Средство, проявляющее противоожоговую активность

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии нарушений, возникающих при ожогах. Для этого на пораженную поверхность наносят смеси поли.еновых жирных кислот омега - 3 серии в качестве средства, проявляющего противоожоговую активность. 2 ил., 2 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s А 61 К 31/20

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4899009/14 (22) 10,08.90 (46) 30.03,93. Бюл, ¹ 12 (71) Институт биологии моря Дальневосточного отделения АН СССР (72) Н,А.Латышев, С.П.Касьянов, И.В.Добрыченко и О.И.Кириллов (73) Латышев Н,А. (56) Машковский М,Д. Лекарственные средства, Пособие по фармакотерапии для врачей, М.: Медицина, 1987, изд. Х, т. 2, с, 92-94, Изобретение относится к лекарственным препаратам, содержащим органические активные ингредиенты, а именно высшие жирные кислоты.

С целью расширения арсенала средств воздействия на живой организм в качестве противоожогового средства в настоящем изобретении применяют омега-3 кислоты.

Применение омега-3 кислот из морского сырья при ожоге дало неожиданный результат по качественным и количественным характеристикам, превосходящий результат от применения продажного противоожогового препарата ".Линетол" той же природы (препарат на основе жирных кислот масла льна).

Смесь омега-3 кислот или их производных (например, этиловых эфиров омега-3 кислот) представляет собой маслянистую подвижную жидкость от светло-желтого до слегка коричневого цвета со специфическим

"рыбным" запахом. Смесь не теряет жидкую консистенцию даже при -30 С. Смесь не горюча и не имеет в своем составе никаких растворителей. В дальнейшем по тексту смесь омега-3 кислот будет именоваться как препарат омега-3 кислот.,, Ж,, 1805961 АЗ

2 (54) СРЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ ПРОТИВООЖОГОВУЮ АКТИВНОСТЬ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии нарушений, возникающих при ожогах, Для этого на пора-. женную поверхность наносят смеси полиеновых жирных кислот омега — 3 серии в качестве средства, проявляющего противоожоговую активность, 2 ил., 2 табл.

Содержание в препарате эффективного Я начала — эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот может колебаться от 5 до

100%, Нижняя граница определена исходя из того, что уменьшение суммарного содержание этих кислот ниже 5% значительно или полностью снижает эффективность действия препарата в виду высокого "балластного" содержания других жирных кислот, не обладающих таким действием. Верхняя гра- . ©© ница соответствует тому моменту, когда в препарате содержатся только две кислоты — (Л зйкозапентаеновая и докозагексаеновая. о

Такой препарат будет обладать наибольшей О эффективностью. Однако, на практике методы получения такого препарата достаточно трудоемки, поэтому, как уже говорилось ра-. нее, для применения в медицине эти кислоты в препаратах концентрируют обычно до ., 30 — 75%.

В основу диагностических признаков, по которым следили за эволюцией ожоговой раны, были положены макроскопически определяемые нарушения кровообращения, вызванные ожогом. При этом мы исходили из того, что строение кожи крыс, в основном, сходно с человеческой и также представляет

1805961 собой трехкомпонентную систему, образованную эпидермисом, дермой и подкожной жировой клетчаткой, наиболее выраженной в области спины. В местах, где кожа покрыта волосами, эпидермис у животных построен менее сложно и состоит лишь из трех слоев: базального, шиповатого и рогового.

Вследствие этого морфология ожоговой раны крыс отличается от таковой у человека, Так, при ожогах II степени у крыс не происходит образование пузырей. Кроме того, использованные B наших опытах крысы

Вистар — альбиносы, у которых специфическая функция меланоцитов, находящихся в базальном слое эпидермиса, нарушена и они не в состоянии синтезировать меланиновый пигмент.

Характерными нарушениями микроциркуляции при термической травме кожи прежде всего являются: двухфазная сосуди. стая реакция (кратковременное сужение и длительное расширение) микрососудов в области поражения; значительное повышение проницаемости стенки посткапиллярных венул, значительное, замедление кровотока (вплоть до его полной остановки— стаза). Наличие сосудистого стаза является . показателем глубокого поражения тканей.

