Способ включения водорастворимого препарата в тени эритроцитов

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболеваниях печени и желчных путей. Цель изобретения - повышение эффективности включения лекарственных и диагностических препаратов в эритроцитарные тениносители и устойчивости к десорбции препарата в кровеносном русле. Цель достигается тем, что проводят гипоосмотический гемолиз в дистиллированной воде при температуре 0° при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием , надосэдочную жидкость сливают , к .осадку добавляют препарат, растворенный в охлажденной до 0°С дистиллированной воде из расчета 1:6-1:7 и инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С. Способ позволяет повысить в 2,5-3 раза концентрацию препарата в конечном продукте , упростить процедуру включения препаратов в эритроцитарные тени, сохранить устойчивость теней к десорбции в кровеносном русле и создать длительные концентрации препарата в печени и желчных путях. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s А 61 К 47/00

1 табл.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К ABTOPC КОМУ СВИДЕТЕЛ Ь СТВУ (21) 4783026/14 (22) 30.11.89 (46) 15.03.92. Бюл. N 10 (71) Институт хирургии им. А.В.Вишневского (72) Ж.Ш.Жумадилов и Т.П.Генинг (53) 612.015 (088,8) (56) Pharm. $her., 1983, Ч, 20, р. 151-168. (54) СПОСОБ ВКЛЮЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО ПРЕПАРАТА В ТЕНИ ЭРИТРОЦИТОН (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболеваниях печени и >келчных путей. Цель изобретения — повышение эффективности включения лекарственных и диагностических препаратов в эритроцитарные тениносители и устойчивости к деИзобретение относится к области медицины и может быть использовано для направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболеваниях печени и желчных путей.

Цепь изобретения — упрощение способа, а также увеличение содержания препарата в тенях и их устойчивости.

Цель достигается тем, что гипоосмотический гемолиз осуществляют в дистиллированной воде при 0 С при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием, недостаточную жидкость сливают, к осадку добавляют препарат, растворенный в охлажденной до 0 С дис/,,Щ „„1718955 А1 сорбции препарата в кровеносном русле.

Цель достигается тем, что проводят гипоосмотический гемопиэ в дистиллированной воде при температуре 0 при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием, надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют препарат, растворенный в охлажденной до 0 C дистиллированной воде из расчета 1:6 — 1:7 и инкубируют в течение 15-20 мин при 4 С, Способ позволяет повысить в 2,5 — 3 раза концентрацию препарата в конечном продукте, упростить процедуру включения препаратов в эритроцитарные тени, сохранить устойчивостьтеней кдесорбции в кровеносном русле и создать длительные концентрации препарата в печени и желчных путях.

Ф :м типпированной воде из расчета 1:6-1:7, и инкубируют в течение 15 — 20 мин при 4 С.

Способ осуществляют следующим образом.

Периферическую венозную кровь в количестве 5 мл помещают в пробирку с гепарином (25 Ед/мл). После удаления плазмы крови эритроциты дважды отмывают физиологическим раствором хлористого натрия путем центрифугирования при 3000 об/мин втечение5мин при4 С. Косадкуэритроцитов добавляют семикратный объем охлажденной до 0 С дистиллированной воды и центрифугируют при 8000 об/мин в течение

25 мин при 4 С, Насадочную жидкость, в которой содержится гемоглобин, отсасываIoT, к полученным теням эритроцитов прили1718955 лают семикратный объем антибиотика или другого препарата, растворенного в охла>кденной до 0 С дистиллированной воде.

Взвесьинкубируют втечение15 — 20мин при

4 С. Затем добавляют 1/9 объема 9%-ного хлористого натрия для восстановления целостности мембраны эритроцитов и инкубируют в течение 30 мин при 37 С.

Время центрыфугирования при

8000 об/мин 25 мин является оптимальным, так квк именно через зтот проме>куток врем"-ни тени хорошо выпадают в осадок.

Об этом судили по светлой окраске надосадочной жидкости.

В способе осуществляют раздельное получени" эритроцитарных теней и разведение препарата в дистиллированной воде.

Затем (после удаления надосадочной жидкости) выполнякн инкубацию эритроцитарных теней в растворе препарата. Это предупре>кдает связывание перпарата гемоглобином и повышает выход конечного продукта.

Разработанные для способа режимы инкубации и обьемные соотношения позволяют также повысить выход конечного продукта, устойчивость эритроцитарных теней к десорбции препарата в кровеносном русле. Так, соотношение клетки и лизирующего раствора 1:6 и более, а также температура раствора ниже 0 С способствует значительному разрушению эритроцитарных мембран и потери ими транспортных свойств.

Однако уменьшение соотношения клетки и лизирующего раствора приводит к большой задержке гемоглобина в тенях, что не желательно, так как гемоглобин связывает препарат. Выбранное соотношение 1:7 является оптимальным и, как показывают результаты исследований, допустимым, не приводит к значительному разрушению зритроцитарных теней. Они сохраняют транспортные свойства и устойчивость кдесорбции препарата в кровеносном русле.

Сопоставление эффективности различных режимов инкубации позволило установить, что егодпительность не влияетсущественно на выход конечного продукта. Так, при инкубации в течение 5 мин содержание антибиотика в тенях составило 1 1,2: —: 0,5 мкг/мл, в тсчение I5 мин — 12,4 - 0,3 мкг/мл, 30 мин—

12,4 и 0,4 мкг/мл.

