Способ получения 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио) трифосфатов

Авторы патента:

C07H19/20 - с сахаридным радикалом, этерифицированным фосфорными или полифосфорными кислотами

Изобретение относится к химии нуклеозидов, в частности к получению 2 -дезоксирибонуклеозид-5-0-(1-тио)трифосфатов общей формулы Ое-Р(0)(Ое)-0-Р(0)(Ое)-0P (SXO 0-CH2-CH-0-CHB-CH2-CH 9H, где В-аденин-9-ил или тимин-1-ил, используемых в генетической инженерии и молекулярной биологии. Цель - повышение выхода и упрощение процесса. Синтез ведут из 2 -дезоксирибонуклеозидов последовательной обработкой их тиохлорокисью фосфора в триэтилфосфате в присутствии пиридина при 0-5°С 10-45 мин, раствором трибутиламмония тетрафосфата в ацетонитриле (4- 10 мин) и водой (15-20 мин) с последующим выделением целевых веществ на ионнообменных колонках. Выход, %; брутто-ф-ла: а) 92; CioHi3Ll4N2Oi3 РзЗ: б) 92, CgHrcLMNsOnPaS. Способ позволяет повысить выход, более чем вдвое, при уменьшении времени синтеза и расхода реагентов. Ј

СООЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (()5 С 07 Н 19/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР и

:. с, "с.К.„ .

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

О О

О-Р-О-Р-О-Р-Q !

0 0 0 он

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4322727/04 (22) 29.10.87 (46) 15.11.92. Бюл. М 42 (71) Институт цитологии и генетики СО АН

СССР (72) В.С.Богачев (56) Оообу R.$., Isakov М. Simple synthesis

and SeparatIon of the Uasfereomers of

analogs of ribo- and deoxyrtbo- di and

triphosphate. Tetrah. Lett. 1986, ч.27, М 31, р.3599-3602. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2 -ДЕЗОКСИНУКЛ ЕОЗИД-5 -О-(1-ТИО)ТРИФОСФАТОВ (57) Изобретение относится к химии нуклеоэидов, в частности к получению 2 -дезоксирибонуклеозид-5 -О-(1-тио)трифосфатов общей формулы О -Р(0)(0 )-О-P(0)(0 )-ОИзобретение относится к усовершенст1 вованному способу получения 2-дезоксинуклеозид-5 -О-(1-тио)трифосфатов общей формулы i где В-аденин-9-ил- или тимин-1-ил, и может быть использовано в генетической инженерии и молекулярной биологии.

Цель изобретения вЂ” увеличение выхода целевых продуктов и упрощение процесса, вЂ” достигается. выявлением условий и параметров реакций: времени, реагентов, реакционной среды, присутствием дополнительных реагентов.

„„m „„1775405 А1

Р($)(0 )-О-СН2-СН-О-СНВ-СН2-СН(ОН), где

В-аденин-9-ил или тимин-1-ил, используемых в генетической инженерии и молекулярной биологии. Цель вЂ” повышение выхода и упрощение процесса. Синтез ведут из 2 -дезоксирибонуклеозидов последовательной обработкой их тиохлорокисью фосфора в тризтилфосфате в присутствии пиридина при 0-5ОС 10-45 мин, раствором трибутиламмония тетрафосфата в ацетонитриле (410 мин) и водой (15-20 мин) с последующим выделением целевых веществ на ионнообменных колонках. Выход, ; брутто-ф-ла: а)

92; CiOH13LI4N2013 P3$ б) 92, С9Н12! !4ИБ011Рз$. Способ позволяет повысить выход. более чем вдвое, при уменьшении времени синтеза и расхода реагентов.

Пример 1. 2-Дезоксиаденоэин-5 -Оt I (1-тио)трифосфат g ATRdS), тетралитиевая соль. Дезоксиаденоэин 10 мг (40 мкмоль), высушенный при 110 С, 12 мм рт.ст, над

Р20Б в течение 8 ч, растворяют при перемешивании и нагревании до 110 С (1 мин) в

0,16 мл ТЭФ, охлаждают до"25 С, прибавляют пиридин (6,6 мкл, 82 мкмоль), охлаждают до 0 С, прибавляют свежеперегнанную

Р$С!з (4,5 мкл, 45 мкмоль), встряхивают и выдерживают 10 мии при О С. Затем к реакционной смеси добавляют раствор пирс- д фосфата три-н-бутиламмония (66 мг, 120 мкмоль) в безводном ацетонитриле (0.6 мл), содержащем три-н-бутиламин (22 мкл, 90 мкмоль), встряхивают, выдерживают раствор при температуре 25 С в течение 10 мин, прибавляют 2 мл воды, выдерживают

45 мин и раствор наносят на колонку (0,9 7 см) с ДЭАЭ-сефадексом -25 (НСО }. Ко1775405

0 0 $

ОБ

0-Р-0-P-О-Р-!„!

