Способ определения продуктов перекисного окисления липидов крови
Использование: медицина, биология, диагностика патологий, контрольадаптациитерапии . Сущность изобретения: пробу крови или ее фракций экстрагируют 1UU-bUU -кратным избытком смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1, аликвоту гептановой фазы смешивают с водным раствором 2-тиобарбитуровой кислоты при ее конечной концентрации в смеси 0,33-0,5%, проводят нагревание при 105-115°С в течение 5-15 мин и добавляют после охлаждения н-бутанол в объемном соотношении к пробе 1 :
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/52
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4839949/14 (22) 15.06.90 (46) 30.05.92. Бюл. ¹ 20 (71) Тюменский государственный медицинский институт (72) З.М.Деева, С.Н,Ельдецова и В.Н.Ушкалова (53) 612.015(088.8) (56) Лабораторное дело, 1983, N. 3, с. 25 — 27 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ
ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ
КРОВИ
Изобретение относится к клинической медицине и биологии, а именно к способам контроля уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ) крови доноров в зависимости от возраста, пола, географической широты обитания, и может быть использовано для диагностики патологий, протекающих с изменением уровня перекисного окисления липидов, для контроля адаптации к мобильным формам организации труда, новым климато-географическим условиям, способам контроля антиоксиданто- витамино-, гемотерапии, Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения ч чсла трудоемких операций и расширение возможностей способа за счет использования цельной крови или ее фракций при одновременном повышении точности.
Способ осуществляется следующим образом, 0,02 — 0,1 мл цельной крови или плазмы крови, или эритроцитов экстрагируют 100—
500-кратным избытком бинарной смеси геп„„. Ы „„1737339 А1 (57) Использование; медицина, биология, диагностика патологий, контрольадаптациитерапии. Сущность изобретения: пробу крови или ее фракций экстрагируют 100-b00 -кратным избытком смеси гептан-изопропанол в соотношении 1;1, аликвоту гептановой фазы смешивают с водным раствором 2-тиобарбитуровой кислоты при ее конечной концентрации в смеси 0,33 — 0,5%, проводят нагревание при 105-115 С в течение 5 — 15 мин и добавляют после охлаждения н-бутанол в объемном соотношении к пробе 1: (5 — 10). Регистрацию проводят флюориметрически. тан — изопропиловый спирт - 1: 1 (по объему), делят фазы, отбирают 0,5 мл гептанового экстракта, смешивают с 0,5 мл раствором
2-тиобарбитуровой кислоты до конечной ее концентрации 0,33 — 0,5%, термостатируют
5 — 15 мин при (105 — 115)- 0,2 С с обратным холодильником, охлаждают, добавляют 5—
10 мл н-бутанола, результаты флуориметрирования выражают в единицах отношения интенсивностей
ТБЧ =Е-, ! ! ф где ТБЧ вЂ” тиобарбитуровое число; ! — интенсивность флуоресценции рабочего (!р) и фонового (!ф) раствора.
Пример 1. Пробу плазмы донора Б. 27 лет объемом 0,02 мл смешивают со 100-кратным избытком смеси гептан — изопропанол в соотношении 1;1 по объему. Отбирают 0,5 мл гептанового экстракта, добавляют 0,5 мл
1%-ного водного раствора тиобарбитуровой кислоты (конечная ее концентрация в пробе
0,5%), термостатируют при 115+0,2 С в течение 5 мин, охлаждают до комнатной тем1737339
50
Составитель Н.Гуляева
Техред М,Моргентал Корректор Л.Бескид
Редактор М.Циткина
Заказ 1887 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 пературы, добавляют 10 мл н-бутанола. Образуется прозрачный раствор, который флуориметрируют при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 6 проб, получая среднее значение показателя
ТБЧ, равное 3,21+ 0.61.
Пример 2, Пробу эритроцитов белых крыс объемом 0,1 мл смешивают с 500-кратным избытком бинарной смеси гептан-изопропанол в соотношении 1:1 по обьему, отбирают О, 5 мл гептановой фазы, добавляют 0,5 мл 0,67 -ного водного раствора тиобарбитуровой кислоты (конечная концентрация 0,337), термостатируют 10 мин при 110-0,2 С, охлаждают, смешивают с 6 мл н-бутанола, флуориметрируют. при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 3 пробы, получают среднее значение показателя, равное 2,76+ 0,55.
Пример 3. Пробу цельной крови донора B. 30 лет объемом 0,02 мл гомогенизируют с 300-кратным избытком смеси гептан — изопропанол в соотношении 1:1 по объему, центрифугируют для разделения фаз, отбирают 0,5 мл гептановой фазы, добавляют водный раствор тиобарбитуровой кислоты до конечной ее концентрации 0,4%, термостатируют в течение 15 мин при
105 С, охлаждают, смешивают с 5 мл н-бутанола, флуориметрируют прозрачный раствор при волне возбуждения 515 нм и волне флуоресценции 535 нм против бутанола. Параллельно анализируют 5 проб и получают среднее значение ТБЧ, равное 2,70+0,25.
По сравнению с прототипом в предлагаемом способе сокращено 11 трудоемких
5 операций, способ позволяет использовать не только плазму крови, но и цельную кровь и ее фракции. Достоверный анализ по прототипу производится в пробе объемом не менее 0 03 — 0,05 мл, а по предлагаемому
10 способу — начиная с 0,01 мл, причем воспроизводимость способа возрастает не менее чем в 1,5 раза.
Формула изобретения
15 Способ определения продуктов перекисного окисления липидов крови, включающий добавление к исследуемой пробе
2-тиобарбитуровой кислоты, нагревание, охлаждение, добавление н-бутанола и флуори20 метрический анализ, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа трудоемких операций и расширения возможностей способа путем использования цельной крови или ее фрак25 ций при одновременном повышении точности, исследуемую пробу экстрагируют
100-500-кратным избытком смеси гептанизопропанол в соотношении 1; 1, аликвоту гептановой фазы смешивают с водным раство30 ром 2-тиобарбитуровой кислоты при ее конечной концентрации в смеси 0,33 — 0,5 j„ проводят нагревание при 105 — 115 С в течение
5 — 15 мин, охлаждают, добавляют н-бутанол в объемном соотношении к пробе 1: (5-10).
