Способ определения генетической идентичности индивидуумов
Изобретение относится к биологии и медицине, точнее к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Сущность изобретения: у лимфоцитов определяют способность образовывать розетки с гранулоцитами и при наличии феномена розеткообразования делают вывод о генетической идентичности доноров лимфоцитов и гранулоцитов. Положительный эффект: применение данного способа значительно упрощает процедуру иммунологического скрининга донор-реципиент в трансплантологии.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛ ИСТИ ЧЕ СКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1 (21) 4882303/14 (22) 27.09.90 (46) 07,03.93. Бюл, М 9 (71) Киргизский научно-исследовательский институт экологии и профилактики инфекционных болезней, Благовещенский государственный медицинский институт (72) В,M,Евстропов и Н.А.Сорокина (56) Jissue antigens, 1979, чо! 19, М 4, р
278 — 289. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИДЕНТИЧНОСТИ ИНДИВИДУУМОВ (57) Изобретение относится к биологии и медицине, точнее к исследованию биологиИзобретение относится к биологии и медицине, точнее, к исследованию биологических материалов человека и животных иммунологическими методами.
Цель изобретения — ускорение и упрощение способа.
Пример 1. Используют человеческие лимфоциты и аутогранулоциты, выделенные из периферической крови донора А в двухступенчатом градиенте фиколл — верографина (d = 2,007 и 1,119 г/смз). Фракцию лимфоцитов (= 1,077 г/смз) и фракцию гранулоцитов (d = 1,119 г/смз) трижды отмывают в среде 199. Фракцию лимфоцитов, для удаления моноцитов, инкубируют в течение
1 ч при 37 С в емкости из пластика (например, в бакпечатках однократного применения) в среде 199.
Монослой гранулоцитов готовят инкубированием этих клеток в среде 199 (исход-, ная концентрация гранулоцитов — 9 х 10 мл) .. на покровном стекле в бакпечатке втечение,, Ы,„, 1800366 А1 (ю1)л G 01 и 33/53, С 12 N 15/00 ческих материалов человека и животных иммунологическими методами. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа, Сущность изобретения; у лимфоцитов определяют способность образовывать розетки с гранулоцитами и при наличии феномена розеткообразования делают вывод о генетической идентичности доноров лимфоциТоВ и гранулоцитов. Положительный эффект; применение данного способа значительно упрощает процедуру иммунологического скрининга донор-реципиент s трансплантологии.
1 ч при 37 С. Затем бакпечатку освобождают от среды 199 с неприлипшими гранулоцитами и помещают в бакпечаткр 0,5 мл лимфоцитов (в концентрации 2 х 10 /мл среды 199). После инкубации лимфоцитов с гранулоцитами в течение 1 ч при 37 С препарат фиксируют добавлением в инкубационную среду 1 капли 3,-ного раствора глутарового альдегида.
Через 10 мин покровное стекло извлекают из бакпечатки, высушивают, проводят дополнительную фиксацию в этиловом спирте 15 мин и окрашивают по Романовскому-Гимза — 45 — 60 мин. Препарат промы- вают 5-7 раз дистиллированной водой, помещают на предметное стекло и высушивают.
При помощи светового микроскопа под иммерсией регистрируют сто лимфоцитов и определяют процент этих клеток, присоеди-, нившихся к своей поверхности 3 и более гранулоцита.
1800366
Составитель В.Брусиловская
Техред М.Моргентал, Корректор Л.Филь
Редактор С,Кулакова
Заказ 1161 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Получен следующий результат — в крови у донора А 10 лимфоцитов образуют розетки с. аутогранулоцитами, что свидетель- ствует о генетической идентичности.
Пример 2. Используют человеческие лимфоциты донора А и человеческие аллогенные гранулоциты донора Б. Последовательность выделения клеток из крови и методика их взаимодействия аналогичны примеру 1. 10
Получен следующий результат — лимфоциты донора А не образуют розеток с гранулоцитами донора Б (аллогранулоцитами), т, е. лимфоциты генетически неидентичны гранулоцитам. 15
Пример 3. Используют человеческие лимфоциты донора А и крысиные гранулоциты (ксеногранулоциты). Последовательность выделения клеток из крови и методика их взаимодействия аналогичны примеру 1. 20
Получен .результат — человеческие лимфоциты (донора А) не образуют розеток с крысиными гранулоцитами (ксеногранулоцитами), т. е. лимфоциты генетически неидентичны гранулоцитам, взятым для исследования.
Обследовайие 8 доноров показало, что процент лимфоцитов, образующих розетки с аутогранулоцитами колеблется от 6 до 108,1 + 0,5 $. Изучение способности лимфо- 30 цитов человека образовывать розетки с аллогенными гранулоцитами, проводимое у
8-ми. пар доноров, показало отсутствие розеткообразования при использовании аллогенных гранулоцитов, У 8-ми человек 35 изучалась способность лимфоцитов образовывать розетки с гранулоцитами крыс. Лимфоцитов, образующих розетки с гранулоцитами крыс (ксеногенными гранулоцитами), обнаружено не было. Лимфоциты 8-ми крыс также не образовывали розеток с гранулоцитами человека и с гранулоцитамидругих крыс, но формировали розетки с аутогранулоцитами — 7,2 + 0,7 .
Следовательно лимфоциты образуют розетки лишь с сингенными, а не с алло- и ксеногенными гранулоцитами, поэтому данный способ может применяться для выявления генетической идентичности индивидуумов, Выявленный феномен взаимодействия лимфоцитов исключительно с аутогранулоцитами объясняется присутствием на поверхностной мембране гранулоцитов молекул HA класса 1, которые считаются молекулами самораспознавания, которые, по-видимому, играют доминирующую роль в данном варианте лимфогранулоцитарного взаимодействия, Таким образом предлагаемый способ позволяет за 5 — 6 ч определить генетическую идентичность индивидуумов, что, по сравнению с прототипом, в 10 — 12 раз быстрее, Кроме того, в отличие от прототипа, реализация предлагаемого способа не нуждается в условиях стерильности и в дорогостоящих и дефицитных компонентах, необходимых для длительного культивирования клеток, Формула изобретения
Способ определения генетической идентичности индивидуумов, включающий совместное инкубирование клеток крови исследуемых пациентов и последующее определение генетической идентичности, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, проводят инкубацию лимфоцитов донора с гранулоцитами реци пиента и при наличии розеток констатирую генетическую идентичность.