От эритроцитов, вышедших из кровеносного русла в окружающую ткань, происходит отщепление гемоглобина, т.е, гемолиз, который при ожогах весьма типичен, В дальнейшем гемоглобин распадается на ряд продуктов, причем в небольших скоплениях крови, при выходе эритроцитов из сосудов путем диапедеза, обнаруживается только гемосидерин. Он образуется в течение первых 24 ч с момента кровоизлияния, что придает тканям местами ржаво-бурую окраску. На поверхности кожи это проявляется в виде такого вторичного патологического элемента как пятно.

Отчетливо выраженный стаз развивается лишь к концу первых суток после ожога.

Наличие сосудистого стаза является показа.телем глубокого поражения тканей, Нередко стазы сочетаются с нарушение трофики тканей. Если подобное явление наблюдается в кожных покровах, то развивается местный некроз, который определяется в виде некротического струпа. Эластичность струпа кожи крыс-альбиносов, как и его цвет (от светло-коричневого до красно- и темно-коричневого), соответствует глубине поражения, той или иной стадии эволюции раневого процесса, а также, насколько мы можем экстраполировать, одной из степеней ожогов, принятых для человека íà XXVI!

Всесоюзном съезде хирургов в 1960 r.

На основании вышеизложенного мы сгруппировали ежедневно выявляемые патологические признаки пораженной кожной поверхности в четыре основные группы (по

5 стадиям эволюции ожоговой раны): !

) кожа на всю толщину эластична, имеются пятна вследствие гемолиза и образования гемосидерина;

II) кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким светло-коричневым струпом;

III) кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким красно-коричневым струпом;

"5 IV) плотный, напоминающий монету, темно-коричневый струп, часто с различным рисунком расширенных кровеносных сосудов в состоянии стаза.

Примечание;

1. Ни в одном случае в наших опытах с применением вышеуказанных препаратов струп не спаивался с подлежащими мышцами, не расплавлялся, а, при контрольных вскрытиях животных, глубина патологического процесса не доходила дальше подкожной жировой клетчатки.

2, После измерения площади, занимаемой патологическим элементом, высчитывали процент этой площади ко всему участку

30 кожной поверхности, который находился в контакте с нагретой частью металлического предмета.

3. На четыре группы распределяли и животных, имеющих ту или иную стадию эволюции ожоговой раны согласно вышеописанным признакам, раздельно по испытуемым препаратам. На каждый день строили гистрограммы распределения крыс. Статистическую обработку проводили

40 в сравнении каждой опытной группы (линетол или препарат омега-3 кислот) с контрольной (вазелин) по формуле: п1 п2 .. 11 +f2 где X — критерий соответствия (критерий

2 согласия);

f> и f2 — частоты. классов первого и второго рядов; п и nz — число особей в каждом из них.

Статистически достоверными считали различия при P < 0,05.

Пример 1, Применение омега-3 кислот как противоожогового средства.

В опыте было использовано 63 самки крыс Вистар (из питомника АМН СССР

"Столбовая" ) весом 130-150 граммов, которых разделили на 3 группы по 21 животному в каждой, Крысы всех групп находились в клетках по 7 особей. Животные весь период

1805961

10

20

40 .проходит быстро и, видимо, менее болез45

55 содержались на стандартной диете, принятой в питомнике, вода ad libitum, I группа служила контролем, крысы этой группы после ожога обрабатывались вазелином.

II группа обрабатывались продажным противоожоговым препаратом "Линетол", ! II группа обрабатывалась испытуемым препаратом омега-3 кислот (в виде этиловых эфиров. этих кислот), который представлял собой, как уже говорилось ранее в описании, маслянистую жидкость светло-желтого цвета, Суммарное содержание эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот

65,8% (эйкозапентаеновой — 33,0%, докозагексаеновой -"32,8%). Остальные жирные кислоты, как минорные компоненты, суммарно составляли 34,2%.

Перед экспериментом, под легким эфирным наркозом тщательно выщипывали шерсть с участка кожи размером 25 х 25 мм в области средней трети спины, Ожог вызывали прикладыванием к обнаженной коже массивного металлического предмета, имеющего в месте контакта ровный круглый вы- 2 ступ диаметром 20 мм. Температура металлического предмета постоянно поддерживалась регулируемым подогревом, Для получения поверхностной термической травмы непосредственно перед отжогом шприцем под кожу вводили до 3 см воздуха для образования в месте контакта воздуLUной "подушки". Температурная экспозиция длилась 3 секунды, после чего на пораженную кожную поверхность наносили испыту- 3 емые препараты комнатной температуры (20 — 22 С) в количестве 150 мг на одно жи- вотное. До полного высыхания препарата крысы содержались раздельно друг от друга. Эксперимент был проведен с 9 до 12 часов, повторно препараты наносили в 18—

19 ч. Все последующие дни время обработки оставалось прежним, На следующий день и далее ежедневно с 9 до 10 ч производили осмотр и замер отдельных патологических элементов, образующихся в результате эволюции о>коговой раны, а также их описание согласно методу, предложенному ранее.

