Способ выделения рsеudомоnаs aeruginosa

 

Использование: медицинская микробиология , лабораторная диагностика инфекций , вызываемых Pseudomonas aeruginosa. Сущность: исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, содержащую белковую Основу - источник азота (пептон , дрожжевой гидролизат), хлористый натрий в дистиллированной воде и селек-. тивный агент - 1%-ный раствор фенил(4- гидроксифенил)сульфида в ДМСО, рН среды 7,2-7,4. Среду перед употреблением стерилизуют при 120°С в течение 20 мин. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч и учитывают результаты. Наличие колоний свидетельствует о присутствии в исследуемом материале возбудителя. Способ позволяет выявить как пигментообразующие, так и беспигментные штаммы P.aeruginosa. Способ высокочувствителен (выделение возбудителя из смеси культур, взятых в соотношении 1:1000), 2 табл. со С

„„5LJ „, 1752772 А1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю С 12 Q 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

" I J"."." j)y (ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ :-::-:::;::,:;;;,,",,-:-: :;:;:- ::j

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сл

М

1 4

ЬЭ

Однако используемая среда не обеспечивает высокой селективности в отношении

Ps.aeruginosa, так как на ней наблюдается рост ассоциантов, а также не обладает достаточной чувствительностью. (21) 4633190/13 (22) 05.01,89 (46) 07.08,92, Бюл. ¹ 29 (71) Институт эпидемиологии и микробиологии Восточно-Сибирского филиала СО АМН

СССР и Иркутский институт органической химии СО АН СССР (72) А,Г,Леонтьева, З,И.Самойлюк, Т.И.Малкова. Л.К,Паперная, Э;Н,Дерягина и M.Ã.Воронков (56) Лабораторное дело, 1976, № 5, с. 302-

303.

Авторское свидетельство СССР № 1309590, кл, С 12 0 1/04, 1987, . (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ PSEUDOMONAS

AE RUG INOSA (57) Использование; медицинская микробиология, лабораторная диагностика инфекций, вызываемых Pseudornonas aeruginosa.

Сущность: исследуемый материал высевают

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выявления инфекций, вызываемых

Ps,aeruginosa, Известен способ выделения

Ps.aeruginosa на селективной среде, состоящей из сухого дагестанского пептона (20,6

r), KELSO< (10,0 r), MgCLz (1,5 r), арага 15;0 г, в качестве селективного агента — 0,2-0,5% цетилперидинового хлорида (Ц1Х), вода— до 1л.

2 на плотную питательную среду. содержащую белковую основу — источник азота (пептон, дрожжевой гидролиэат), хлористый натрий в дистиллированной воде и-:селек-, тивный агент — 1%-ный раствор фенил(4гидроксифенил)сульфида в ДМСО, рН среды

7,2-7,4. Среду перед употреблением стерилизуют при 120 С в течение 20 мин, Посевы инкубируют при 37 С в течение 18 — 24 ч и . учитывают результаты. Наличие колонйй свидетельствует о присутствии в исследуемом материале возбудителя. Способ позволяет выявит как пигментообразующие, так и беспигментные штаммы P.aeruginosa, Способ высокочувствителен (выделение возбудителя иэ смеси культур, взятых в соотношении 1:1000), 2 табл, Известен способ выделения

Ps.aeruginosa путем посева на питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные соли, агар. и селективный агент, в качестве которого используются и-оксифенилсалициламид в определенной концентрации.

Однако используемый селективный агент при повышении его концентрации в пределах указанных величин угнетает рост

Ps.aeruginosa, что снижает чувствительность способа. Показатель угнетения роста

Ps.aerug inosa 2,6.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет снижения угнетающего действия селективного агента.

1752772

Пример 1, Навески, мас.. Д: сухой пептон СК 1,086; агар 1,130; хлорид натрия

0,495, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного расплавления агара. Раствор доводят водой до первоначального обьема и добавляют в качестве селективного агента 0,3 мл 1 -ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфида (1 /-ный раствор готовят путем растворения 0,03 r селективного агента в 2,8 мл диметилсульфоксида). Среду разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при

120 С в течение 20 мин (рН среды 7,2 — 7,4), Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри, Материал от больчого с диагнозом "хронический остеомиелит" засевают ватным тампоном на поверхность питательной среды, инкубируют посев при 37 С в течение 18 — 24 ч, после чего учитывают результаты. Наличие выросших колоний указывает на из принадлежность к виду Ps.aeruginosa, Колонии имеют размер до 2 мм, выпуклые, серые, рост других микроорганизмов отсутствует.

