Способ получения микроклубней картофеля

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии, з именно к способам культмонропания изолироваимь х тканей и органов растений, i . можо Оьм ь использовано мри ьыполнеи /.и по селекции и семеноводству сортов картофеля. Цель изобретения - упрощение способа и улучшение качества микрокл бней. Способ состоит в том, что исходный материал в вида СИГГ/CHTOQ стебпя с почвой культивируют п культиаацпонных сосуд&х нэ жидкой питательной среде, культивируют на поверхности гигрофильного вкладыша на питательной среде при освещенности Е.0 8,0 тыс. лк, а 3-4 нсдгл -. питательную среду корректируют, увеличивав количество сахарозы, цитокининоо и пр.опррата тур, после чего сосудь; псмещпют г темно;/ но 2-3 недели для образования мпгроклубчей.

« „, >.-, -) < >< > ГI!>Х

> г;",!1> ... 1 <1: («7s А 01 Н 4/00

f 7 . f /,I i,"i n> (

Г!Г) !.,".:!,! i-т> !, >:I. <1 От > i -,! т(<<я .! (1<" -:, i i СС Р

Gi !! 1САЯ! 1Е < (ЗОБРЕТЕНИЯ

К ABT0PCKOI (:Б ЛДETEAbCTRY (21) 481Г3272/13 (22) 21. :. :.<<О (46)?3.01,92, Б!Ол N- 3 (71) Н,"".-:o ><00ÃÐ;;Oвате< <,ск!.>1 инст1 .т y ò карто+ ельноl ) хозp

БсннОГО Обь".д<11я и >.а(тГ EJIE <сдГTH / (7 Н.В. Дон«ц, И.Л. Го,нец. С.М. f. .>с;н и

Л.Н. Трофа «ц (53) 57<>.0".,5 23 (OSB.<",) (55) ТрофИЛ<Ец,<1.14., С>СтаПЕНКО Д.П БО11КО

В.B. 3!i:épó .. Т.B., Дсне; Н.B. Оздорс<влен<<е и ускорсннсе F>03;1>IO;Ii;«L ого картофеfILI. 1 <1.. 10<35 35 с.

То<аг Р., Ее(;аda Р . Кс<7,:de- (

Е., 0cdus I.h. Indaction and )ве of In <<(о

p0tat01обе s. (©.(i>iсiIiaf,Ip 19o5, 3 4;1-5 (54) СFI< <" Б П< . IY 4==!-IÈß <1(4>РГ<Г .) УБН Е (4 F;/ Р Т О

Изобретение отнес,<тся к сельс«охо"-яйствс><<<011 б 01ехнолОГ 11. а илlенно к способал< ку-,ьTilDL!сов . я И30ëèðОванных тканей и О, >Ганса вpa." ений и лlо. »= т быть испо;;ьзо»-. <>i,Il>-.í.:LI ра<,:т по oåлекции и ссл<сноводст.<7 сортов картофс.1я.

Из< стен сп:соб г:. .-у !он<<а f11 рок 0ней для поддср > alii кол":åêöèè сортов, вкл ю«зю!1.>ill 4. с!1>..-вон<1 раст. IIHII if> ч11ГО и Г i- ГaД>>У : !P>1>< .:, Il < 3, Ризой ° <н:., >0

<, с Г Гi f>c 1 в у Io I! 1 >о о б Г >

ЗОВ<>1 I; О ": 7<(»«. (I с сп<лсof)a . <> <,>1 1 "я

f<7o I> n:a i aавиc.:I:ос.. <)ез.пыл-,. вч< -,и

B0. l>> .;i R I l;:;, б< .i I>UI:<> 11, < ." > < > !>Ii р.>31,, -> 1«1<Г-Г>«<1, «0 зтп:<Г с«,, " i(>a ! <.С>(>азу><>1(57) Изобретение относится к сгльскохозяй с<вснной биотс>:I:Oëoãêè, a L<;.<е!и<о к спосооал< куr>t тиви(>ОГ<ан я изолирова!!!!ь:х