Результаты обследования приведены в табл. 1, Для наглядности и удобства работы эта же таблица представлена в виде гистрограмм на фиг.1 и 2, Красным цветом выделена 4-я стадия, как наиболее неблагоприятная, при которой поверхность представляет из себя плотный темно-ко ричневый струп, Как видно из фиг,1, через сутки после поверхностного ожога кожи крыс металлическим предметом с температурой 80 С в течение 3 секунд, больше половины >кивотных, обработанных затем вазелином, имели хорошо определяемую макроскопически гиперпигментацию (в результате распада гемосидерина) и эластичную кожу на месте термической травмы (контакта), Другая часть крыс из этой же группы равномерно

"распределилась" по вышеописанным стадиям эволюции ожоговой раны вплоть до некроза и образования твердых, темнокрасных струпьев, заключающих в своей толще ярко-выраженные расширенные тромбированные кровеносные сосуды, Обработка крыс линетолом сдержала развитие патологической картины за исключением седьмой части животных (P >-2 < 0,25, см, табл, 1).

Обработка препаратом омега-3 кислот стабилизировала на данном этапе патологические процессы на стадии появления пятен (гиперпигментации) (P <-з < 0,01).

Вторые и третьи сутки ожоговая рана во всех группах продолжала эволюционировать, но после обработки препаратом омега-3 кислот отмечается статистически достоверное замедление развития патологических элементов: соответственно на 2 и

3 сутки по отношению к контролю Р -з < 0,05 и Р -з < 0,025. Обработка линетолом дает при этом P>- < 0,50 и Р>-г < 0,75 (см табл. 1).

На пятые сутки у крыс, обработанных препаратом омега-3 кислот, только у одной особи появился твердый темно-красный струп, против почти половины таковых в контроле и трети при обработке линетолом..

На этот же срок приходится начало отслоения струпьев во всех группах, причем при обработке омега-3 кислотами этот процесс ненно, так как большинство животных в этой группе имеет мягкий и тонкий струп, кожа эластична на всю толщину в месте поражения Р1-з < 0,025, у линетола Pt- < 0,90 по отношению к контролю (табл, 1).

На седьмые сутки статистически достоверные различия в преимуществах обработки поражений омега-3 кислотами уже составляли Р>-з < 0,01, у линетола Р -z < 0,50 (табл, 1).

На девятые сутки струпья во всех группах значительно отходят от поверхности кожи, соединяясь с ней лишь на крайне ограниченном участке в центре, причем при обработке препаратом омега-3 кислот кожа под струпьями эластична и имеет бледнорозовый оттенок, слабо отличаясь от непораженной ожогом кожи, в то время как при обработке вазелином и линетолом она яркокрасная, местами с явлениями вторичного

1805961 некроза, т,е. образования вторичных струпьев, на ощупь утолщена и слабо эластична, с явлениями сращения с подлежащими тканями; что указывает на углубление ожогов.

Пример 2, Применение препарата омега-3 кислот как противоожогового средства.

Для подтверждения результатов, полученных в первом эксперименте (пример 1), был проведен повторный эксперимент, но без линетола, т.к, этот препарат и беэ того достаточно апробирован, В опыте было использовано 42.самки крыс Вистар (из питомника АМН СССР

"Столбовая" ) весом 120 — 130 граммов, которых разделили на две группы по 21 животному в каждой. Крысы обеих групп находились в клетках по 7 особей, Животные весь период содержались на стандартной диете, принятой в.питомнике, вода ad libitum, .

1 группа — служила контролем, крысы этой группы после ожога обрабатывались вазелином.

ll группа — обрабатывалась препаратом омега-3 кислот(в виде их этиловых эфиров), который представлял собой маслянистую . жидкость светло-желтого цвета. Суммарное содержание эйкозапентаеновой и докоза гексаеновой кислот 60,0 (эйкозапентаеновой — 33,4, докозагексановой — 26,6 ).