Пример 2. Навески, мас. : сухой пептон 1,146; агар 1,170; хлорид натрия

0,510, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного расплавления агара. Доводят водой до первоначального объема и добавляют 0,31 мл

1 -ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфида, разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120 С в течение

20 мин (рН среды 7.2-7,4), Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри. Матераил от больного с диагнозом "параректальный свищ" ватным тампоном засевают на поверхность питательной среды, посев инкубируют в течение 18-24 ч, после чего учитывают результат. Колониии имеют размер до 2,0 мм, выпуклые, серые. Рост других микроорганизмовв отсутствует.

Пример 3. Навески, мас. : сухой пептон 1,160; агар 1,208; хлорид натрия

0,532, растворя ют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного растворения агара, доводят водой до первоначального объема и добавляют 0,32 мл 1 -ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфида. Разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120 С в течение 20 мин (рН среды 7,2-7,4). Готовую питательную среду

50 расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри, Материал от больного с диагнозом "апендэктомия" ватным тампоном засевают на поверхность питательной среды, инкубируют посев в течение 18 — 24 ч, после чего учитывают результат, Колонии имеют размер до 2,0 мм, серые, выпуклые. Рост других микроорганизмов отсутствует, Результаты изучения чувствительности предлагаемой среды даны в табл. 1, Чувствительность среды была изучена на пяти штаммах Ps.aeruginosa выделенных из клинического материала. Сто микробных . клеток засевают в количестве 1 мл на 2 чашки из разведения 10; инкубируют при 37ОC

-7 в течение 18 — 24 ч и подсчитывают число выросших колоний, Результаты показывают, что предлагаемый селективный агент оказывает меньшее ингибирующее действие на рост Ps.aeruginosa (в 1,5 раза меньше по сравнению с известным).

Данные, приведенные в табл, 2, свидетельствуют о том, что при использовании фенил(4-гидроксифенил) сульфида и оксафенамида возможно выделение основного возбудителя иэ смеси культур. взятых в соотношении 1:1000.

Вместо пептона в составе среды можно испольэовать гидролизат кормовых дрожжей в аналогичной концентрации с получением аналогичного положительного результата.

Результаты изученных селективных свойств предлагаемой среды даны в табл. 2.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить селективность выделения при одновременном снижении ингибирующего действия в отношении роста Ps.aeruginosa.

Формула изобретения

Способ выделения Pseudomonas аегuglnosa путем посева исследуемого материала на питательную среду, содержащую источник азота, агар, хлористый натрий, селективный агент и дистиллированную воду, с последующим инкубированием посевов и исследованием выросших колоний. о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения чувствительност способа эа счет снижения угнетающего действия селективного агента, в качестве селективного агента используют

17ь-ный раствор фенил(4-гидроксифенил)сульфида в диметилсульфоксиде.

1752772

Таблица1

Таблица 2

° е е «ваюе»

Изучаемые ассоциации

Рост штаммов на предлагаемод среде

Посевная доза

« l

Среда с фенил(4-гидроксифенил) сульфидом при содержании компонентов минимальном оптимальном максимальном

54

Роста нет

Ps.aeruginosa + 100

St,aureus 10000

32

Роста нет

71

Роста нет нет

Роста нет

26

Роста нет

Ps.aeruginosa + 100

Klebsiella 10000

49

Роста нет нет

89

Роста нет

Ps.aeruginosa + 100

Proteus 10000

72

Роста нет

37

Роста нет

Роста нет

29

Роста нет

61

Роста нет

47

Роста нет

Ps aeruginosa + 100

E.coli 10000

Роста нет

68 57

Роста нет Роста нет

Роста

Рв.aeruginosa + 100

St.epideruidis 10000

Роста нет нет мй « «е вйвьмеь е

Составитель А.Леонтьева

Техред М.Моргентал Корректор О.Юрковецкая

Редактор Н.Гунько

Заказ 2734 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

83

Роста

78

Роста

Среда с оксафенамидом при оптимальном содержании компонентов