Тканей и органоь растений, 1. Л<о)КГ:- бь. > ь

ИГ Г>0< ЬЗОВдНО !1()и ВЬ1Г>,)Лисii!;11 P< Fi<>T flO СЕf Е1.I<И<1 И СС>

Цел!. Изобрс тсн.: я — упрогцс;<ис способа и улу <шение ка !яств". л<икрокл, бней. Спс<:об состоит B тол!, «т0 исходнь и r „-30.1 I,>, !1! Tl иру;от в культивационнь:х сосудах на )хидко<„питательной npaде, культивируют ха поверхности г1<грофильного вклa,tbi8,0 ть с. лк, а ч рез 3-4 нсд .ли питатсль I<",о среду ко;,р)екти<7< >О, увели«ис:..я количество сахарозы, цитокининов и ii!: Ilаратд >УР, после <ег0 сосудь: ио.. е«<ск)т Г тел<но:, !<а

2 — 3 недел:1 дл,". образован!<я л<и ро«луб.нис растения, на инз ощееся с B<." px 1

<><.гетативной !.<ассы, так и для кл>бнеобр .зования используется одна и Та .ке пи;отельная срс/<,i. не обсс! ечивающая в досГд10 !ной Л1сре п01 (<обнос > и panти>ел 1:Ого обь «;та Ila стад.»: 1,>роги . Iaiнной массы (изб 110 <;<ос: л и;1чссксе >ta>;llnIIL< излишне Г-.н.оков сод:0 .< .<1<<1>е Г«<,i)i и «3 с1, Дil<и

К>><,(«;ЕР(7(», >!Ä1,;<ИЯ (I-,ЕДОС > Л ><1 .О< ОСЛл<1, Иiir Yp> 1, . >;л«(» l>f >л ti ;Ч> > r > «)) "а. т: - <» .:1 V", (:.T>f ", I

i тз . ° тс <;о « =it ны,т спэ" oб нF. ctiL)t<àå f с0-)тое) <о > .->-, t а прод >))х.:)тельнос1ь 5 г(, -,с;.Ого;> г -,, з) >1.3;)тс зт()(г),>,ля к-.>;,.

3,>«>,», :..> ., 3) Cftf>)tt>> Ct< > Tr!P (3! f1

i< > i (,с и cit c I L:dit t>f гог>(>,л»т>< ы>з;>: r g> Tp „I ос ;,от>1" sc Yo! o

j (rrl 1iI с, ;. ., (.",";. ;>. - i<"" са: роэ)>;> ц(1- 10

> -

3о„инlltf >о. а т- " = пpo>t ., лж)1тс(tüt

Из))естен ".;t . .<. ()ony et я микроклубllfiй f) Y", tÜTyр П VI(TO. R.,f . ГЕ-,И Най 11аСС .ь КУЛЬ)ИЕИров>ание указаннь)х колб на специальных шей орах, обеспе:: еаю<цих орбигальное качание OL;TaTc! ь)< и сред(< и освещений 20 св том с .") . ).порхов tt

Недостатком указанного способа является необходимость 1)спольэования дорогостоящего оборудования. обеспе«иеающсго 30 орб):тальный режим ка«ания. Существеннь м недостатком способа является низкое качество клубHI«:1. проявляю:цееся в том,что они имеют различные 11, в подавляющем большинстве, недо "аточные размеры. раз- 35 росш<)еся чечееички. Gco00 следует подчерс;f jTb в качестве недоста3ка способа тс обстоятельстю. что в процессе выра(циеания л<икроклубней используются недопустимо высокие дозы синтетических 40 цитокининов (кин тин + бенэиламинопурин) — 5.0 — 5,5 м< /л), тогда, как известно, что превышение содержания в питательной среде синтетичес Ltx цитокининов выше 1,1 мг/л вызывает стет):сти-;вски достоверное 45 повышение частоты хромосомнь<х аберраций и, следователь«о ведет к нсобратик1ой потере генетическо)=. идентичности сортосбраэца.

