Способ получения рибонуклеиновой кислоты

 

Использование: медицинская и микробиологическая промышленность, для пол2 учения рибонуклеиновой кислоты из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов из кормовых дрожжей. К 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата добавляют 0,2 л Предварительно нагретого до 40-5С°С 0,5-6,0%-ного раствора NaCI и термостатируют в течение 40-50 мин при 40-50°С, доведя предварительно с помощью 5 М раствора NaOH pH суспензии до 7,0-7,2. После термостатирования охлаждают суспензию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором NaOH pH до 8,9-9,1 и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин. 5 табл,

СОЮЗ сОВЕтГких

СОЦИАЛИСТИЧГСКИХ

РЕСПУБЛИК (5 )5 С 07 Hi 21/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4785943/13 (22) 23,01.90 (46) 07.03.92. Бюл. К 9 (71) Всесоюзный научно-исследовательский и проектно-конструкторский институт микробиологических производств (72) З.А.Лука, В.В,Котусов, А.А.Дунаев и

И.А. Гол овчи к (53) 547.963.3 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 215429, кл. С 12 P 19/34, !967. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Использование: медицинска,. и микробиологическая промышленность, для полИзобретение относится к медицинской и микробиологической промышленности и может быть использовано для получения рибонуклеиновой кислоты (РН К) из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов, в частности из кормовых дрожжей (БВК), Цель изобретения — удешевление способа получения РНК и расширение сырьевой базы, Для выделения РНК к 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата (БВК) добавляют 0,2 л предварительно нагретого до

40-50 С 0,5-6,0%-раствора МаС! (см.табл.1) и термостатируют в течение 40-50 мин при

40-50 С (см.табл.2,3), доведя п редварител ьно с помошью 5 M раствора Na0H рН суспензии до 7,0-7,2. После термостатирования охлаждают суспензию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 М раствором NaOH pH до 8,9-9,1 учения рибонуклеиновой кислоты из сухой плазмолизованной биомассы микроорганизмов из кормовых дрожжей. К 20,0 г сухого белково-витаминного концентрата добавляют 0,2 л предварительно нагретого до 40-50 С 0,5-6,0%-ного раствора МаС! и термостатируют в течение 40-50 мин при

40-50 С, доведя предварительно с помощью

5 M раствора NaOH рН суспензии до 7,0-7,2, После термостатирования охлаждают суспечзию проточной водопроводной водой до комнатной температуры, доводят 5 У раствором МаОН рН до 8,9-9,1 и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин. 5 табл, и оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 50-60 мин.

Затем центрифугированием при 3500 об/мин в течение 30 мин и охлаждении при

0-5 С из экстракта осаждают клеточный шлам, рН супернатанта доводят серной кислотой (см,табл.4) до 0,5-1,5.

Образовавшийся осадок РНК отделяют центрифугированием при 8000 об/мин в те- О чение 20 мин при комнатной температуре, а затем ресуспендируют в 40 мл изопропилоеого сплрта (см.табл,5) и перемешивают в течение 30 мин, Отмытую таким образом

FHK ссаждают центрифугированием при

8000 об/мин в теченле 20 мин при комнатной температуре и высушивают в вакуумном сушильном шкафу при 30-35 С и при давлеHYiv! 2-5 мм pT.GT. !717599

Полученный препарат анализируют на содержание фосфора по Спирину азота пс

Кьельдалю, влаги по ГОСТ 14870-69, В результате проведенных процедур выделения и очистки PHK из БВК, получен- 5 ный препарат соответствуе.г требованиям и нормам ТУ 6-09-10-1048-75, Из 20,0 r EBK получено 0,83 г РНК с чистотой 84; при выходе 80 мас.0/0, Пример 1. К 100,0 г БВК добавляют

1 л нагретого до 50 С 3,0 /, -ного раствора 10

MaCI, Экстракцию ведут при рН 7,0 при поCTOSlHHOM flBpBM8LUYBBHNN при 50 С в течение 30 мин, затем суспензию охлаждают до комнатной температуры проточной водопроводной водой, рН доводят 5 M раство- 15 ром NaOH до 9,0 и продолжают экстракцию еще в течение 60 мин, По окончании описанной процедуры отделяют клеточный шлам центрифугиоованием при 3500 об/мин и охлаждении до 00С, 20

Прозрачный супернатант — экстракт нуклеиновых кислот доводят 5 M раствором

HzSOq до рН 1,0, Осадок отделяют центрифугированием при 8000 об/мин, после чего ресуспендируют его в 200 мл изоп ропилового спирта, который удаляют центрифугиро- 25 ванием при BGGG об/мин, затем осадок высушивают при комнатной температуре и вакууме. Выход РНК около 60% от теоретического с содержанием основного продукта

88%, Пример 2. К 20,0 г БВКдобавляют 0,2 30 до 50 I„"3 G lного раствора ЙаО и далее как в примере 1 до осаждения РНК из экстракта серной кислотой.

