Способ получения 17-замещенных производных-6-метилен- андроста-1,4-диен-3-она

 

Изобретение касается производных андроста-2,4-диен-3-она, в частности получения 17-гидрокси (или 0-С2 С5 алканоил)замещенных производных б-метилен-андроста- 1,4-диен-З-она, обладающих способностью ингибировать ароматазу. Цель - создание новых более эффективных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией андроста-1,4-диен-17-ол-3-она с источником формальдегида и солью, образованной HCI или Н250д с амином -NH(Ra)2, где каждая Ra одинаковы или различны и равны Ci-Cs-алкилу. при 130-137°С в высококипящем спирте. При необходимости полученное соединение ацилируют (когда имеется свободная ОН-группа) Сг-Сз-кислотой. Новые вещества проявляют сильную ингибирующую активность аромэтазы (69 и 78%) при низкой токсичности. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИМИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (л)ю С 07 J 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР ь (| ?

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

0R1

О

1 (21) 4356448/04 (22) 09.09.88 (31) 8721384 (32) 11.09.87 (33) G8" (46) 23.07.92. Бюл. Рв 27 (71) Фармиталиа Карло Эрба С,р.Л. (Щ (72) Витториа Вилла. Энрико ди Салле и

Паоло Ломбарди (Щ (56) Патент США f+ 4235893, кл. А 61 К 31/56, 1980.

Патент США ЬЬ 4289762, кл. А 61 К 31/56, 1981.

Заявка ЕР М 100566, кл. С 07 J 3/00, 1984.

Cancer Res/Suppl 422, 3327, 1987.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 17-ЗАМЕЩЕННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 6-МЕТИЛЕН-АНДРОСТА-1,4-ДИЕН-З-ОНА

Изобретение относится к спасо0у получения новых 17-замещенных производных андроста-1,4-диен-3-она, общей формулы

СН

0R1

СН2 где R1 — водород или Cz — С5 алканоил, обладающих ценными фармакологическими свойствами — способностью ингибировать ароматазу.

Цель изобретения — получение новых производных андроста-2,4-диен-3-она, об,, «Ы, 1750431 АЗ (57) Изобретение касается производных андроста-2,4-диен-3-она, в частности получения

17-гидрокси ли О-Сг-С5-алканоил)замещенных производных 6-метилен-андроста1,4-диен-3-она, обладающих способностью ингибировать ароматазу. Цель — создание новых более эффективных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией андроста-1,4-диен-17-ол-3-она с источником формальдегида и солью, образованной НО или Н Я04 с амином -NH(R>)z, где каждая 14 одинаковы или различны и равны С>-С5-апкилу, при 130 — 137 С в высококипящем спирте. При необходимости полученное соединение ацилируют (когда имеется свободная ОН-группа) Cz — С5-кислотой. Новые вещества проявляют сильную ингибирующую активность ароматаэы (69 и 78;6) при низкой токсичности. 2 табл, ладающих преимуществами в фармакологическом отношении перед известными структурными аналогами подобного действия.

Соединения изобретения могут быть получены способом, при котором соединение формулы в которой Ri имеет приведенные значения, подвергают взаимодействию с формальдегидным источником, предпочтительно, параформальдегидом, при 130 — 137 С и амином или его солью

1750431

Я ,ЙЦ

О где каждая из групп R>. которые могут быть одинаковыми или различными, обозначает низший алкил С1 — С5 и, если необходимо, ацилируют соединение формулы (1), в которой Р1 — водород, в другое соединение формулы (t), В которой R C2-5 элкэнаил, Пример 1. Перемешанную смесь 5,31 r (0,177 моль) параформальдегида и 17,32 г (0,212 моль) диметиламингидрохлорида в

200 мл изопентачола нагревают с обратным холодильником (температура около 131ОС) в атмосфере азота в колбе, снабженной ловушкой Дина-Старка. Окала 60 мл смеси изопентанола и выделенной воды собирают и удаляют. Температуру внутримолекулярнай реакции затем понижают до 10 — 15 С и в реакционную смесь прибавляют 4,55 r (0,016 моль) болденона (т.е., андроста-1,4диен-17Р-ал-З-она), после чего смесь вновь нагревают с обратным холодильником в течение 15 ч. После охлаждения смесь обрабатывают 60 мл 0,1н раствора NaOH u перемешивают в течение 30 мин. Органическую фазу отделяют, промывают водой и упаривают в вакууме (внешняя температура

80"С) с получением около 80 мл суспензии.

