Способ деконтаминации перевиваемых культур клеток животных от микоплазм

 

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения чистых от микоплазм клеточных культур, применяемых в вирусологической работе. Цель изобретения - повышение степени деконтаминации культур клеток от микоплазм . Сущность способа состоит в комбинированной обработке перевиваемых культур клеток тиамулином (10-15 мкг/мл) и этонием (5-7 мкг/мл) на протяжении трех лассажей. Этоний наносят непосредственно на монослой. Учет результатов на деконтаминацито осуществляют путем высева на элективные среды, окраски ДНК-флуорохромом-оливомицином и постановки ИФА. Культуры клеток свободны от микоплазм на протяжении 15 пассажей (срок наблюдения), С

СО)03 CGBETCHHX

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) g1)g С 12 N 5/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НС)МИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬП ИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4661051/13 (22) 16.02.89 (46) 15.06.91. Бюл. Р 22 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.P. Коваленко (72) Л.П. Дьяконов, Д.В. Лобунцова, И.Л. Куликова и l,Ã>. Гальнбек (53) 578.085,>23 (088.8) (56) Расулев ОЛ!, Совершенствование методов диагностики микоплазмыконтаминации и деконтаминации культур клеток животных: Дис.канд .биол.наук.

N., 1987, с. 94-99, Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения чистых от микоплазм клеточных культур, применяемых в вирусологической работе.

Целью изобретения является повышение степени деконтаминации клеток от микоплазм, достигаемое обработкой клеточного монослоя этонием при концентрации 5-7 мкг/мл и антибиотиком тиамулином при концентрации 10—

15 мкг/мл на протяжении трех ласса, жей., Пример 1. Перевиваемую линию клеток ЛЭК в концентрации 100 тыс./мл

2 (54) СПОСОБ ДЕКОНТАИИНАЦИИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КУЛЪТУР КЛЕТОК ЖИВОТН11Х ОТ 1ИКОПЛА311 (57) Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения чистых от микоплаэм клеточных культур, применяемых в внрусологической работе. Цель изобретения повышение степени деконтаминации куль-. тур клеток от микоплазм . Сущность способа состоит в комбинированной обработке перевиваемых культур клеток тиамулином (10-15 мкг/мл) и этонием (5-7 мкг/мл) на протяжении трех пассажей. Этоний наносят непосредственно на монослой. Учет результатов на деконтаминацию осуществляют путем высева на элективные среды, окраски

ДИК-флуорохромом-оливомицином и постановки ИФА. Культуры клеток свободны от микоплазм на протяжении 15 пассажей (срок наблюдения). высевают в 250 мл матрасики. Клетки культивируют на обогащенной среде

ФГК-с с 10% сыворотки телят. В ростовую среду добавляют тиамулин 10 мкг/мл, а после формирования монослоя вносят этоний 5 мкг/мл. На следующий день клетки пересевают, а цикл обработки повторяют трижды. После третьего цикла обработки культуру клеток лроверяют. на наличие иикоплазм на .элективных питательных средах: 2-37. ФГМ-с и среды 1":- 8, ДИК-флуорохромированием, ИФА.

В результате получают линии клеток свободные от микоплазм. При даль1655982 формула из обретения

Составитель А. Маныкин

Техред Л.Сердюкова.

Ред ак тор Т. Ла з ор енк о

Корректор С. Иекмар

Заказ 3523

Тираж

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 нейшем культивировании на протяжении 2 мес (20 пассажей) без препаратов клетки свободны от микоплазм (срок наблюдения).

Пример 2. Перевиваемую линию клеток ПТ-80 в концентрации 80 тыс./мп высевают в 250 мл матрасики. Клетки культивируют на среде 199 и ГЛА (0,5 -ный раствор гидролизата лакталь-10 бумина) в равных соотношениях с 10 . сыворотки крупного рогатого скота. Б ростовую среду добавляют тиамулин

15 мкг/мл, а после формирования моноспоя наносят этоний 7 мкг/мл. На сле- 15 дующий день клетки пересевают, цикл офработки повторяют трижды. После третьего цикла культуру клеток проверяют на наличие микоплазм..

В результате получают линии кле- 20 тфк, свободные от микоплазм. . При дальнейшем культивировании н4 протяжении 2 мес (20 пассажей) без препаратов клетки свободны от микОплазм (срок наблюдения) . 25

Пример 3. Перевиваемую линию клеток ЩС в концентрации 90 тыс/мл вц севают в 250 мл матрасики. Клетки культивируют на среде 199 с 10 сыворотки крупного рогатого скота. В рос- 30 товую среду вносят тиамулин 10мкг/мл а после формирования монослоя вносят эФоний 5 мкг/мл. На следующий день кпетки пересеваЮт, цикл обработки и вторяют трижды. После 3-ro цикла о работки высевают на .элективных пи-.

35 т тельных средах 2-З ФГМ-с, среде

N-" 8, ДНК-флуорахромирование (оливомицином), ИФА — отрицательны. При дальнейшем культивировании на протяжении 2 мес (15 пассажей) без препаратов клетки свободны от микоплазм (срок наблюдения) .

Способ деконтаминации перевиваемых культур клеток животных от мико.плазм найдет применение в вирусологических и биотехнологических исследованиях, позволит провести своевременную диагностику культур клеток и получить культуры клеток, свободные от микоплазм.

Способ деконтаминации перевиваемык культур клеток животных от микоплазм, включающий обработку культуры клеток 10 -ной сывороткой крупного рогатого скота, поверхностно-активным веществом этонием и антибиотиками, проведение последовательных пассажей и учет результатов на де| контаминацию по высевам на элективную питательную среду и окраске ДНКфлуорохромом, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения степени деконтаминации, этоний берут в количестве 5-7 мкг/мл и добавляют его непосредственно на монослой, а в качестве антибиотика используют тиамулин в количестве 10-15 мкг/мл, обработку монослоя препаратами проводят на протяжении трех пассажей, а окраску проводят ДНК-флуорохромомоливомицином.