Остальные жирные кислоты. как минорные компоненты составляли 40,0, Нанесение термической травмы, а также снятия диагностических признаков с последующей их статистической обработкой проводили как в примере 1, Как видно из фиг.2 в целом повторилась гистограмма распределения животных, обработанных вазелином, по стадиям эволюции ожоговой раны. что и в первом опыте.

Однако в дальнейшем на 2-е, З-и, 5-е сутки данная группа крыс перенесла несколько . более тяжело, чем в первом эксперименте, но практически это различие выразилось в единицах особей.

Аналогичная ситуация наблюдалась и при обработке животных препаратом омега3 кислот(фиг.2). Тем не менее статистически достоверное различие(Р -г < 0,05) по суткам в положительном действии препарата омега-3 кислот не позволяет сомневаться в его эффективности (достоверность результатов

5 no X см. в табл. 2).

Таким образом, описанные наблюдения, их группировка по стадиям эволюции ожоговой раны с последующей статистической обработкой при помощи критерия со10 ответствия хи-квадрата (X ) позволяют заключить, что обработка препаратом омега-3 кислот непосредственно после термического поражения (далее ежедневно) кожи крыс резко задерживает развитие патологи15 ческих элементов в ожоговой ране, сохраняет эластичность кожи, уменьшает некротические процессы, что в конечном счете менее травматично для пострадавших (пораженных) и обеспечивает более скорое

20 и качественное заживление ожоговой раны, исключает вторичные некрозы и углубление ожогов.

К достоинствам препаратов омега-3 кислот следует отнести их доступность, т.к, 25 способы получения омега-3 кислот хорошо разработаны, безвредность в сочетании с высоким биологическим потенциалом при ожогах.

В СССР, особенно при дефиците подо30 бного рода лекарственных средств, исполь-. зование препаратов омега-3 кислот позволило бы существенно повысить эффективность лечения ожоговых травм и, возможно, в какой-то мере, удовлетворить

35 потребности в таких препаратах, В Союзе имеется широкая сырьевая база для получения препаратов, B основном это жиры рыб и морского зверя, по которым до сих пор не решен вопрос утилизации. К тому же разра40 ботаны технологии получения омега-3 кислот, которые позволяют производить такие препараты с хорошим выходом и при минимальных затратах.

45 Формула изобретения

Применение смеси полиеновых жирных кислот омега-3 серии в качестве средства, проявляющего противоожоговую активность, 10

1805961

Таблица l р(кз) Дни опыта

Группы/препараты

„Деление крыс по стадия овогового процесса

I I jj (jjI jV

1, Контроль/вазелин 12

1 сутки

3 3

1 E. Pc 0,25 (4,200) 2. Линетол 18

21 0 0

3. Омега-3 кислоты

Р«0,01 (11,454) 2 сутки

1, Контроль/вазелин 8

3 6

1 10

2. Линетол 8

3. Омега-3 кислоты

l3 6 2

l. Контроль/вазелин 2

3 сутки

7 7 6

2. Линетою

3, Омега-3 кислоты

6 8

1. Контроль/вазелин

5 сутки

2. Линетол

3. Омега-3 кислоты

14 5

1. Контроль/вазелин

5 0

6 2

7 сутки

Рс 0,50 (2,401) 2. Лннетол

3. Омега-3 кислоты

0 7 8

6 Р « 0,01 (12,879) Таблица2

Деление крыс по стадии окогового процесса

Д опыта

Группы/препараты

Р(Кт ) 1. Контроль/вазелин

1 сутки

11 5 4 1

19 0 2 0 рс 0,05 (X - 8,800)

2 5 12 2

2. Омега-3 кислоты

1. Контроль/вазелин

2 сутки

7 12 2 0 . Р«0,01 (14>803) 2. Омега-3 кислоты

3 сутки

1. Контроль/ваз елин

0 7 7 7

2, Омега-3 кислоты

i 14 р«0,025 (10,410) 0 4 7 10

5 сутки

1. Контроль/вазелин

2, Омега-3 кислоты р«0>01 (15,556) 7 сутки

1. Контроль/вазелин

2. Оиега-3 кислоты р«0,01 (i Z ° 520) Г

Р< 0,50 (2,667)

P c 0,05 (S, lgl) Р< 0,75 (1,295) рс 0,025 (9,590) Рс 0,90 (1,020)

Р< 0,025 (9,733) 0 14 7

0 4 2 15

0 7 10 4