Способ определения антигена в биологической жидкости

 

Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний. Цель - повышение точности способа за счет повышения чувствительности анализа. Сущность: антиген определяют иммуноферментным анализом с применением полистирольных планшетов с сорбированными на них аффинно выделенными антителами. Новизна заключается в том, что используют антитела , аффикно выделенные с иммуносорбента при рН 3-2.7 и имеющие константу равновесия 0,7х1010 . Это позволяет повысить чувствительность анализа в 4-6 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19} (11) 1 1

1=К ХВ

Ао — А (21) 4887056/14 (22) 04.12,90 (46) 23.09,92. Бюл, N 35 (71) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) E,А.Шкурина, Л.И.Ванеева, Л.Л,Басова и Н,В.Харьковская (56) Воробьев А,А., Биха И.В. Современное состояние и перспективы совершенствований ИФА для решения задач клинической диагностики.

ЖМЗИ, I987, N 9, с. 3-8. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА В

БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ

Изобретение относится к медицине и касается способа определения антигена методом иммуноферментного анализа (ИФА) и может быть использовано в диагностике заболеваний.

Цель изобретения — повышение точности за счет повышения чувствительности анализа, Пример 1. Определение 96 человека, Кроличью сыворотку к IgG человека пропускают через иммуносорбент, полученный из lgG u BrCN-сефарозы, после отмывки колонки специфические антитела снимают 0,1

М глицин-HCI буфером с рН 5,0, затем эту же колонку промывают этим же буфером с рН 4,0, рН 3,0 и наконец рН 2,3. Полученные при различных рН антитела диализуют против 0,1 М карбонат-бикарбонатного буфера рН 9,6, уравновешивают концентрации белка и наносят в ячейки полистирольных планшетов, после процесса адсорбции и отмывки сорбированные антитела проявляют (57) Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний. Цель — повышение точности способа за счет повышения чувствительности анализа. Сущность: антиген определяют иммуноферментным анализом с применением полистирольных планшетов с сорбированными на них аффинно выделенными антителами, Новизна заключается в том, что используют антитела, аффинно выделенные с иммуносорбента при рН 3-2,7 и имеющие константу равновесия 0,7х10 М . Зто позволяет повысить, 10 чувствительность анализа в 4-6 раз, конъюгатом антииммуноглобулина кролика, соединенной с пероксидазой, который раститровывают. Разведение конъюгата, дающее с антителами при длине волны 450 нм поглощение, равное 0,3, принимают как конечное разведение конъюгата.

Проводят определение константы равновесия, что дает представление о силе связывания антигена с антителами, снятыми с иммуносорбента при различных рН буферной системы по формуле: где Ао — начальная концентрация антител;

А — концентрация антител при достижении системой равновесия;

Во — начальная концентрация антигена.

Уравнение получено при выполнении следующего условия — начальная концентрация антигена Во должна быть значитель1763986

Таблица 1

Изучение аффинно выделенных антител к IgG человека

Таблица 2

Сравнительные данные чувствительности метода ИФА (определение IgG человека при использовании антител с различной константой равновесия) но выше начальной концентрации антител

Ао

Как видно из таблицы 1, антитела, снятые буферной системой при разных рН, обладают силой связывания с антигеном и разной адсорбционной способностью, наибольшей адсорбционной способностью и авидностью обладают антитела, снятые с иммуносорбента при элюции буферной системой при рН 2,3-2,7.

В табл.2 приводятся результаты изучения чувствительности метода ИФА определения IgG человека при использовании специфических антител, снятых с иммуносорбента в виде смеси с помощью одной буферной системы 0,1 М глицин-HCI pH 2,3 и с помощью нескольких буферных систем с различными рН. Представленные результаты свидетельствуют о повышении чувствительности метода в 4 раза по сравнению с прототипом при использовании антител с

К=0,7 х 10

Пример 2. Определение сальмонеллезного Н антигена.

Кроличью сыворотку к HHd-антигену пропускают через Hd-иммуносорбент на основе BrCN-сефарозы, все операции проводят аналогично примеру 1. Полученные результаты, представленные в табл.3, свидетельствуют о повышении чувствительности метода более 6 раз.

Пример 3. Определение сальмонеллезного Н-а антигена.

5 Кроличью сыворотку к К-а антигену пропускают через иммуносорбент, состоящий из Н-а антигена и BrCN-сефарозы, Дальнейшие операции проводят аналогично примеру1°, 10 Полученные результаты представлены в таблице 4, Таким образом, результаты исследования показывают, что независимо от испОльзования антигена применение аффинных

15 антител с константой равновесия не ниже

0,8 «0,02х10 позволяет определять антиген в количестве 1 нг, Формула изобретения

20 Способ определения антигена в биологической жидкости путем проведения иммуноферментного анализа на полистирольном планшете сорбированном аффинно выделенными антителами, отличающийся

25 тем, что, с целью повышения точности за счет повышения чувствительности способа, используют антитела, аффинно выделенные с иммуносорбента при рН 2,3-2,7 и имеющие константу равновесия 0,7х10 M, 1763986

Таблица 3

Изучение чувствительности метода ИФА — определение сальмонеллезного Hd-антигена при использовании антител с различной авидностью

Таблица 4

Изучение чувствительности метода ИФА — определение сальмонеллезного Н-а антигена

Составитель Г. Крюкова

Редактор Т. Куркова Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор Л. Филь

Заказ 3454 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101