Хлоргидрат о-изобутил-о-2-(n-пиперидил)изопропил- метилтионфосфоната, обладающий антихолинэстеразной активностью

 

Использование: в медицине в качестве препарата, обладающего антихолинэстеразной активностью. Сущность изобретения:продукт хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(М-пиперидил) изопропилметилтионфосфоната формулы СН3Р(5)(ОС Н9-изо)(0-СЖСН3КН2-Ы0, НС1 БФС1зН2э02РМ5С1, выход 95%. Реагент 1: СНзР(5). Реагент 2: изо-С4Нд-ОН. Реагент 3: но-сн№3)сн2-ьО Реагент4:HCI. Условия реакции: в среде диэтилового эфира в присутствии триэтиламина. 1 табл. со с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

НО-сн(сн сн2-NQ

О (л)

О

Q0 (21) 4925315/04 (22) 04.03.91 (46) 23.03.93, Бюл. ¹ 11 (71) Институт биоорганической химии им. акад. А,С. Садыкова (72) Д.Н. Далимов, М.Б, Гафуров, 3, Тилябаев, А,А. Абдувахабов и А.Б. Космачев (56) Годовиков Н.Н. и др. Изв. АН СССР. Сер. химия, 1974, № 8, с, 1900 — 1901.

Абдувахабов А.А. и др. Алкалоиды и их производные как инструмент для изучения холинергической системы, Ташкент. Фан.

1984, с. 126.

Ellman 6Л. Biochem Pharm, 1961, ч. 7, р.

88.

Корниш-Боуден, Основы ферментативной кинетики, М.; Мир, 1979, с. 256. (54) ХЛOPГИДРАТ О-ИЗОБУТИЛ-0-2-(N-ПИПЕРИДИЛ)ИЗОПРОПИЛ-МЕТИЛТИОНФОСФОНАТА, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИХОЛИНЭСТЕРАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к фосфорорганической химии, а именно к новому биологически активному соединению формулы

Сна р

/ из0-С И О 0-СН-сН -М

2 нз НС1 обладающему способностью ингибировать холинэстеразы.

Целью изобретения является синтез хлоргидрата 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната с более выраженной ингибирующей эффективно... Ы „„1803408 А1 (я)5 С 07 F 9/40, 9/576, А 61 К 31/675 (57) Использование; в медицине в качестве препарата, обладающего антихолинэстеразной активностью. Сущность изобретения; продукт хлоргидрат

0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропилметилтионфосфоната формулы сну(вКас,н,—.зсНс-сн<сн,1сн;нд, НС1

5cDC13H2g02PNSCI, выход 95%. Реагент 1:

CH3P(S)CI2, Реагент 2: изо-C4Hg-OH. Реагент 3:

Реагент 4:HCI. Условия реакции: в среде диэтилового эфира в присутствии триэтиламина. 1 табл, стью и избирательностью действия по отношению к АХЭ и БуХЭ крови теплокровных, Поставленная цель достигается тем, что в качестве ингибитора АХЭ и БуХЭ предложен хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната.

Предложенное соединение формулы I в три стадии; а) взаимодействием изобутилового спирта с дихлорангидридом метилтиофосфоновой кислоты получают хлорангидрид 0изобутил-метилтиофосфоновой кислоты получают хлорангидрид 0-изобутил-метилтиофосфоновой кислоты; б) взаимодействием хлорангидрида 0изобутилметилтиофосфоновой кислоты с NP-оксипропилпиперидином получают 0-изо1803408 бутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфонат; в) конечный продукт хлоргидрат 0-изобутил-0-2 (пиперидил)-изопропил-метилтионфосфоната получают действием хлористого водорода на 0-изобутил-0-2-(Nпиперидил) изопропил-метилтионфосфоната.

Пример 1. Получение хлорангидрида

0-изобутилметилтиофосфоновой кислоты.

В трехгорлую колбу объемом 250 мл, снабженную обратным холодильником, механической мешалкой и капельной воронкой, помещают 14 9 г (О 1 моль) дихлоран гидрида метилтиофосфоновой кислоты, растворенного в 50 мл абсолютного эфира. При охлаждении (t = 0 — (-5)ОС и перемешивании постепенно, по каплям добавляют 7,8 г (0,1 моль) изобутилового спирта и 10,1 r (0,1 моль) сухого триэтиламина в

50 мл абсолютного эфира. После этого реакционную смесь нагревают на водяной бане при температуре 30 — 35 С в течение 2 ч. Реакционную смесь оставляют на ночь. Выпавший солянокислый триэтиламин отфильтровывают, осадок промывают два раза абсолютным эфиром (по 20 мл). Растворитель отгоняют, осадок перегоняют в вакууме. Выход 10,8 г(58 ).

Т,кип. 76 — 78 /4 мм. пр 1,4862, dp

1,1176.

Получение 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропилметилтионфосфоната.

