Способ укоренения побегов орехоплодных, полученных in viтrо

 

Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, при получении посадочного материала орехоплодных в культуре ткани. Сущность изобретения: укоренение побегов проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей в своем составе макроэлементы с четырехкратным разбавлением, 60 г/л сахарозы. Культивирование осуществляют в темноте в течение 5-7 сут, после чего пересаживают на питательную среду Мурасиге-скуга, содержащую макроэлементы в четырёхкратном разбавлении, 30 г/л сахарозы и дополнительно 7 г/л агара. Выращивание на этой среде проводят при шёстнадцатйчасовом фотопериоде. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4932475/13 (22) 29.04.91 (46) 30,01.93. Бюл. N 4 (71) Институт клеточной биологии и генетической инженерии АН УССР (72) Н.M.Ïèâåíü, Г,Г.Мельничук и А.С.Фелалиев (73) Институт клеточной биологии и генетической инженерии АН Украины (56} Perez С. — Rodriguez R, Tomes R.S., "In . vitro" filbert (Corylus aveIlana 1 )

micropropagatIon from shoot and

cotyledonary node segments, Plant Celi

Roports, 1985, 4, N 3, р. 137 — 139. (54) СПОСОБ УКОРЕНЕНИЯ ПОБЕГОВ ОРЕХОПЛОДН61Х, ПОЛУЧЕННЫХ IN VITRO

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу культивирования растений in vitro, и может быть использовано в лесоводстве, питомниководстве.

Известно, что для коренения побегов орехоплодных, полученных в культуре ткани, применяют питательные среды, содержащие ауксины, или проводят обработку базального конца побегов гормонами перед их посадкой непосредственно в субстрат, Предлагается также двухэтапное укоренение побегов, при котором на первом этапе индуцируют корнеобразование в темноте, в присутствии ауксинов(ИМК). Появление корней наблюдают на этой же среде, но при добавлении активированного угля или при уменьшении ауксинов.

Наиболее близким к предлагаемому решению является способ укоренения побегов лещины, полученных in vitro, при котором побеги помещали основанием в

„„ Ы,, 1792270 А3 (57) Использование: в сельском хозяйстве и биотехнологии, в частности, при получении посадочного материала орехоплодных в культуре ткани. Сущность изобретения; укоренение побегов проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга. содержащей в своем составе макроэлементы с четырехкратным разбавлением, 60 г/л сахарозы. Культивирование осуществляют в темноте в течение

5-7 сут. после чего пересаживают на питательную среду Мурасиге-скуга, содержащую макроэлементы в четырехкратном разбавлении, 30 г/л сахарозы и дополнительно 7 г/л агара. Выращивание на этой среде проводят при шестнадцатичасовом фотопериоде. 2 табл, и ь

l жидкую культуральную среду K(h), состоящую из половинной концентрации минеральных солей Ченга с ИМК (10 мг/л), и д выдерживали при температуре 25+2 С с фотопериодом 18 часов, Через 5 суток побеги О переносили на свежую жидкую среду того же состава, но без ИМК.

Недостатком прототипа является то, что M этот способ используют для монокультуры.

С>

Целью изобретения является ресширение числа укореняемых видов орехоплодных, размножаемых микроклональным способом, для лесоводства и питомниковод- ства.

Это достигается тем,. что укоренение ореха грецкого проводят в два этапа:-сначала на жидкой питательной среде с ауксинами (10 мг/л), при температуре 25+3 С, 8 затем на безгормональной среде того же состава, 1792270

Таблица 1

Состав питательных сред, используемых при укоренении побегов ореха грецкого

in vitro

Количественное содержание компонентов среды

М асиге-Ск ra МС, мг/л

Компоненты

Опыт

Конт оль

MC/2 этап

MC/1 этап/

MC 2 этап

MC 1 этап

Макроэлементы:

НН4ИОз

КМОз

СаС!2 2Н20

MgSO< 7Н О

КНгР04

Микроэлементы:

KJ

НзВОз

М и ЯО4 4Н20

412,5

475;0

110,0

92,5

42,5

1650,0

1900,0 . 440,0

370,0

170,0

412,5

475,0

110,0

92,5

42,5

1650,0

1900,0

440,0

370,0

170,0

0,83

6,3

22,3

0,83

6,3

22,3

0,83

6,3

22,3

0,83

6,3

22,3

В отличие от прототипа в предлагаемом способе укоренение ореха грецкого побеги выдерживают от 5 до 7 суток в темноте на жидкой питательной среде Мурасиге-Скуга, микроэлементы которой разбавляют в 4 раза, 5 количество сахарозы увеличивают до 60 г/л, а затем переносят на эту же среду, но уже с

7 г/л агара. Количество сахарозы уменьша-. ют до 30 г/л. Побеги культивируют при 16ча овбм фотопериоде. 10

Пример. Побеги, полученные при микроклональном размножении ореха грецкого и достигшего высоты 18-20 мм, .помещают базальными концами на мостики из фильтровальной бумаги в сахарные ста- 15 канчики с жидкой питательной средой Мурасиге-Скуга состава, приведенного в табл.

