Способ иммунодиагностики посттравматического увеита

 

Способ относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использован при лечении воспалительных осложнений травм глаза. Цель способа - ранняя доклиническая диагностика посттравматического увеита. Для этого проводят реакцию ингибиции миграции лейкоцитов с кровью больного в среде 0,2%-ной агарозы, а в качестве антигена используют очищенный белок сосудистой оболочки глаза. При соотношении 4<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">5</SP> лейкоцитов на 10 мкг белка антигена и индексе миграции лейкоцитов 48-86% диагносцируют посттравматический увеит.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

О1) 5 G 01 11 33/5 3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИНМ

ПРИ П НТ СССР (21) 4247295/28-14 (22) 19.05.87 (46) 30.04.90. Бюл. Р 16 (71) Рижский медицинский институт (7?) И.Я.Валькова, А.М.Сочнев и Т.П.Петрова (53) 615.375 (088,8) (56) Клинико-иммунологические пока. зания к выбору натогенетического метода лечения посттравматического уве ита. М., 1984, с. 11-13.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть. использовано при лечении воспа лительных осложнений травм глаза.

Целью изобретения является ранняя диагностика посттравматического увеита путем его доклинического выявления на 2 — 6-"r день после травмы, Способ осуществляется следующим образом.

Из вены в асептических услбвиях берут 5-6 мл крови в пробирку, добавляют 1,5 мл антикоагулянта и 0,60,7 мл желатины. Помещают в термоо стат при 37 С на 2 ч. Надосадочную жидкость, содержащую лейкоциты, центрифугируют в течение 10 мин при

2008., затем центрифугируют трижды по S мин с раствором Хенкса также при 2008, Клетки лейкоцитов подсчи„„ЯО„„1561639 А 1

2 (54) ГПОГОБ К21УНОЛИАГНОСТИКИ ПОСТТРАВМАТИЧГСКОГО УВКИТА (57) Способ относится к медицине, в частности к офтальмологии. и может быть использован при лечении воспалительных осложнений травм глаза.

Цель способа — ранняя доклиническая диагностика посттравматического увеита. Пля этого проводят реакцию ингибиции миграции лейкоцитов с кровью больного в среде 0,2Х-ной агарозы, а в качестве антигена используют очищенный белок сосудистой оболочки глаза. При соотношении 4 10 лейкоци5 тов на 10 мкг белка антигена и индексе миграции лейкоцитов 48-867. диагностируют посттравматический увеит. тывают в камере Горяева, концентра7 ция доводится средой 199 до 2 «10 /мл, ресуспендируют в 0,1 мл 0,27.— ного раствора агарозы. Микрошприцом смесь раскапывают по О, 002 мл в лунки планшеты. После затвердевания капель в течение 3-5 мин при комнатной температуре добавляют по 0,1 мл среды

199, содержащей 107. сыворотки группы

АВ (ТЧ) и по 100 гД/мл пенициллина и стрептомицина, и добавляют 0,01 мл антигена, приготовленного из сосудистой оболочки. В контрольную лунку вносится среда без антигена. Планшет помещают в термостат при 37 Г на

18-20 ч. Площадь миграции регистрируют в проекционном аппарате. Измеряют диаметры зон и результаты считывают по формуле (индекс ингибиции MHE ра1 ии): 1561039

Средняя площадь миграции с антигеном

Средняя площадь миграции без антигена

D > Dy — ds d+

100, D, D — d, d

При иммунологическом обследовании

45 104 больных с проникающими ранениями глаз у 15 из них была. выявлено снижение индекса РИАЛ. Своевременно проведенное противовоспалительное лечение посттравматического увеита в до50 клинической стадии позволило предупредить развитие его, a также тяжелых осложнений и сократить достаточно высокую остроту зрения: у 7 больных из 15 острота зрения равнялась 0,41,0, у 4 больных - от 0,1 до 0,3, И только у 4 больных с посттравматическим гемофтальмом (2 чел.),и травматической катарактой (2 чел.) зрение было снижено от 0,005 до 0,03. где 1) <, П,, D>, D< — соответствующие ди аме тры н ар ужных эллипс ов с1 Я (3 (1у соответствующие диаметры внутренних эллипсов.