Цель изобретения — упрощение способа 50 и улучсвение ка <естег микроклубней, ПО: —.сеченная цель дос)игае>гся тем, что исходный < <зтериал в виде сегме«) oft стебля с почкой (чере ь<х 55

C0CУД2Х l(а . ".1ДКОЙ П" та > С itt)ДЕ ОО "C печи)еа)още)1 благопр1;ятные.ycr oDLLfc для укоренения азот<)тс;-;refit обьектов и нарастания вегетац) OHt

22,3

083 к> ". „тт-! с. 1 ">y!OT )<а г)О" tor,t>0> iit !1: I)ii f L-It>it toГО >;i.лаДЫ(1<а, 9t>tt IO>.>< t>tt>J! 0. I<3IIР ."."С)), ИЗ

Г "1 l . 1 t I I (. 1 11 л "Г К» Х и Л» С С ((С Г Е Г t > < Ы Х (3 Олокон, фил<,)р0 ° -".!tt t>)и <сско<1 бума(11. Р:,cтит<зльttt,с объек куль(»::ll()yiîò пр,l Tof .rl(>p;3Tурс 22 ? С и

L1t1Tcttct f3i:st (3 iIp-"j1 л;..-, 5,08,0 тыс. лк, причем пита(ель)<ая срсда).>;лючает сахзрозу;< 10000-30000 мг/л. а T(tt(e р(гул;.торы рос)а — к»истин 0.01-0,1 мг/л, фepyito!.yto кислоту 0,01- 0,1 мг/л, индо <илуYсусную rècëoòó 0,5- 3,0 мг/л.

После развития достаточного I .Oë»÷ccòва ее(ета3»гной массы, T. е. через 3-4 нсд.

К У Л Ь T И f3 11 ) 0 > а Н И Я Г < О С Л Е Ч Е Р Е И t: О (3 а t < ь1 Я . f < И Т штевену>о среду ropp(.YTI, Toot). введен."ч концентрироеа«ных добавок То ким обоазом, чтобы poèåcòè содср)(ени сахарозы в питательi:îé сред" до 600001 00000 > Г/Л, ц» ТО>:И НИНОВ (t н > FACT 11I i 11. : >1 бс> <сИ лами«с>пурин) до 0..)-0.5 мг/л, препарата ТУР до 200-500 мг/л и аденина до 5.0-40.0 мг/л.

С целью усиления»ндукции клуб»собр "зования культиеационные сосуды с матер»алом f )of.;ещают в темноту или на слабый рассеянный сеет - (0,1-0,5 тыс, л)окс) на 7 3 нед., после чего в слу-<ас необходимости о0 разовавши..ся микроклубни доращиьа)от и озеленяют при указанных ранее условиях, Питательная среда для укоренен))я черенков и наращивания еегетацио)<ной масСЫ ВКЛ)ОЧаЕт:ЛЕДУЮЩИЕ КО(л ПОНЕНтЫ, Cif /Л:

Аммони)1 азотнокислый 1650

Кальций хлористый деухводный 440

Калий фосфор»окислы<1

Од н о э а !1 е I це н >< ы и 170

6орная (.ислота 6.2

Марганец с рнокислый четырехвод.-<ый

Калил иод»етый

Натрий молибденоеокислый. деухеодный 0,25

Мезо-инозит 100 . <икотинамид 2,0

Тиамин 1.0

Фолиевая кислота 0.5

Калий азотнокисль,й 1900

Магний сернокислый семиводнь<й 370

ТРи>)он 6 37,3

Железо cepr

Цинк сер<>окислый четырех()однь<й 8,6

Медь серно):ислая пятиводная 0.025

Кобальт хлористый шестиводный 0.025

Пир»доксин 1,0

Кальции па;<3о)е<<ат 10,0

Глицин 3.0

Рибофлавин 0.5

Цианкобаламид 0,015

Г.

1 >,(!

1;г, . и > ° ,, Г> 1..=, -> 0 г!

> . „,- .,1 - > - г т (1 », < 1! >,, f .„,, „Г, i». °

/ . > >э.