Недостаточную жидкость отделяют, полученный осадок промывают дважды 10 мл порциями гексана и затем кристаллизуют иэ 25 мл смеси этанола и воды (70:30). Отфильтрованный белый осадок сушат в вакууме при 40 С, получая 1,55 г (0,0052 моль) 6-метиленандрост-1,4-диен-17Р-ол-З-она, т.пл, 135 — 137 С.

Осуществляя процесс аналогичным образом и исходя из андрост-1,4-диен17 Р -ал-З-ан-17-прапианата, получают

6-метил е н-а ндрост-1,4-диен-17 Р -ол-3-он17-пропионат, т,пл, 123 — 125 С.

Пример 2, Раствор 6-метиленандрост-1.4-диен-17 j3-ол-3-она (1.0 г) в пиридине (10 мл} обрабатывают и ри 5ОС пропианилхларидом (1.08 мл), Реакционную смесь отстаивают при перемешивэнии при комнатной температуре в течение ночи. Затем ее вливают е смесь воды и льда и продукт выделяют экстракцией этилацетатом.

Органические экстракты промывает 2 н. раствором хларистоводородной кислоты, водой, сушат в присутствии NazS04 и упаривают.

Полученный сырой продукт кристаллиэуют из н-гексэн/простого эфира с получением 0,95 r б-метиленандраст-1,4-диен-17 j3 -ол-3-он-17пропионата, т.пл, 123-125ОС, ЯМ Р млн. поли: 0;88 (ЗН, с), 1,17 (6H, С+

+ Т), 1,35 (2Н, м), 4,66 (1Н, и), 5,02 (2Н. м), 6,25 (2H, м), 7,09 (1H, д).

Пример 3. Смесь параформальдегида (5,31 r, 0,177 моль) и сульфата диметиламина (19,85 г, 0,106 моль) в н-пентаноле (200 мл) нагревают с обратным холодильником в ре5 акционной колбе с сепаратором Дика-Старка при температуре около 137 С. Около 60 мл смеси н-пентэнола и воды собирают и отбрасывают. Затем внутреннюю температуру понижают до 10 — 15 С и к смеси

10 прибавляют андроста-1,4-диен-17 р -ал-3он (4,55 r, 0,016 моль) и смесь снова нагревают с обратным холодильником еще 15 ч.

После охлаждения смесь обрабатывают 0,1 н, растворам Na0H (60 мл) и затем переме15 шивают 30 мин, Органическую фазу отделяют, промывают водой и выпаривают под вакуумом при 80 С, получая около 80 мл суспензии. Слой разделяют, результирующий осадок промывают гексаном 2х10 мл и

20 затем кристаллизуют из 25 мл 70 -ного водного этанола. В результате получают

1,52 г (0.051 моль) 6-метиленандроста-1,4диен-17 Л-on-3-она, т.пл, 135 — 137 С, Соединения изобретения являются ин25 гибитарами биотрансформации андрогенов в эстрогены, т.е, они являются стероидными ингибитарэми ароматазы.

Ингибирование ароматазной активности этими соединениями было продемонстЗО рировано, например, с использованием теста ин вива на крысах, описанного Вгоняй, слегка модифицированного.

Взрослых самок крыс дважды обрабатывают подкожно 100 международными

35 единицами ганадотропина сыворотки жеребой кобылы (PMSG) с интервалом 4 дня, с тем, чтобы повысить активность овариальной ароматазы.

Через три дня после второй обработки

40 PMSG группам иэ 6 животных в каждой esoдят перорально и/или подкожно новые ингибиторы ароматазы. Животных убивают через 24 ч, микросомы выделяют из яичников и их ароматазную активность определя45 ют анализом Томпсона и Сиитери. Данный метод определяет скорость ароматизации путем измерения высвобождения Н20 из (1p, 2/3 - Н)-андростендиона, Инкубации э осуществляют в течение 30 мин в 1 мл

50 инкубационном абьеме, содержащем 0.1 мг микрасомных белков, 100 нМ (Н)-андростендиана и 100 мкМ НАДФ.