1, и культивируют в темтоне при 25+3 С.

Через 1, 3, 5, 7 или 10 суток побеги переносят на питательную среду того же состава, 20 но без ИМК, количество сахарозы уменьшают до 30 г/л, добавляют 7 г/л агара и выставляют на 16-часовый фотопериод.

Побеги выдерживают на этой среде до появления корней. .25

Контролем служат побеги ореха грецкого, которые выращивают 5 или 7 суток в темноте на жидкой питательной среде Мурасиге-Скуга с полным набором макроэлементов, с 60 г/л сахарозы и 10 мг/л ИМК. 30

Через 5 или 7 суток побеги переносят на

16-часовый фотопериод на питательную среду того же состава, но без ИМК, с количеством. сахарозы — 30 г/л и 7 г/л агара (табл. 1). 35

Как видно из табл. 2, при 5-суточном выдерживании побегов на жидкой среде с

ИМК у 9,0 побегов корни появились через неделю выращивания на безгормональной среде, В дальнейшем число укорененных побегов увеличивается и через 4 недели достигает 72,0, При 7-суточной экспозиции с

ИМК к концу восьмой недели получают 6,0 укорененных побегов. В контрольных вариантах корни не появились.

Таким образом, осуществлено укоренение побегов ореха грецкого, полученных в культуре in vitro.

Заявляемое техническое решение позволяет расширить обьект растений, укореняемых In vitro.

Формула изобретения

Способ укоренения побегов орехоплодных, полученных in vitro, включающий культивирование побегов при температуре

25+2 С на жидкой питательной среде; содержащей в своем составе макроэлементы, индолилмасляную кислоту в количестве 10 мг/л и сахарозу, последующую пересадку на безгормональную питательную среду и выращивание до корнеобразования и получения растений-регенерантов, о т л и ч а юшийся тем, что культивируют побеги в течение 5-7 сут, в темноте на питательной,, среде Мурасиге — Скуга, с четырехкратным разбавлением макроэлементов, содержащей 60 г!л сахарозы, последующую пересадку на питательную среду Мурасиге-Скуга с четырехкратным разбавлением макроэлементов, содержащую 30 г/л сахарозы и дополнительно 7 г/л агара, а выращивание на этой среде проводят при шестнадцатичасовом фотопериоде.

1792270

Продолжение табл.1

Компоненты

Конт оль

Опыт

МС 1 этап

MC 2 этап

МС/2 этап/

MC/1 этап/

8,6, 0.025

0,025

8,6

0,025

0,025

8,6

0,025

0,025

8,6 . 0,025

0.025

ZnS04 7Н20

Си S04 5Н20

CoS04 6Н20

Fe-хеллат: Маг -ЭДТА

FeS04 7Н20

Витамины, гормоны и др.

Глицин

Тиамин HBr

Пиридоксин HCI

Никотиновая кислота

ИМК

Сахароза

Агар

27,8

27,8

27,8

27,8

2,0

10,0

0,5

0,5

30,0

7000,0

2,0

10,0

0.5

0,5

30,0

7000,0

2,0

10,0

0,5

0.5

10,0

60,0

Таблица 2

Количество укорененных побегов ореха грецкого на питательной среде

Мурасиге-Скуга при разведении 1:4 макроэлементов и с добавлением ИМК (10 мг/л) Общее количество укорененных побегов,ф, Количество побегов, укорененных на агаризованной безгормональной среде через различные сроки к льтиви ования, Варианты опыта

8 недель

2 недели

4 недели

3 недели

1 неделя

3

7

10,0

72,0

60,0

10.0

18,0

10,0

18,0

30,0

9,0

10,0

27.0

10,0

П р и м е ч à í ui е: В качестве контроля испольэовали побеги. которые выращивали на жидкой, а в дальнейшем на агаризованной питательной среде

Мурасиге-Скуга с полным набором макроэлементов, Редактор

Заказ 162 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям.и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101

2

4

6 (контроль)

7 — "—

Сроки выдержи вания побегов на жидкой питател ьной среде с ИМК (сутки) Количественное содержание компонентов среды

М асиге-Ск га МС, мг/л

2,0

10,0

0,5

0,5

10,0

60.0

5,7-5,8

Составитель Н.Пивень

Техред М.Моргентал Корректор А.Мотыль