„, . > ..t1

<",»"- Of(«lI;-< .t>> iiI; Гогя Ji, > но(0 г(>t! 1! >")< с>t! 1>.. и 1:I -:л" к У", « ° > !л I n," L; >I » c ° I t< 3 ä

KL1гЛОТа В Уха.";а tii! l >2 VOH!(г Нiой > ((ЯХ "..<» Ективно l .I,J1».;; n>óeT укоренен!" е чер-.нко= стью, уке г 3 3- ч сут куль!!1в(1рсв-!и!(я глатср!К(>,ë",энэ-..:<(:Ту она полно" тью разрушается и не otoçt:lt>ает отрицател!Нioro er;.",-;НИ!! !<а Р., > 1> ИЕ И>. !УЦ!)РП> а »;„ y V(Рнг 1

0TfIl <» F (» Ji =,;CT (iL Я ()0."teв СТа!.!, Л Ь iol1 НЕ, стно!i спосог>. Следует по„> < I;;:H,òt,, ч>0 разрушение и,дол()лукс сно, ислотb! nccfIе -.ь<пслt>t- -ич (.:.; Бозло;ve„(,7, (1.унvL>,!, (и, индукцl!я укоре

МО><(НО ТЬ,(г,. И>! "(<ИЯ С > iot" а У) Г)IIIUG

t(!ti!> б(> .зг а ни)I H3»езо(,аснс уровне экзогенных !(>Tovi i<ènoв (0.3

0.5 !Лг/fl). F. ОTëlë- ие гт псс(бэ, избранногo в качестве. прот(.типа о которол.v таi: nй баг ан с д(ст>i(ается т!)л ы".о п р:1

К О и Ц Е и: t f f! !! « I 3 > 3 0 г С н tl t>I 7 I(I . т 0 к L l н i i H On 6 на уров).е 5.0-5.5 f.;r/1

Ферулы(:ая v!:0(1013 в указанных кс)<ЦЕНтРаЦИЯК !(Ст;Павт 7ЭК СИНЕР(иг; аУКС1> н О в (и н д (» .! и л > >; с у с н а я к 11 с л 0 т а и благог>рият,".т в,>(т р 13Б((т!1>г . >;,), (> )ni;3 >НЫХ КOPtie>!.

Воз <0 IHocTL, (суш=.ств;;-:..1:я >,oppe!;тиРОБКИ СОС.а а n 1-атЕЛЬ> гв ;.РЕД<,i В ПРОЦЕСсе кул ьти ви рован ия.;,îсти гае(< ая посредством использования (>;. ро< .;Ль! ..; „ вкла-.!ша, гоэволяет обеспеить более !(н< >->- тенс1-ануа инду;цию клуб<>eob„330(ëн;1я. по срэвнс«,(ю со способе(и. Избран!!ь .: с качестве аналога. г>уте .. увел; ен(1 осм:тичеслого дэ.-"",ен!.я пит,",.;" ьнсй ср ;,ь, no:-ышения концент>-Лц<1 саха!)Озь(, а тй ; е устранить Горто.-,oi(. р;<зл« .:>я пг) чувс. тельности к индукци:1 клубг<ео(>разо(<а»ия благодаря в(ед. ><1è!о n„onnI::-.та T Ð, Il p L1 t. е р 1. Оfl j> деля . Оп !",-1аль I t.>LI

ЧСРЕН;0 > 1; и;>(;! lÈ! ЗН>1Я;" ГЕ; ЦИО); -ой

>. >

f1>>(c i Д ° >»- 1г

" а (/ (1 31 . . iii>; I! I>1 ., (, >I> . 1р,>з, HLl ()Г><(. Г Г. ", . .. III>! . ЕЛ!.!> 1 >,",Рг (,I сОД. „> :Лi Я I .I . ." I>(,".:I л .! .:> !»,(;;;;>I li .". .!1, с

;1 >:, 1 >., I! I , I л 1: 1: .! H с > . л (I o H ° i I I ) o, >,, . 1 ..

CLlt .: )\ (. >....> >> !Ii!t »I (>. !\ >Л l, i>n Co

I .> >

° "> (; ..,.;. I>!. ° I >. ° ti . > ã-II!i, > (I I =(= ч,,« - .! б), r>r 3 с();, > .:,(l....,. >

0: .. -„„:, .,.; Г е пие vo(»!(>;,э. .", Ой t.3",.— г >,>

Полу ieHH!>Io данн!(3 г I> :,nставл(знь! а -,áë. 1

5 Пример ?. Изучал!! 1 -3>,ежность

>-,етодй. otinåделяе ",ую как отн )LI . »I!e числа г рйстсн ",!1, Образовав!((>1х vfl>I>б><и > с>Г>Щел".у

4!>СЛУ " > ÎJLНЬ!Х ЗКСГЛа! T(<ТО(3. РЫ»й>К(Нн>IIO

",; про(, нтэк (табл. 1).

