 48 100 30 18

Бактериальным

Вирусным

Бактериальным

Вирусным

Предлагаемый

22 0 0

48 32 66,6+2,3 26 4

Известный

Составитель Г.Чуич

Редактор В.Петраш Техред М.Дидык Корректор С.Шекмар

Подписное

Заказ 39

Тираж 503

ИНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул. Гагарина,101

153439

ro отмечено через 15 мин инкубации в термостате. Сделано заключение о бактериальной природе заболевания.

До постановки окончательного диаг5 коза в очаге проведен врачебный осмотр общавшихся, выявлены и изолированы больные с характерными клиническими признаками назофарингита. На 3-й день бактериологического обследования из носоглотки больного был выделен менингококк, а в РНГА на 7-й день отмечено нарастание титров антител к мениигококковому полисахариду. Окончательный диагноз: менингококковая ин- 15 фекция, менингит. Количественное определение у данного больного лизоцима, проведенное известным способом, показало наличие его в дозе 16 мкг/мл.

Использование предлагаемого спосо- 20 ба позволяет повысить чувствительность диагностики менингитов на 30Х, упростить способ за счет простоты подготовки и учета реакции и сократить сроки проведения исследований до 2 ч. 25

В таблице приведено количество обнаруженного лизоцима предлагаемым и и известным способами.