20 !

О О О ОН

Составитель Г.Коннова

Техред M.Mopråíòýë Корректор Н,Бучок

Редактор А.Пичина

Заказ 4Й9 Тираж Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ланку элюируют водой (20 мл) и затем линейным градиентом 0,1 вЂ” 1,0 M МН4НСОз (рН

8,5), 100 мл. Продукт элюируется при концентрации соли 0,70-0;75 М 560 о.е.260 (92 ). После упаривания воды и удаления чН4НСОз в вакууме остаток растворяют в воде (5 мл),.титруют раствор 0,1 М 1 ОН до рН 8,5, пропускают через колонку (0,8 2 см, содержащую в нижней части смолу Chelex

100 (Li ) (1 мл), а в верхней вЂ” Дауэкс 50W.

2(Li+, 1 мл), элюируют продукт водой (20 мл), раствор упаривают в вакууме до объема 0,1 мл и продукт осаждают 0,5 -ным раствором LICIO< в ацетоне (ОСЧ, 1,5 мл). Осадок центрифугируют, промывают ацетоном (2 1 мл), эфиром (1 ° 1 мл) и высушивают в вакууме над PzOs. Получают 20 мг бесцветного порошка тетралитиевой соли хАТИ<$. ЗНгО.

Продукт гомогенен при высокоэффективной хроматографии на !сЬгозогЫЧН б 5 мкм в градиенте 0 вЂ” 0,3 M фосфат калия (рН 6,5) в

307ь-ном водном ацетонитриле, дает два равных по площади пика Rp u Sp-диастереоизомеров при обращенно-фазовой хроматографии íà Nucleos 1 С18, 5 мкм в градиенте 0-40 водный метанол, 0,05 М

LiCI04, 0,02М, LIOAc (pH 5,0) УФ-спектр (НгО, рН 7, Specord LIVVIS, ГДР): Л max (e)

259 нм (15200), Л min (о) 230 нм (4700). 31РЯМР-спектр (прибор BruKer НХ-90, частота

36,43 МГц, внешний стандарт 85 ) НзР04, Д О/ЭДТА, рН 8,5, 30 С, м.д.): Р, 43,30(д) и

42,80(д); Рр-22,71(ДД); Р -5,92(д).

Пример 2. 2 -Дезокситимидин-5

-О-(1-тио)-трифосфат ТТВ $),тетралитиевая соль. Дезокситимидин (9,6 мг, 40 мкмоль), после осушки растворяют в 0,08 мл ТЭФ (100 С, 0,5 мин), охлаждают до-25 С, прибавляют пиридин (6,6 мкл, 83 мкмоль), охлаждаютдо 0 С, добавляют свежеперегнанную PSClj (4 5 Мкл, 45 мкмоль) и выдерживают при той же температуре 45

5 мин. Далее обработку, выделение и идентификацию продукта проводят, как описано в примере 1. Выход TTP S 368 о.е.267 (96 ).

Осаждением ():м. выше) получено 18 мг тетралитиевой соли.

10 Таким образом, выход по данному способу повышается более, чем в 2 раза при уменьшении (примерно четырехкратном) продолжительности процесса, Формула изобретения

15 Способ получения 2 -дезоксинуклеоэид5-О-(1-тио)трифосфатов общей формулы где В-аденин-9-ил- или тимин-1-ил, путем

25 обработки деэоксинуклеозидов тиохлорокисью фосфора в триэтилфосфате в присутствии основания при температуре 0-5 С с последующим добавлением раствора пирофосфата и гидролизом реакционной смеси, 30 отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, и упрощения процесса, обработку дезоксинуклеозидов тиохлорокисью фосфора проводят в присутствии пиридина в течение 10 вЂ” 45

35 мин, пирофосфат добавляют в виде раствора его три-н-бутиламмониевой соли в ацетонитриле и выдерживают 4 вЂ” 10 мин, а гидролиз реакционной смеси осуществляют водой в течение 15 вЂ” 50 мин.