20 В к, сстве первого вар! ан1(1 о»:,та i!(,польз: вал ", г>посо >, избранный в клчг>стве

3itIl I0r-"., вто>>oгo спосо>3, изб>>анны! в кэ честг прототипа, э тре.: ил< в;.ри ttiтом слу7«fi пре,tr.ага: I..сгоб.

25 П(;л ченные j<.itíi.I . свидетельс-Буют о

ТОМ, ->та Г рв-,",Л.> а .;)Ый СПО" (б (!I>eС(>г«ЧИВБЕТ ! ы с Г> к L1 Ll " ы х О Д л) а с т е H!1 I!. (> б р (> 3 0 Б (1 в ш i У, (лик 3скл,+»!1, и э>от показатель м(.t:I«nf заI

ВИСИТ СТ Сг) IJÒÎÂÛ > ОСГ 5C I I > I 0СТ Г >, РЛСТ!;Т(f! Ь30 НОГО 3()ьв. ;ТЭ.

П р и м (> р 3. !>1.1, <«ли пр"д,a>".11 f ьность г>вон(да. Необхоf;I;t,;(,(о д "i г;,;>л1: 00>

Бэнд,; >, i k Pot flУ5>if. !t >: l > 0J>>t<- > 0 из

>Захх! " . . 3!>(ПГ)к(!За>T(.Лей ti1i li >!»>К t,t> З).0

35 нол"..1; <о ть и тсх! Олo!L «; ос-; ..по(:(>г>", БаPL а >it! . Э>((3 ПГ3! (1 > !

4з дан <.".!.-. таг;л. .) в (дн(,. «то предfl;!i.:= .1 ь,й сп особ ol! ((t,!;tie> с г",it àåò "я

0Т 1!3 <сстных бол " кО»бтк(!л1 (>г ..:!<Г>дол<.

4(3 t<еоб одиt- t,! t.! для форt.I,I)0(3а!<.7>, миi:ðоклуб-<ей, Пример 4. Onределяли оптимал.нро инте«сi" ã>Hoñr. осге(де!.ия дг,л tlйрз(!1(<вания (лэкгимальной вегетативной (.эссь(.

45 (1з таб1. 4 видно, что макс((ма1t ное развитие растений 11(3>хно достич(, при обеспечеHI .I1 интен-.ивности î„ p(гцения на уровне

" 8 I:!с. лк, Еол>.-О Ii«эя ос )е!цен(<ость >!е обесгечив(<е1 мткси if,t,.>if:I>,»î, не поэво "ле1 (",олучат(;,ос1;>т(>,! î i .pennü х ми)роклубнсй.

П р и f, е р 5 Ог:!..Оде(>яли 0(1>!(мйль.<ый

c0cT3D flit iател(t.çÉ с()гды д1я 11tiдуt:.(,I!и

vл, бч>ео,,Лазо.:,. !1(> ii tc) J».t,,) ii! i II>0 I СО пр. ц ду

jOI!(pi. (>i, > l IÃ f» III Ël! (> Г»0 I I >>T> С3!>! I

f>1 ."лoгзt; f сгlосг Гом. (>, fili »!т., О> тэ . I

170Я 50

G< рочнь!е р стения кар<офеля сорта Резерв. Результаты с пыта оце>:инали по оыхоДУ >ion>-<>;é. < микРо>:лУГ>ней ч-..>Рьз 50 сУт по"„ло прсцедур > и><дугции клубнеобразования >;! бл. 5). 5

Следовательно, с целью Bl.>flîë><ñ><è÷ процедуры индукции >.Ró0<:ñîáðççl необходи:. о скоррек ир;,<,ать состав питательной среды таким образом, чтобы довести соде, »;ание са» "<. ог:v,ë 60000-100000 10 мг/л, ц<1токининов. напри. ер кинетина j

0,3-0,5 мг/л, аденина до 5-40 м< /к > репарата TYP до 200-5 J.< м. /л.

