Способ микроразмножения женьшеня
Использование: сельское хозяйство и биотехнология, в частности в селекции и семеноводстве женьшеня. Сущность изобретения: микроклональное размножение женьшеня осуществляют путем вычленения цветочных бутонов из соцветий, индуцированных предварительно при культивировании спящих почек корневища на питательной среде Мурасиге - Скуга, содержащей в своем составе 0,5 мг/л 6-БАП и 0,5 мг/л ГКз. Цветочные бутоны высаживают на питательную среду и культивируют до получения зрелых эмбриоидов. которые пересаживают на питательную среду Мурасиге - Скуга для индукции побега - и корнеобразования, содержащую половинное количество макроэлементов и дополнительно 4,0 мг/л 6-БАП и 0,5 мг/л ГКз. 4 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕCKi4X
РЕСПУБЛИК (st)s A 01 Н 4/00
ГОСУДАРСТВЕ НЮЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4848926/13 (22) 26.06.90 (46) 30.06.93. Бюл, М 24 (71) Биолого-почвенный институт Дальневосточного отделения АН СССР (72) Ю,Н.Журавлев, Е.С.Гетманова, Т.И.Музарок и В.П.Булгаков (56) Somafic Embryogenesis and Clonal
Mulflpllcation of Panax ginseng, Planta
Medica, 54(2), 1988, р. 155-156. (54) СПОСОБ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ
ЖЕНЬШЕНЯ (57) Использование: сельское хозяйство и биотехнология, в частности в селекции и семеноводстве женьшеня. Сущность изоИзобретение относится к сельскому хозяйству и биотехнологии, в частности к селекции и семеноводству женьшеня.
Целью изобретения является ускорение процесса размножения и круглогодичное получение бутонов.
Сущность предлагаемого способа со стоит в том, что в способе клонального микрораэмножения женьшеня настоящего, включающего вычленение из соцветий бутонов, посадку их на питательную среду Мурасиге — Скуга, содержащую ИНз1чОз, КМОр, СаС!г 2НгО, MgSO4 7НгО, КНгР04, KI, Нз80з, 1У1п504 4НгО, ZnSO4 7НгО, NaMo04
2НгО, Си3045НгО, CoCI26НгО, FeS047HzO
NagEDTA 2НгО инозитол, никотиновую кислоту, пироксидин НС(, тиамин HCI, глицин, сахарозу и воду с добавлением 1,0 мг/л 2,4Д, культивирование до образования эмбриогенных каллусов. субкультивирование их
„„ Д3 ÄÄ 1824114 А1 бретения: микроклональное размножение женьшеня осуществляют путем вычленения цветочных бутднов иэ соцветий, индуцированных предварительно при культивировании спящих почек корневища на питательной среде Мурасиге — Скуга, содержащей в своем составе 0,5 мг/л 6 — БАП и 0.5 мг/л ГКз. Цветочные бутоны высаживают на питательную среду и культивируют до получения зрелых эмбриоидов, которые пересаживают на питательную среду Мурасиге—
Скуга для индукции побега — и корнеобразования, содержащую половинное количество макроэлементов и дополнительно 4,0 мг/л
6 — БАП и 0,5 мг/л ГКз. 4 табл, на среде Мурасиге-Скуга с добавлением вместо 2,4Д, 2,5 мг/л 6 — EiAfl и 2,0 мг/л AHY до образования зрелых змбриоидов, формирование из них укорененных побегов с последующей высадкой в твердый субстрат, бутоны вычленяют иэ зачатков соцветий, полученных предварительной выгонкой изолированной покоящейся почки корневища маточного растения на среде МурасигеСкуга с добавлением 0,25 — 0,75 мг/л 6 — БАП и 0.025-0,75 мг/л ГКз, а формирование укорененных побегов осуществляют на модифицированной питательной среде
Мурасиге-Скуга. в которой концентрация
NH4NOs, КМОз. СаОг 2НгО, MgSO4 7НгО.
КНгРО4 и сахароэы уменьшена вдвое, а в качестве регуляторов роста добавлены 0,05 мг/л ГКз и 3,5 — 4,5 мг/л — 6БАП.
Осуществляют способ следующим образом, 1824114
10
30
55 аномалии (вытя<ивание и ослабление) при стабильном количественном выходе. Оптимальное сочетание в инициальной среде определяется: 6 -БАП и ГКэ по 0,5 мгlл. Всего на этих вариантах инициальных питательных сред было получено 39 хорошо развитых зеленых побегов, состоящих из одного листа стебля и зачатка соцветия, Далее побеги из культуральных сосудов асептически перенесли в чашки Петри. Отделили от побегов соцветия. Из соцветий вычленили отдельные бутоны бледн<...еленой окраски размером до 1 мм в диаметре, Для индукции самотического эмбриогенеза испольэовали бутоны, полученные от побегов инициированных на средах с разным содержанием
6-БАП и Г< 1, Критерием для отбора бутонов служило их нормальное развитие.
