Способ определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции

 

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к иммунодиагностике. Способ оценки сывороток в серологических реакциях может быть использован для дифференциальной лабораторной диагностики первичного и вторичного имунного ответа в клинической и эпидемиологической практике, экспериментальной работе. Цель - повышение точности определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции. Способ осуществляется следующим образом: испытуемую сыворотку титруют в нескольких рядах полистероловой пластины с лунками и к первому ряду добавляют дифтерийный эритроцитарный диагностикум, а в последующих рядах сыворотку соединяют с возрастающими дозами анатоксина (например, 8, 16, 32 единицы МНД) и через 30 мин вносят диагностикум дифтерийный анатоксинный эритроцитарный. Учет результатов производят через 1,5 - 2 часа и оценивают по эквивалентности торможения. Наличие в сыворотке эквивалентного торможения свидетельствует о стационарной фазе вторичного иммуного ответа, а при неэквивалентном - первичный иммунный ответ. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ()9) (!1) (5I)5 G 01 N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (56) Приказ ИЗ РСФСР 1(- 575.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21).4005445/28-14 (22) 03.01.86 ,(46) 07.01.90. Бюл. У 1 (71) Пентральный научно-исследовательский институт эпидемиологии и

Свердловский государственный медицинский институт (72) H.Н.Басова, О.И.Ивченко и Г. И. Коростылева (53) 615. 373 (088.8) (54), CIIOCOR OIIPKQEHFHHH

ИММУНИТЕТА ПРИ ДИФТЕ РИЙН011 ИНФЕКIIИИ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к иммунодиагностике. Способ оценки сывороток в серологических реакциях может быт1ь использован для дифференциальной лабораторной диагностики пер- вичного и вторичного иммунного ответа °

Изобретение относится к биологии и медипине, преимущественно к иммунодиаг нос т ике .

Белью изобретения является повышение точности определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции.

Способ осуществляют следующим образом.

Испытуемую сыворотку титруют в нескольких рядах полистероловой пластинки с лунками или пробирках. Затем, начиная с второго ряда, вносят анти— ген последовательно во 2-й ряд 2 единицы, в 3-й 4 единицы, в 4-й 8 еди2 в клинической и эпидемиологической практике, экспериментальной работе. Гель—, повышение точности определения состояния иммунитета при дифтерийной инфекции. Способ осуществляется следующим образом. испытуемую сыворотку титруют в нескольких рядах полистероловой пластины с лунками и к первому ряду добавляют дифтерийный эритроцитарный диагностикум, а в последующих рядах сыворотку соединяют с возрастающими дозами анатоксина (например, 8, 16, 32 единицы IIHQ) и через 30 мин вносят диагностикум диЬтерийный анатоксинный эритроцитарный. Учет результатов производят через 1,5-2 ч и оценивают по эквивалентности торможения. Наличие в сыворотке эквивалентного торможения свидетельствует о стационарной фазе вторичного иммунного ответа, а при неэквивалентном — первичный иммунный ответ. 2 табл. ниц и далее. Через 30 мин во все ряды добавляют дифте рийный антигенный эритроцитарный диагностикум (ДАЭД/.

Учет результатов проводят через 1,52 ч, регистрируя проявления гемагглютинации. Для оценки эффекта торможения можно использовать количественный показатель — индекс торможения (ИТ), ко то рый в ыч ис ляю т по о т ноше н ию до з ы антигена в РТПГА к кратности снижения титра, цо сравнению с титром в РПГА.

ИТ дробные, меньшие единицы (1/2, 1/4, 1/8... }, присущи эквивалентному торможению, Белые числа — 1,2,4,8 наблюдаются при неэквивалентном торможении антигена IgM-антителами.

Для оценки этого положения были проведены опыты с выделением фракций

IgM u IgG из гипериммунных сывороток лошадей, которые провели методом бесколоночной хроматографии с помощью

ДЕАЕ целлюлозы.

Полученные фракции были испытаны

:в РПГА и РТПГА (табл,. 1) .

I;iêî у гп. гунных к дифтерии лиц тор.гожение носит характер эквивалентного.

В условиях гглановой иммунизации и иммунолагического контроля за состоянием иммунитета населения посредством только РПГА была оценена структура напряженности иммунитета к дифтерии у разных контингентов (табл, 2) .

Па основании анализа клинических

1 мате риалов и ре зуль татов ис следова ния сывороток больных дифте рией, ан гиной, бакте рионосителей токсигенных ! коринебактерий .цифте рии, а также здо ровых лиц, проведенных однократно и в фиксированные сроки и в динамике, были приняты следующие критерии опен- 20 ки состояния иммунитета при дифтерийной инфекции. антитела не обнаруживаются в первые пять дней болезни или к 5-му появляг тся в низких титрах (I: 10 ), а к 25

2-3 — и неделе титр повьппается до 1:801:320 и в дальнейшем возрастает, в

РТПГА торможение неэквивалентно (индексы равны целым числам — рассматривается как реализация первичного ответа; антитела до 5 сут обнаруживаются в низких титрах и к 7-10,цню титры их возрастают до 1:320-1:1280 †:2560, в РТПГА титры снижаются эквивалентно либо наблюдается смена зоны эквивалентного торможения неэквивалентным индексы торможения от дробных переходят к целым; такие результаты свой;ственны заболеваниям ранее иммунных щ, с проявлением вторичного ответа; антитела на первой неделе заболе— вания у пациента с ЛОР-патологией, выделяющего ток сигенные ко рине бактерии дифтерии, могут быть в значительных титрах, которые повьппаится в динамике относительно нерезко, в таких случаях результаты ТРПГА сходны с та— ковыми у иммунных бактерионосителей, не имеющих клинических признаков болезни; индексы торможения в обоих си50 . туациях дробные, отражают преобладание антител IgG класса, антитела у больных с Л01 -патологией, не связанной с возбудителем дифтерии, имеют, как правило, стабиль. надю динамику титров, некоторые колебания параиммунитетного характера на фоне инфекции могут регистрироваться, Из табл. 2 видно, что больньге дифтерией и больные ангиной не имели существенных различий по структуре титров антител. Лишь у бакте рионос ителей заметна доля лиц с высокими титрами антител (около 807) . Однако на основании результатов только РПГА высказать какие-либо обоснованные суждения об иммунном ответе не представляется возможным.

