Штамм вируса иммунодефицита человека 1-типа для приготовления диагностических препаратов

 

Использование: биогехноложя, вирусология . Сущность изобретения: новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1/СССР. ИВ/ИВ-17/89, предназначенный для приготовления диагностических препаратов при выявлении ВИ- Чинфекции среди населения. Штамм депонирован в ГКВ под номером 4022. Репликация штамма вируса сопровохдается образованием характерных синцитиев в чувствительных клеточных культурах. Инфекционный титр 5-6,0 Ig ТЦД 50. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4887059/13 (22) 04.12;90 (46) 15.10.92. Бюл. ¹ 38 (71) Институт вирусологии им. Д. И. Ивановского и Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии (72) Л. Б. Калнина, Е. А. Клещинова, M. Н, Корнеева, Д. Н. Носик, Г. Ф, Денисова, A. Ю.

Злобин, E. А. Гущина, О. Г. Юрин, B. B.

Покровский, С. М. Клименко и Д. К. Львов (56) Ророч1с М., Sarngadharan Н. G., Read Е., Gallo R. С., Science, 1984, vol. 224, р, 497500.

Second State 1аЬогатог(с Conseusus

Couference on HTLVlll/LAV Sегоlogl, Znd, Procudings, Atlanta, 1967.

Изобретение относится к области вирусологии и биотехнологии.

Известны штаммы ВИЧ-I/1!1В (США), ВИЧ-1/СВI -4/85 (Великобритания), депонированные в Государственную коллекцию вирусов СССР. В связи с их коммерческим использованием в странах выделения вируса они недоступны для применения. Подобные отечественные штаммы вирусов в литературе не описаны (1, 2).

Проблема диагностики СПИД черезвычайно актуальна для советского здравоохранения. Для проведения массового обследования населения требуется значительное количество диагностических тестсистем различных типов. Главным компонентом большинства используемых тест-систем является вирусный антиген.

Именно поэтому от свойств штамма вируса во многом зависит чувствительность и crteцифичность выпускаемых диагностикумов.

В связи с этим особую важность приобретает применение в отечествен(54) ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА I-ТИПА ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: биотехнология, вирусология. Сущность изобретения: новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17/89, предназначенный для приготовления диагностических препаратов при выявлении ВИЧинфекции среди населения. Штамм депонирован в ГКВ под номером 4022, Репликация штамма вируса сопровождается образованием характерных синцитиев в чувствительных клеточных культурах. Инфекционный титр 5-6,0 Ig ТЦД 50. 3 табл, ных тест-системах штаммов вирусов, эндемичных для территории СССР.

Предлагается новый оригинальный штамм вируса иммунодефицита человека

ВИЧ-1/СССР, ИВ/HB-17/89, изолированный на территории СССР и предназначенный для приготовления диагностических препаратов для выявления ВИЧ-инфекции среди населения.

Штамм вируса хранится. в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д, И. Ивановского AMH СССР.

Целью настоящего изобретения является оригинальный штамм. вируса иммунодефицита человека, обладающий высокой инфекционной и антигенной активностью, позволяющей испольэовать его для приготовления диагностических препаратов с целью выявления ВИЧ-инфицированных лиц среди населения.

Идентификация штамма ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17/89 осуществлена рядом независимых методов.

176В637

Таблица1

Исследование инфекционной активности штаммов ВИЧ на модели клеток Jurkst tst 3

Штаммы ВИЧ-1

Титр.

Ig ТЦД 50

СВ 1=4

6,0

6,5

Штамм вируса выделен из лимфоцитов периферической крови больной СПИД. При получении штамма использованы методы сокультивации лимфоцитов больной с лимфоцитами крови здорового донора, стимулированных митогеном, а также счеловеческими перевиваемыми клеточнымилиниями.

Репродукция. Штамм вируса реплицируется в лимфоцитах периферической крови, лимфобластоидных клеточных культурах

MT-4, СЕМ, J urkst tst 3, Ч-937. Репродукция вируса сопровождалась характерныи цитопатическим действием и синцитиеобразованием. Инфекционйый титр вируса определяли по 507 тканевой цитопатической дозе вируса на модели вышеуказанных клеточных культур (табл. 1).

Морфология. Методом электронной

Микроскопии выявлены вирионы размером

100-120 нм с типичной для вирусов иммунодефицита человека 1 типа морфологией.

Анализ антигенов.

Иммунофлюоресценция. Исследование методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием сыворотки больного

СПИД, содержащей антитела к ВИЧ-1, показало наличие антигенов ВИЧ-1 в 50-60.; инфицированных клеток.

Злектрофорез, иммуноблот, Электрофоретический профиль белков штамма соответствует белковому спектру ВИЧ-1, Исследование в иммуноблоте позволило заключить, что вирус обладает антигенными детерминантами, характерными для

ВИЧ-1: 120-160, 53/55, 41, 31, 24, 17 кД.

Идентификация штамма осуществлена также методами точечной гибридизации и

Определения обратнотранскриптазной активности.

Пример 1. Диагностика антител в

ВИЧ-1 методом иммуноферментного анализа

Материал для исследования: Сыворотки ВИЧ-1-инфицированных лиц, больных

СПИД и фракции иммуноглобулинов из сывороток ВИЧ-инфицированных лиц. В качестве антигена использовали три штамма, ВИЧ-1: эталонные штаммы III 8, СВ1=4 и штамм ВИЧ-I/ИВ/17. Реакцию иммуноферментного анализа проводили по стандартной методике (1)..

Результаты иммуноферментного анализа представлены в табл. 2, 5 Полученные результаты показывают, что препарат антигена, приготовленный из предлагаемого штамма ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17, обладает необходимыми антигенными детерминантами для выявления, 10 вирусспецифических антител из сыворотки

ВИЧ-1-инфицированных лиц.

Сравнительный анализ данного штамма с двумя эталонными в иммуноферментно4 анализе свидетельствует о его сходной ак15 тивности.

Предлагаемый оригинальный штамм вируса ВИЧ-1/СССР, ИВ/ИВ-17 и приготовленные на его основе диагностические препараты должны найти применение в

20 вирусологической практике для детекции антител в сыворотках ВИЧ-инфицированных лиц.

Пример 2. Диагностика антител к

ВИЧ-1 методом иммуноблота.

25 Материал для исследования антител к

ВИЧ-1 представлен 4 сыворотками, содержащими данные антитела и предварительно охарактеризованные в. коммерческих тестсистемах фирм "Дюпон" и "Биорад". В каче30 стве антигена использован штамм

ВИЧ-1/ИВ-17 и эталонный штамм ВИЧ1/ШВ, очищенные по стандартной методике. Полосы иммуноблота готовили также по стандартной методике (2).

35 Результаты исследований представлены в таблице 3, В результате проведенных исследований установлено, что антиген штамма ВИЧ1/ИВ-17 позволяет выявлять антитела ко

40 всем полипептидам ВИЧ-1 и может быть, следовательно, использован для изучения сероконверсии лиц,инфицированных ВИ4-1, Формула изобретения

Штамм вируса иммунодефицита человека 1-типа ГКВ hb 4022 для приготовления

45 диагностических препаратов.

1768637

Таблица 2 — Обратная величина титра антител

Таблица 3

Исследование антител к ВИЧ-1 методом иммуноблота

Выявленные антитела

ВИЧ 1/111В 160 120 65 55 53 41

24 17

ВИЧ-1/ИВ-17 160 120 65 55 53 41

Редактор

Заказ 3622 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Вирусный анти ген

Анализ антигенов ВИЧ-1 методом иммуноферментного анализа

Составитель Л. Калнина

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор В. Петраш