В табл,1 представлены данные активности, полученные в данном испытании, 55 для двух характерных представителей соединений согласно изобретение s сравнении с родственным в химическом отношении соединением известного уровня техники 6-метиленэндрост-4-ен-17 P1750431 ол-3-он-17-ацетатом, который известен из

J. Stегоid Blochem 1983, 19 (4), 1491-1502: (Спев(са1 Abstracts. vol. 100, 96858q).

Биологические данные, представленные в табл.1, показывают, что соединения изобретения являются очень сильными ин. гибиторами ароматаэы.

Андрогенное свойство соединений изобретения продемонстрировано, например, их связующим сродством к рецептору андрогена.

Связующее сродство к рецепторам зндрогена цитоплазмы (предстательной железы крыс) определяют стандартной методикой адсорбции декстрзн-покрытого угля (Raynaud Р. и др. J., Stегоid, 8lochem 6, с.615 — 622; 1975). Простатическую ткань, полученную как от адреналэктомировзнных, так и от орхидэктомировзнных крыс

Sprague — Dawley, гомогенизируют (1:10 в соотношении массы к Объему) в 10 мМ трисHCl, рН 7,4, содержащем 1,5 нМ ЭДТК и 1 мМ дитиотреита, в гомогениэаторах ткани, приводимых в движение электродвигателем. Гомогенат центрифугируют:при 105000 х г в течение 1 ч при 2 С. Аликвоты цитозоли (0,2 мл) инкубируют в течение 2 ч при 0 С с различными концентрациями испытуемых соединений, в двух экземплярах и с постоянным количеством (Н)-5-дигидротеостез рона (ДГТ, конечная концентрация .1 нМ в

0,4 мл инкубационного объема). Затем свободную радиоактивность адсорбируют на

0,2 мл суспензии декстран-покрытого угля, и после центрифугирования при 1500 х г в течение 10 мин, связанную радиоактивность в надосадочной жидкости определяют жидкостной сцинтилляцией a Dlaluma.

Концентрацию каждого соединения, необходимую для снижения специфиче-. ского Н-ДГТ-связывания на 50 ) (ИК59), определяют из графика связанной радио-. активности в зависимости от логарифма конкурентной концентрации.

Результаты, полученные при использовании б-метилензндроста-1,4-диен-17 /? -Ол3-она, т.е. соединения в соответствии с настоящим изобретением, и структурно родственного соединения 6-метиленандро-; ста-1,4-диен-3,17-дион, приведены в табл.2.

Из табл.2 следует, что соединение 6метилензндроста-1,4-диен-17 Р -ол-З-он, проявляет очень высокое сродство к андрогенному рецептору, при этом в 76 раэ более сильное, чем описанное 17-кето-производное.

Благодаря их способности ингибировать ароматаэу и, следовательно, снижать уровни эстрогена, новые соединения пригодны в лечении и предупреждении различных гормон-зависимых болезней, т.е. рака молочной железы, внутриматочной яични5 козой и панкреатической карцином, доброкачественного заболевания молочной железы, эндрометриоза, поликистоэного яичникового заболевания и преждевременного полового созревайия;

10 Соединения изобретения являются низко токсичными.

В свете высокого терапевтического индекса соединения изобретения мокнут быть использованы безОпасно в медицине. На15 пример, приблизительная острая токсич. ность (ЛД5о) соединений изобретения у мышей, определенная путем однократного введения возрастающих доз и измеренная на седьмой день после лечения, найдена

20 незначительной.

Формула изобретения

Способ получения 17-замещенных про-. изводных 6-метилен-андроста-1,4-диен-3она общей формулы

СН

О где R1 — водород или С -С5-алканоил, 35 отличающийся тем, что осуществляют взаимодействие соединения формул ы

О где R< имеет укаэанные значения, о

4S в высококипящем спирте при 130-137 С с источником формальдегида и солью, образованной хлористоводородной или серной кислотой, с амином общей формулы

50 а

r где каждая иэ групп R>, которые могут быть одинаковы или различны, является низшим

55 алкилом. содержащим 1 — 5 атомов углерода. и при необходимости ацилируют соединение формулы (1). где R1 —. водород, с получением соединения формулы (l), где Rq

С2-С5-алка ноил.

1750431

Таблица 1

Таблица 2

Составитель И.Федосеева

Редактор И.Горная Техред М.Моргентал Корректор ТЯалий

Заказ 2607 Тираж Подписное, ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинлт "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101