При добавлении препарата в лизирующий раствор (согласно известному способу) выход конечного продукта был минимальным. Так, процент включения канамицина при растворении его в лизирующем растворе составил 4,7 и 0,6, а при включении по предлагаемой методике — 12,4+ 0,3 мкг/мл, т.е. почти в 3 раза больше. При включении

55 тенях доноров контрольной группы, где содержание препарата определялось тотчас после одн>кратного отмывания эритроцитарных теней. Изложенное свидетельствует о достаточной устойчивости эритроцитарных теней на десорбцию и выделение гентамицина из теней в кровеносном русле.

Устойчивость эритроцитарных теней и возмо>кность доставки препарата в печень была изучена в эксперименте на беспородных собаках, у которых оперативным путем моделировали острый холецистит. Животных разделили на две группы: основную и бил игноста по известному способу в эритроцитарные тени и введении последних в вену контрастирования желчных путей не происходило. Включение билигноста (50 g в.тени

5 по предлагаемой методике позволяет хорошо контрастировать желчные пути. Причем метод позволяет в 3 — 4 раза снизить расход дозы билигноста. Так, при традиционном внутривенном способе введения билигно10 ста для контрастирования тени желчного пузыря требуется ввести 2О-,50 мл 50 /-ного билигноста, а при использовании предлагаемого способа достаточно в эритроцитарные тени включить 6 — 7 мл билигноста, l5 Таким образом, обнаружен эффект — контрастирование желчных путей при внутривенном введении 6 — 7 мл 50 /-ного раствора билигноста, предварительного включенного в эритроцитарные тени. Традиционное

20 внутривенное введение 6 — 7 мл билигноста не вызывает контрастирования желчных путей и для этого требуется не менее 20 мл

50;4-ного раствора билигноста.

Для изучения устойчивости эритроци25 тарных теней-носителей, полученных по предлагаемой методике, на возможную. десорбцию и выделение антибиотика из теней в кровеносном русле, проводили специальные исследования с гентамицином. Эритро30 цитарные тени до;оров с включенным гентамицином дважды отмывали физиологическим раствором хлористого натрия и затем инкубировали в аутологичной плазме при 37 С в течение 25 мин. Содер>кание

35 гентамицина в надосадочной жидкости после первого отмывания эритроцитарных теней составило 0,4 и 0,03%, после второго отмывания физиологическим раствором—

0,04 +. 0,0077О. В плазме крови после инку40 бации в ней эритроцитарных теней, содержание гентамицина равнялось 0,2 + 0,008%, т.е, было минимальным, Количество гентамицина в самих эритроцитарных тенях после их двухкратного отмывания и инкубации

45 в аутологичной плазме крови составило 26,3 и

- 0,1 j> против 3,1 0,3 /, в зритроцитарных

1718955

Составитель С.Рыбалкин

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор M,Äåì÷èê

Редактор Н.Яцола

Заказ 718 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 контрольную. В контрольной группе собакам вводили канамицин (30 мгl кг) традицис онным внутривенным способом один раз в день. В основной группе канамицин вводили в аналогичной дозе (30 мгl кг), но предва- 5 рительно включенный в аутологичные эритроцитарные тени, которые затем вводили внутривенно также один раз в день. Через 24, 48 и через 72 ч после последнего введения антибиотика животных выводили 10 из опыта, выполняли релапаротомию, визу= альный осмотр внутренних органов, а также фармакокинетические исследования концентрации канамицина в ткани печени и сыворотке крови общеизвестным методом 15 диффузии в агар, в качестве тест-микроба использовали Baccillus subtIlis АТСС 6633.

Фармакокинетические исследования выявили значительные различия в концентрации кэнамицина в ткани печени в зависи- 20 мости от способа введения препарата (таблица ).

Из таблицы видно, что при направленном транспорте канамицина в эритроцитарныхтенях в печень в ткани печени создается 25 длительная терапевтическая концентрация препарата в сравнении с традиционным внутривенным способом введения, Это указывает на эффективность предлагаемого способа, а также на возможность использо- 30 вания и устойчивость эритроцит рных теней. При традиционном внутривенном способе введения препарата он не определяется в ткани печени.

Способ позволяет повысить в 2,5 — 3 раза концентрацию препарата в конечном продукте(12,4 ":0,3 против 4,7 «-0,6 в прототипе), упростить включение препаратов в эритроцитарные тени (применение на всех этапах способа дистиллированной воды, вместо требующих специальных реактивов и времени для приготовления, а также малодоступных для широкой клинической практики растворов триса и фосфатного буфера). а также сохранить устойчивость зритроцитарных тканей в кровеносном русле и создать длительные концентрации препарата в печени. Это доказано специальными фармакокинетическими исследованиями, Формула изобретения

Способ включения водорастворимого препарата в тени эритроцитов путем гипоосмотического шока нативных эритроцитов и инкубации их в растворе препарата, о т ли ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, а также увеличения содержания препарата в тенях и их устойчивости, гипоосматический шок осуществляют охлажденной до О С дистиллированной водой при соотношении 1:7, а для инкубации используют отмытые тени зритроцитов и охлажденный до 0 С водный раствор препарата, причем инкубацию проводят при 4 С не менее 15 мин.