Пример 1, Больной П. Клинический диагноз . дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя, Сыворотка взята на 1-й неделе болезни.

Титр антител в РПГА 1:32, В РТНГА с

2 единицами антигена титр снизился до 1:16, с 4 единицами остался 1:16, с 8 единицами снизился до 1:8 и с

16 единицами — до 1:4. Соответственно ИТ составили 1; "; 2 и 2, что сви— детельствует о неэквивалентном торможении.

Полученный в РПГА титр (1:32) не противоречит суждению о диг1>терийной инфекпии и, вероятно, первичному характеру ответа. Такой ответ не содержит больше информации, в частности, о качестве антител. Параллельная постановка РТПГА по предлагаемому способу позволяет считать, что в сыворотке содержатся антитела к дифтерийному токсину (анатоксину), требующие для своей нейтрализации более высоких доз антигена, чем это нужно для нейтрализации IgG-антител, ИТ вЂ” целые числа.

Эти результаты однократного исследования на первой неделе болезни позволяют установить признак первичного иммунного ответа. у заболевшего.

Пример .2. Больная N. Клинический диагноз . дифтерия, подтвержденная выделением возбудителя, Сыворотка взята на 6-й день. Титр антител в РПГА 1:256, В РТ1гГА с 2 единипами антигена титр снизипся до .1:16, 0l

15344 с 4 ос1 ался 1:16, с 8 остался 1:16, с 16 l:16, с 32 l:16. Соответственно ИТ составил 1/8; 1/4; 1/2; 1 и 2.

Титр сыворотки в РПГА 1:256 на первои неделе болезни может свиде5 тельствовать о реализ ации вторичного ответа у заболевшего. В пользу этого эквивалентное торможение антител малыми дозамч антигена (2,4 и 8) . Однако РТПГА с более высокими дозами антигена позволяет обнаружить присутствие и таких антител, торможение которых нуждается в более высоких дозах антигена. Такое сочетание результатов

РПГА и РТПГА с разными дозами антигена позволяет охарактеризовать иммунный статус у заболевшего, обладавшего иммунологической памятью.

Предлагаемый способ определения 20 состояния иммунитета при дифтерийной инфекции имеет следующие преимущества перед известным. повышается точность определения состояния иммунитета, важноro для диагностики (на пер- 25 вой неделе у обследованных можно установить объективные признаки первичного иммунного ответа или вторичного); полученные в первые 5 дней результа1 ты могут иметь важное значение для З0 определенной части больных (ведение, лечение, иммуноте рапия); определение типа иммунного ответа к концу первой началу второй недели опережает возможности известных способов; раннее выявление первичных дифтерий в очагах

35 ипи контингентах риска повышает эшфективность эпидемиологического надзора, Объективное контролирование состояния иммунитета посредством пред- О лагаемого способа необходимо для оценки эффективности иммунопрофилактики (препараты, дозы, схемы и т.п.), что не достигается известными способами, более зависимыми от динамичес- 45 ких обследований.

Способ пригоден как элемент дифференциальной диагностики дифтерии и сходных с нею заболеваний другой этиологии, бактерионосительства токсигенных коринебактерий дифтерии. На такой основе могут быть усовершенствованы профилактические и противоэпидемические мероприятия..

Способ обеспечен всеми необходимыми средствами для применения в условиях практической лаборатории: коммерческими диагностическими препаратами для РПГА и РТПГА, стандартным анатоксином (полуфабрикат вакцин), стандартным антитоксином, отечественными пластинками для серологических реакций, не требует сложного оборудования или высокой квалификации персонала.

Способ экономичен и может быть осуществлен при наличии малых объемов сыворотки (0,1-0,2 мл) .

Формула изобретения

Способ определения состояния им" мунитета при дифтерийной инфекции путем добавления к исследуемой сыворотке дифтерийного антигенного эритроцитарного диагностикума с последующим выявлением специфических антител в реакции пассивной гемагглютинации, отлич ающийс я тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно ставят реакцию торможения пассивной гемагглютинации с возрастающими дозами дифтерийного анатоксина, сравнивают результаты реакций между собой и по неэквивалентному снижению титров антител определяют состояние первичного иммунного ответа организма, а по эквивалентному определяют стационарную фазу вторичного иммунного ответа, 8

Таблица

1534401

Доз а анатоксина МНД

Тест

Титры антител во фрак циях ндексы тормоения для

ХрМ (а) IgG (б) а б

РПГА

РТПГА

16

1/4

1/4

1/4

3

4.

Индексы эквивалентного (б) и неэквивалентного (а) торможения.

Таблица 2

Группы об- Количество следованных

Распределение по наличию антител в титрах, 7.

Менее 1: 20 1: 20-40 1180-160 1: 320 и более

12,5

31,25

31,25 25

36,0

48,0

40,0

24,6

4,0

12,3

20,0

15,1

3,4

3,4

l3,8 79,3

Составитель Г.Крюкова

Редактор В.Петраш Техред M.Äèäûê Корректор С,Шекмар

Подп исное

Тираж 502

Заказ 39

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

1l3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "11атент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Больные дирте рией

Больные ангиной

Здоровые Бактерио- сители

1 280