Для проведения исследований антиг н сосудистой оболочки, используемый

sl реакции ингибиции миграции лейкоцитов (РИИЛ), готовят следующим обра1 з м: сосудистую оболочку выделяют и глаз погибщих недонощенных детей.

П оизводят дезинтеграцию с кремниевым песком (в присутствии трис-НС1-буфе.ра РН-7,2) в фарфоровой ступке в те- чение 1-2 мин. Затем гомогенат подвергают ультразвуковой обработке при

40-60 Вт в течение 30-40 мин и центфугируют в течение 20 мин при 1520 тыс. 8. Проводят осаждение белков в надосадочной жидкости с помощью раствора сульЪата аммония (конечная о, концентрация 507.) при 4 С, центрифуФируют в течение,30-40 мин при 151

0 тыс. g осадок разводят в растворе трис-НС1-буфера PH-7,2 до концентрации 0,5-0,7 мг/мл белка. Проводят роматографию методом гельфильтрации. обирают фракции, контролируя в них

Содержание белка с помощью спектрофотометра при максимуме поглощения оптической плотности — 280. Содержимое ( фракций I пика при ОП-280 составляет полученный антиген сосудистой оболоч си глаза.

При выявлении индекса ингибиции миграции лейкоцита в пределах 45-863 ставят диагноз посттравматического увеита.

Пример 1. Больной Л., 27 лет, поступил в глазное отделение с проникающим ранением роговицы, .Внутриглазным инородным телом, травматической катарактой. Острота зрения справа 0,05 коррекции нет, слева - 1,0. ВГД справа — Т„ . В тот

Ме день сделана микрохирургическая обработка раны роговицы с наложением. пвов. Внутриглазное инородное тело удалено диасклерально магнитом. На второй день сделана РИИЛ. При подго10

40 товке антигена гомогенизация со стерильным песком осуществлялась в ступке в течение 1 мин, а ультразвуковая обработка при 60 Вт в течение 30 мин, Индекс миграции 78, 27. Поставлен диагноз доклинической стадии ПУ и начата противовоспалительная терапия. Несмотря на лечение через неделю при повторном определении РИИЛ выявлены еще более низкие данные индекса миграции — 72,67., а через неделю — 70,i

Выписан на 32-й день с остротой зрения правого глаза 0,005 эксцентрично. Пример 2. Больной О., 30 лет, поступил в глазное отделение с проникающим роговично-склеральным ранением правого глаза и выпадением радужки. Острота зрения справа 0,1 коррекции нет, слева — 1>0. ВГД справа Т 1 . В тот же день сделана микрохирургическая обработка раны с вправлением радужки. На второй день сделано определение РИИЛ, результат— отрицательный. На 5-й день иммунологическое исследование повторено, отмечено торможение реакции лейкоцитов до 82 3Х, на 7-й день — до 72 ".. При подготовке антигена в данном случае гомогенизация со стерильным песком осуществлялась в ступке в течение

2 мин, ультразвуковая обработка при

40 Вт в течение 40 мин. Поставлен диагноз доклинической стадии ПУ, Начато активное противовоспалительное лечение. Выписан на 20-й день с остротой зрения в правом глазу 0,6-0,7, ВГД вЂ” 22 мм рт.ст.

5 1561039 6

Формула изобретения

Составитель И.Башкаев

Техред М.липык Корректор С.Ыевкун

Редактор М,Бандура

Тираж, 507

Заказ 976

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по,изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Но ни в одном глазу не развился посттравматический увеит.

Способ позволяет диагностировать посттравматический увеит в доклинической стадии на 2 — 6-й день после травмы.

Способ иммунодиагностики посттравматического увеита путем добавления к лейкоцитам больного антигенов ткани глаза и последующей оценки индекса миграции лейкоцитов, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью ранней доклинической диагностики, в качест5 ве антигена используют очищенный белок сосудистой оболочки глаза, реакцию ингибиции миграции лейкоцитов проводят на второй — шестой день после травмы глаза в среде 0,2К-ной

1ð агарозы, причем реакцию ведут при соотношении 4 10 лейкоцитов на

110 мкг белка антигена и при индексе миграции в пределах 48-867 диагностируют посттравматический увеит.