В 16 центрифужных пробирок отбирают 35 по 2 мл экстракта и осаждают РНК различными кислотами при рН 0,25-4,50. осадок отмывают аналогично примеру 1. Выходы

РНК представлены в табл,4, 40

Пример 3. В 9 центрифужных стаканов помещают по 5 г БВК и 0,025 л дистиллированной воды и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Экстракцию проводят десятикратными объемами растворов NaCI различных концентраций(029,3 О) аналогично примеру 1. Выходы РНК представлены в табл,1.

Пример 4, 20,0 г БВК суспендируют в 0,2 л предварительно нагретого до 50 С

3,0;4-ного раствора NaCI и далее по примеру 1 до получения прозрачного супернатанта — экстракта нуклеиновых кислот.

Супернатант делят на 3 равные объема и проводят осаждение PHK аналогично примеру 1, Осадок отмывают в первом варианте этиловым спиртом, во втором — изопропиловым спиртом, в третьем — дистиллированной водой. Отмытую РНК высушивают под вакуумом при комнатной температуре. Результаты представлены в табл.5, Формула изобретения

Способ получения рибонуклеиновой кислоты, включающий экстракцию РНК из исходного сырья раствором хлористого натрия, сначала при рН 7,0, затем при рН 9,0, уцаление клеточного шлама, осаждение

РНК минеральной кислотой, отделение осадка, промывка его спиртом и высушивание конечного продукта. о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью удешевления способа и расширения сырьевой базы, в качестве исходного сырья используют сухой белкововитаминный концентрат, экстракцию осуществл яют 0,5-6,0;4-ным раство ром хлористого натрия сначала при 40-50 С в течение 40-50 мин, затем при комнатной температуре в течение 50-60 мин, осаждение РНК осуществляют раствором серной кислоты при рН 0,5-1,5, а промывку проводят изопропиловым спиртом.

1717599

Габа ца ;

Содео:кание РНК о мг! мл

П р и м е ч а н и е. Зкстракцию РНК проводят сначала при рН 7 и50 С в течение 30 мин,а затем при рН 9 и комнатной температуре в течение 40 мин.

Таблица2

Оптическая плотность и и 260 нм рН7 ЮН9

П р и м е ч а н и е. Экстракцию PHD проводят с по оцью 3,- ного раствора хлористого натрия сначала при рН 7в течение 40 мин, а за ем при рН 9 в течение 50 мин.

Та 6 ли ца3

Оптическая плотг рН 7 оИ 9

П р и м е ч а н и е.,-. Экстракцию РНК проводят с помо цью 3 ф, -ного раствора хлористого натрия сначала при рН Уи 50 С, а затем при рН 9 и комнатной температуре.

1,05

1,16

1,29

1,34

1,56

1,32

1.10

1,17

0.85

0,133

0,185

0,240

0.290

0,340

0,325

0,305

0,310

0,330

0,335

0,350

0,340

0,345

77,0

78,3

80,5

817

84 8

82,2

770 7 7 ,()

78,7

0,150

0,235

0,250

0.265

0,250

0 270

0,270

0,170

0,210 г и;

d,cz5

0 250

0,254

0,300 7 . 75О9

Таблица4

СО.Г,О".К ji> ки .яГ . П ОК

„!е, н ., i (ь уи

3,0 2,0 1

1 0

0. ;-;7,0

3,00

63,0

6,4

84,0

5,21

6В,0

3,45 (6

4,55

77,6

5,5 я2

5,1

5,6.

65,0

Таблица5

70,0

Арт

cпир: (/i

П р и м е ч а н "е Зкстрак!,:иге . -".-!((преаодят = "- - Г!Оги -;::-Гс j =:-.: --; "j 1,4 1:--агксение g помощью серной кислоты рН 1.0.

Техое г4 . 3/, ъIО -Ге H тал

Редактор С.Патруиева

Заказ 8 1

Q gggg g Ос ларсTEßi iíî! Q ко! 1 и,-;-p -",:„:., -i(1боетениям и oткрытиям пои (,, ;; С» СР-

1 13035, Моc Bj.",,":-,-35, -а";:;ic BR наб., 4 5

ПроизВОДстаенно-издательск,. ко."!!. .и !а-. !атент ., Г.. кгород, .1,,"л. агаоина, 101

П р и м е ч а н и е . Зкстракь!ию PHK проаодит анапогич!чо ("-»i, таол. !1 с помОщью растеора хлористого натрия,