Способ получения 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио) трифосфатов

Изобретение относится к нуклеозидам, в частности к получению смеси рибонуклеозид-2<SP POS="POST">1</SP>, и 3<SP POS="POST">1</SP>-монофосфатов, которые могут быть использованы в биохимии, медицине и фармацевтике

Способ получения никотинамидадениндинуклеотида // 1505951

Замещенные азолиды рибонуклеозид-5 @ -монофосфатов в качестве промежуточных продуктов для синтеза рибонуклеозид- 5 @ -полифосфатов // 1491872

Способ получения производных дезокситионуклеотидов // 1487425

Способ получения рибои дезоксирибонуклеозид-5 @ - трифосфатов, меченных изотопами @ с и @ н // 1251509

Способ получения инозин-5 @ -монофосфата // 1162814

Литиевая соль @ -хлорацетилгидразона оксогуанозин-5- трифосфата для специфического ингибирования аденилатциклазной активности,стимулируемой гуаниловыми нуклеотидами // 1028675

Способ получения аденозин-5-трифосфата // 941384

8-(6-аминогексил)-аминоциклоаденозинмонофосфат- хлортриазинилцеллюлоза в качестве аффинного сорбента циклоаденозинмонофосфатзависимых белков // 886473

Способ получения аденозин-5 -трифосфата // 722920

Фосфолипидные производные нуклеозидов и фармацевтическая композиция // 2104282

Литиевые соли (1'r,5'r)-3'-аза-3'-(азидонафталин-1- сульфамидо)-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил- 6'-ди-или-трифосфатов как специфические фотоактивируемые необратимые ингибиторы na,к-аденозинтрифосфатазы // 2130943

Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6- аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы // 2131435

Изобретение относится к новым химическим соединениям - солям 3'-амидопроизводных (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил- 6'-дифосфата общей формулы где или Cat+ - катион щелочного металла, в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин-5'-трифосфатазы (АТФазы)

N-алкил-2-замещенные атф и способ их получения // 2136693

Высокомеченные тритием коэнзим а или ацетил-коэнзим а // 2143416

Изобретение относится к органической химии и может найти применение в биохимии, в медицине, в медикобиологических исследованиях

Калиевые соли разнолигандных координационных соединений магния с гистидином, аденозин-5'-трифосфатом и креатинфосфатом, проявляющие защитное действие на миокард от ишемического повреждения // 2144922

Изобретение относится к фармакологии, в частности к металлоорганическим соединениям, обладающим биологической активностью, которые могут найти применение в разработке лекарственных средств для профилактики и лечения ишемической болезни сердца

Липидные сложные эфиры нуклеозидмонофосфатов, обладающие противоопухолевой активностью, способ их получения и лекарственное средство // 2165429

Изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы I, в которой R1, R2 представляют собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода; R3, R5 представляют собой водород, гидроксильные группы; R4 представляет собой гидроксильную группу; Х представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу; Y представляет собой атом кислорода; В представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание при условии, что по крайней мере один из остатков R3 или R5 представляет собой водород; к их таутомерам, их оптически активным формам и рацемическим смесям, или их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения

L-нуклеозиды, обладающие анти-hbv или анти-ebv активностью, способ ингибирования hbv или ebv инфекции // 2171809

Изобретение относится к области способов лечения заболеваний, вызванных вирусом гепатита B (называемым также HBV и вирусом Эпштейна-Барра (называемым также EBV, которые включают введение эффективного количества одного или более из активных соединений, раскрытых здесь, или их формацевтически приемлемых производных или пролекарств одного из этих соединений

Модифицированные нуклеозид-5'-трифосфаты как антивирусные агенты // 2183213

Новые нуклеозидные и олигонуклеотидные аналоги // 2233844

Изобретение относится к нуклеозидным аналогам формулы (1), в которой R1 представляет собой Н или группу, защищающую гидроксил, R2 представляет собой Н, группу, защищающую гидроксил, группу фосфорной кислоты, защищенную группу фосфорной кислоты или группу формулы P(R3)R4, в которой R3 и R4 являются одинаковыми или разными и представляют собой гидроксильную группу, защищенную гидроксильную группу, алкоксигруппу, алкилтиогруппу, цианоалкоксигруппу, аминогруппу, замещенную алкильной группой; А представляет собой алкиленовую группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, и В представляет собой замещенную пурин-9-ильную группу или замещенную 2-оксопиримидин-1-ильную группу, содержащие по крайней мере один заместитель, выбранный из гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, аминогруппы, защищенной аминогруппы, алкильной группы