Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов

 

Э. М. Коган, Г. A. Платонова, Н. С. Сидорова, A. Л. Тимковский, С. E. Бреслер, О. А. Аксенов и А. А. Смородинцев (72} Авторы изобретения

Ордена Трудового Красного Знамени институт Высокомолекулярных соединений АН СССР, Ленинградский институт ядерной физики им. Б. П. Константинова и Всесоюзный научно-исследовательский институт гриппа (7l ) Заявители,А:1«Л, ф,>v, Т} ь, с. (54) СПОСОБ ТЕРА1ОАКТИВАВИИ ДВУИИТЕВМХ

ПОЛИРИБОНУКЛЕОТИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ

Изобретение относится к способу тер моактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов, обладающих интерфероногенными и противовирусными свойствами.

Известен способ термоактивации двунитевых полнрибенуклеотидных комплексов (комплексы полиинозиновой и полипитидиловой кислот, полиуридиловой и полиадениловой кислот), заключающийся в прогреве

1О растворов комплексов в культуральной среде, состоящей из набора.20 аминокислот, с добавкой ионов двухвалентного металла (например, Са + или Мр <+) при 3256 С в течение 1 Msa - 5 ч Щ, Недостатками известного способа термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов являются плохая воспроизводимость термоактивации, получение препарата, содержащего токсичные высокоактивные полирибонуклеотидные комплексы, введение в водный раствор комплексов ионов двухвалентного металла, что приводит к нежелательным побочным аффектам

2 л ля жиВых органи змоВ * ÎÅÌ8íêÎ при Внут ивенном применении, использование культуральной среды, состоящий из набора 20 незаменимых аминокислот.

Целью изобретения является разработка способа термоактивапии полирибонукле- отидного комплекса, расширяющего арсенал воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается испол зованием в качестве двунитевого долирибонуклеотидного комплекса нетоксичного полйрибонуклеотидного комплекса полирибо гуаниловой (поли-Г) и полирибоцитидиловой (поли-U) кислот с молярным соотношением полимеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом 300. 000-600,000 дальтон и проведением процесса путем прогревания при 90-100 С в присутствии

0,05-0,3 М раствора хлористого натрия в фосфатном уфере в течение 2-ЗО мин, что позволяет получить препарат, не содержащий токсичных комплексов н вредныл для живого организма ионов Са или

Дф

Mg + среда же (хлористый натрий в фос. 71387 фатном буфере) является физиологической по ионному составу и применение ее не вызывает побочных явлений в живом организме, прогревание при 90-100 С исключает стадию стерилизации, необходимую при биологических Вкспериментах на животных и в культуре ткани.

Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов заключается в прогревании раствора двунитевого полирибонуклеотидного комплекса поли-Г и Поли-U с молярпым соотношением пот.:имеров в комплексе 1:1 и молекулярным весом 300.000-600.000 дальтон при

90-100 С в присутствии 0,05-03 М 5 раствора хлористого натрия в фосфатном .буфере в течение 2-30 мин, предпочти тельно 5-15 мин.

: Пример 1. Растворы поли-Г и пали-1L в калийфосфатном буфере (КФБ) 2а с :рН 7,4, содержащем 0,15 М хлористый натрий, сливают и оставляют до получения комплекса поли Г ° поли-U на 1 6 ч при комнатной температуре. Концентрация получ енного комплекса 1, 63 мг/мл. 1 мл раствора комплекса поли-Г поли-Ц соотношением полимеров в комплексе 1 1 и молекулярным весом 300.000-600,000 дальтон помещяютв ампулу, зяпяивяют ее к выдерживают при 90ОС в течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры, разбавляют до концентрации 0,5 мг/мл в

О, 005 М натрий-фосфатном буфере (НФЬ} рН 7,4, содержанием 0,1 М хлористый натрий, и исследуют профиль гель-хроматографии комплекса ня сефярозе 2В и стандартных условиях. Исследуют противовирусную активность термоактивировянного комплекса при интраназальном введении белым мышам. Полученные результаты сопоставляются с профилем гель-хроматографии и противовирусной активностью исходного комплекса до термояктивации (контроль). Кумулятивная выживаемость мышей 8 7%, в контроле 60%.

Пример 2-23. Результаты термоактивации ксмплекса поли-Г поли-Ы при концентрации комплекса 1,63 и 0,5мг/мл, концентрации хлористого натрия 0,050,30 М, температуре 90-100 С, времени прогрева 2»60 мин после предварительного хранения поли-Г или комплекса при

sS

-14 С в течение различного времени приведены в таблице.

1 йва, д я о

a> o

n,ö

Q) ф ф (ч о о д О о о о а о з-1 о о

О О л) о

:4 ж

Яыи 2

«1

EQ о

tQ о

o". g о

cQ Q Q A le ! ао„, а

1Дв

®л ж а агав о

< U ж и а

NRхс2с, „Я

Э д х м

Ж (I

Ф и

Й о ц

< o

71387i а o o o

DJ С ) l (О Ж c0 t

А

Ц о а ч

М о о

С4 с1 о

С4 г о"

Щ о

Я

o" о"

o" о Ъ о

713871 о

С9 Щ

° Ю r4 лч! ( (Al

О

Ц о о

:х . л о о

t t (. (О! .Я ч я о в

11 71387)

Кроме НФБ и КФБ используют калий- 0,3 М раствора хлористого натрня в фосн атр ий-фосфатны и буфер (КНФБ ) . фатном буфере в течение 2-30 мин.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юформула изобретения щ н и с я тем, что комплекс прогрева1. Способ термоактивации двунитевых 5 ют в течение 5-15 мин. полнрибонуклеотидных комплексов, о т- Источники информации

У ли ч а ющи йс я тем, по комплекс принятые во внимание при экспертизе полнрнбогуаниловой и полирнбоци<ндн»вой 1 E.ЭЮ СМ с< R:Ú.ÔÎÊ R.с-&гскб кнслот с молярным соотношением полнме- ТС.MC04Qсэ ТФ6 МОС activation О%-the маров в комплексе 1:1 и молекулярным î ОПОм "дС actiwits О gwn49e4jc Д() ф 300.000 600.000 дальтон прогре- -Ыга аЕ6 Рогач ЬОПОССЕОИЛЕЭ Л М О. о

9 . О веют при 90-100 С в присутствии 0,05- 94ОС. 56,93 10ОО971) Составитель Л. Никулина

РеАВКТоР Г. 1uapI анова Техред M. Петко КоРРектоР M. NycK

Заказ 9210/18 Гираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4