Пример 6. Изучали роль гигрофильного вкл- дь.ша и жидк. и пи гатег>ьной среды 15 на эффект< вность осуществления способа, Опытный вариант вь>подняли в соответствие с предлагаемым способом. Контрольный ваоиант отличался от опытного тег., <то вместо гигрофильного вкладь<ша и жидкой 20 питательной среды для наращивания массы использовали агаризооанную питательную среду. В качестве объекта исследования использооали растения картофеля сорта Гатчинский. 25

В опытном варианте образовались более крупные клуб» л. причем после инициации клубнеобразования в этом варианте. в отличие от контрольного, осе растения сохраняли жизнеспособность. 30

Пример 7. Изучали пригодность микроклубней, полученных чо п редлагаемому способу,для идентификации сортообразцов по изоэлектрофоретическим спектрам белков. Изоэлектрофоре<ические спектрь> 35 белков, выделенных из микроклубней. выращенных по и редлагаел.or.

Использование гигрофильного оклады- 45 ша, такнм образом, предотвращает гибель растительного материала от затопления и обеспечивает возможность корректировки сос гаоа ег«,><ой среды н процессе куль тиоирова> ия. Ьлагодаря э<ому достигается более интенсио;;ая инду;;ция клуб><еобразования, улуч<><аегся накопление аг.симиляционных продуктов, определяющее размер и качество микроклуб <ей. Устранение потребности в дефицитном агаре, необходимом для получения клубней по спсс бу избранному в качестве аналога, а также в дефицитном импортном оборудовании для

"рбиталь»ого кача><ия ш йкерной культуры (г<о способу, и",áðý><>

". р и м е р 8, Определяли затраты мат риальных ресурсов на получение микроклубней с целью испог;ьзования последних для идентификации генотипс J, Варианть; как в примерах 2-3.

Формула изобретения

Способ получения микрокл бней.кар<офеля, включающий эксплантацию растительного материала на модифици званную питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение и наращивание вегета<ивной массы, перенос на питательную среду для клубньобразования и выращивание микроклубней, о т л и ч а ю щ v и с я тем, что. с целью упрощения способа и улучшения качества микроклубней, укоренение и наращивание вегетативной массы проводят в течение 3-4 недель на поверхности гигроскопичного вкладыша при интенсивности освещения

5,0-8,0 > к с добавлением в питательную среду 10000-30000 мгlл сгхарозь>, 0,01-0,1 мг/л кинетина, 0.01-0.1 мгlл феруловой кислоты. 0,5-3,0 мг/л индолилуксусной кислогы и выращивание микроклубней осуществляют ча питательной среде в npvсут."твии 60000-100000 мг/л сахарозы, 0,3—

0,5 мг/л экзо<енных цитокининов, 200-".00 мг/л хлорхолинхлорида. при этом культивационные сосуды помещают на 2-3 недели в темноту .;ли «а слабь<й рассеянный свет и образовавшиеся микроклубни доращивают и озеленяют при прежних условиях освещения.

1706180

Кон ;еи,эация,алба

Варилr>т о! ,о К учше

p:,.po

53.5 ) орта

Нбеск ский

95

24,93

52 е3

НСР -.5000

000 модедое-1 ский

0,0

0,0

0,1

0.5

Тлблица1

32,6

62,8

100,0

Таблица2

Табло ца3

Таблица4

Масса стебля с истьйми, мГ

184

218

Таблицаб

Таблицаб

1аблиКа7 ллтГга tь! н»

/". 1 > . О о l,::. .а 1 t t Я

3 ll3 l "б

Спгсг м1 г; е -„ г

0 i. H G l H ) t 0 о б о р 1!;1, . ) е а н и я

74

4,96

637,61

2,74 едак гор H. Лл мчук

Г б}

Тира.к Подписное

E3HWl 1i1,1 Государстаснного комитета t10 иэобр,.тениам и открыти",M при ГКНТ СССР

113С35, Москьа, > .-35. Раушс гаЯ наб., 4/5

Проиано, ;степенно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

L Е- Tl t- й

Пр»,:. "tel м1ай

За1 электр

I !

Состааитель Н. Донег1

Техред М.Моргентал Еороектор И. Муска