В трехгорлую колбу объемом 100 мл, снабженную обратным холодильником, механической мешалкой и капельной воронкой, помещают 1,43 г (0,01 моль) Nj3-оксипропилпиперидина и 1,01 г(0,01 моль) сухого триэтиламина, растворенного в 50 мл абсолютного эфира. При охлаждении (t =

=0-(-5) С) и перемешивании постепенно, по каплям добавляют 1,86 г (1,01 моль) хлорангидрида 0-изобутилметилтионфосфоновой кислоты, растворенного в 20 мл абсолютного эфира, После этого реакционную смесь нагревают на водяной бане при температуре 30 — 35 С в течение 2 ч. Реакционную смесь оставляют на ночь. Выпавший солянокислый триэтиламин отфильтровывают, осадок два раза промывают абсолютным эфиром по 20 мл. Из фильтрата эфир отгоняют, осадок очищают на колонке с А120з (II степени активности). Элюент — абсолютный эфир. Ход реакции и колоночной хроматографии контролируют методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинке с

А!20з в незакрепленном слое. Система для

ТСХ вЂ” бензол:эфир:этанол (10:5:2). Проявитель — пары иода. Фракции с одинаковыми

Rg обьединяют, эфир отгоняют, остаток вы5

55 держивают в вакууме в течение 30 мин при температуре 35 — 40 С, остаток — светло-желтое маслообразное вещество. Выхоу конечного продукта 55, по 1,4848, d 1,0243, Rf 0,91, Мйонайд. 816 92 Мйовыч 82,33

Найдено, : С 53,40; Н 9,02; P 10,39.

С 13Н2802Р NS

Вычислено, %: С 53,24; Н 8,87; P 10,58.

ИК-спектр (v, см ): P = S - 750, P-0-С1055, СНз, СН2-2940 — 2850, Спектр ПМР (д, м.д,), 1,90 (6Н, д, СНз, J = 6,8 Гц), 1,7/ЗН, д, СНз, J = 6,0 Гц), 1,2—

1,6 (6Н, С-СН2), 1,75 (ЗН, д, P-СНз, J = 16 Гц), 1,7 — 2,6 (6Н, м, N-CH2), 3,52 и 3,74 (2Н, м, О-СН2).

Получение хлоргидрата 0-изобутил-0-2(N-пиперидил)-изопропил-метилтионфосфоната..

1 г (0,003 моль) 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфонат растворяют в 10 мл абсолютного эфира и перемешивают стеклянной палочкой, по каплям добавляют 10 мл насыщенного хлористым водородом эфира. Выпавший хлоргидрат отфильтровывают, промывают 3 раза (по 10 мл) абсолютным эфиром и сухим петролейным эфиром. Осадок сушат в вакууме масляного насоса, без доступа влаги. Получают белое аморфное вещество. Выход продукта реакции 95о (1,06 r,).

Найдено, ; С 47,59; Н 8,50; P 9,61; CI

10,45.

С13Н2902РМЯС!

Вычислено, : С 47,34; Н 8,80; P 9,40; CI

10,77.

Пример 2. Определение обратимойантихолинэстеразной активности хлоргидрата 0-изобутил-0-2 (N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната.

Антихолинэстеразную активность заявляемого соединения определяли на ферментных препаратах АХЭ (К.Ф.3.1.1.7) из эритроцитов крови человека и БуХЭ (К.Ф.3,1.1.8) из сыворотки крови лошади, производства Пермского НИИ вакцин и сывороток. Удельная активность АХЭ 2,7 Е/мг, а БуХЭ 28 Е/мг.

Изменение скорости ферментативной активности АХЭ и БуХЭ осуществляли колориметрическим методом Эллмана (3) на колориметре "Speco-221" (ГДР), принцип которого заключается в-изменении интенсивности окраски (при д = 420 нм), образующегося продукта при взаимодействии тиохолина с 5,5-дитиобиснитробензойной кислотой.

Скорость гидролиза ацетилтиохолина измеряли в пробе, содержащей 0,4 мл 0,001

М раствора 5,5-дитиобиснитробензойной

1803408 сн р

Г и30-(.gHg0 О-СН-(. (- - " ь НС1 обладающий антихолинэстеразной активностью.

35

Составитель

Техред М.Моргентал

Корректор Н.Кешеля

Редактор

Заказ 1032 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 кислоты, 0,7 мл 0,1 М фосфатного буфера (рН 8,0), 0,3 мл водного раствора АХЭ (или

БуХЭ), 0,2 мл раствора субстрата, 0,2 мл водного раствора хлоргидрата 0-изобутил0-2-(N-пиперидил)изопропилметилтионф 5 осфоната.

Для определения величин Ki измеряли скорости ферментативного гидролиза в широком диапазоне концентрации ацетилтиохолина в опытах без заявляемого вещества 10 и с ним.

Константы (К ) обратимого ингибирования АХЭ и БуХЭ определяли по методу Корниша-Боудена (4). Результаты on ределения антихолинэстеразного действия заявляемо- 15

ro вещества формулы I и известного II представлены в таблице.

Сравнение данных таблицы показывает, что заявляемое вещество формулы! яв- 20 ляется более сильным ингибитором, чем известное II. При одинаковых условиях проведения ферментативной реакции для соединения II нет резкого различия в торможении активности АХЭ и БуХЭ. Хлор- 25 гидрат 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната в 97,2 раза активнее по отношению к АХЭ и 10,7 раза к

БуХЭ, чем соединение II

Важным преимуществом заявляемого соединения перед известным является избирательность действия по отношению к

АХЭ, что достигается значительно меньшей величиной К. равной 3,3 10 М по сравнению с известным, К которого равно 1,5 10

М.

Таким образом, предлагаемое биологически активное соединение ввиду его высокой антихолинэстеразной активности дает возможность использовать его в качестве селективного ингибитора холинэстераз.

Формула изобретения

Хлоргидрат 0-изобутил-0-2-(N-пиперидил) изопропил-метилтионфосфоната формулы