Каждый бутон-эксплант. предварительно сдавив пинцетом для увеличения раневой поверхности, вь<саживали в кчльтуральные сосуды-пробирки дополненные 10 мл индукционной питательной среды, содержащей кроме основной пигательной среды
Мурасиге-Скуга 1,0 мг/л 2.4 дихлорфеноксиуксусной кислоть< (2,4Д) (табл.1) Култивирован,<е 1ро. од.«и в темноте при темпер .г,„г 20" il огносител, <ой влажнос В этот период они еще пе имели типичных признаков эмбрноген<лей ткан<4 (белый цвет, блеск, повь шеннал плотность). Через 2 месяца культивирования примерно 57;(, каллусов содержало зародншеподобные структуры. Полученные в результате культивирования на индукционной питательной среде, эмбриоге;«<ые к tflnvcbl переносили в культуральные сосудь: 2,0.nr/ë АНУ(табл.1). Культивирование проводили на свету при т".мпературе 20 С и относительной влажности воздуха 70;(>, Через 1 месяц сфэрмировэлиь эмбриогенные каллусы, содер .<а«<ие преимудествеHHO зрелые эм<5>риоиды. Для формнров1ния укорененных побегов зрелые эмбрио< ды переносили л культуральные сосуды обье<. ом 50 мл, в которые наливали по 20 .<.1 р<-.<< нерационной питательной ср,ды <<абл " <-од .о.:.«эщей модифицированную среду Мурасиге-Скуга с уменьшенным вдвое содержанием <чН4йОз, КН01, CsCI2 2Н20, MgSo4 7Í20, KHzPO4 и сахарозы (табл.!) и различные концентрации 6 — БАП и ГКз (табл.3). Культивирование проводили на свету при температуре 20 С и относительной влажности воэдука 707ь. В течение 1 месяца наблюдали изменения происходившие с эмбриоидами на разных вариантах регенерационной среды. На средах во всех вариантах происходила пролиферация, но только в узком интервале концентраций БАП и ГКэ наблюдалось формирование почечки, из которой развива.лись нормальные растения. При этом изменение концентрации 6 — БАП выше или ниже оптимального значения 4,0 мг/л при концентрации ГКз 0,5 мг/л приводит к значительному снижению выхода растений-регенерантов. Регенеранты полученные при соотношенйи 6-БАП 0,5 мг/л и 4.0 мгlл ГКз выглядели очень ослабленными и вскоре погибли. То же и при 6 — БАП-О, ГК; -1,0 мг/л. Растения извлекали из культуральных сосудов и высаживали для адаптации в вермику,>иг пропитанный питательной средой Мурасн.. .-Скуга. При этом приживаемость ра< тоний составляет до 100 . В дополнение к преимуществам nðåäëàгаем:,го пособа, изложенным в материалах зал,«a, приводятся сравнительные данные по длительности этапов клонального микроразмножения женьшеня, Формула изобретения Способ микроразмножения женьшеня,. включающий вычленение цветочных бутонов, культивирование их на питательной среде до образования зрелых эмбриоидов. пересадку их на питательную среду для получения побегов и их последующего укоренения, высадку полученных раста< ий-регенерантов на твердый субстрат, отличающийся тем, что цветочные бутоны вычленяют из соцветий, индуцированных предварительно при культивировании спящих почек корневища на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей в своем составе 0,5 мгlл 6-БАП и 0,5 мг/л ГК1, а для получения укорененных растений-регенерантов эмбриоиды пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга с половинным содержанием макроэлементов дополнительно — 4.О мг/л 6-БАП и 0.5 мгlл ГК1. 1824114 Таблица 1 Инициация внутрвюочечн. роста Соматический змбриогенез Состав основной среды Мурасиге-Скуга Образование растении регенер Имициэльнэя среда Индукционнаяя среда Ростовая среда Регенерационная с + + + + + + 2,5 0,25-0,75 0,5 1,0 2.0 1л Таблицэ2 Влияние концентрации 6-БАП и Г14 на инициацию внутриоочечного роста йНейОз КМОз СаСЬ 2НгО M9$O7H>O KHzPO4 KJ Н3803 Мп$04.4Н20 Zn S0g 7H?0 йазйо04 2НзО Си$045НзО CoO2 6Н20 Ре$04 7НзО йазЕОТА2Н20 Имозитол Никотим.к-та Пироксидин НС! Тиэмим HCI Глицин Сахароза 6-Бензиллэмимопурин (6 БЯП) Гиббереллин (ГКз) 2,4 Дихлорфеноксиуксусная к-та а-нифтилуксусная к-та (АНУ) Во 0,83 6,2 22,3 8.6 0,25 0,025 0,025 27,8 37,3 0,5 0,5 0,1 2,0 30000 б + .+ +. + + + + + + + 0,25-0,75 + + + + + + 3,5-4,5 1824114 таблица3 Таблица 4 ;> гопы По прототип мес. По заявке, мес, 1,5 Все о 5,5 7,5 Составитель Ю.Журавлев Техред М.Моргентал Корректор M,Êåðåöìàí Редактор. 3.Ходакова Заказ 2200 1ираж Подписное ВНИИПИ Государ тв нного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Влияние различных концентраций БАП и ГКз на развитие эмбриоида Ко эм ис гонка покоящеися почки учение эбриогенного каллуса у ение зрелых змбриоидов у ение побегов учение ксренне нмх обвгов 1 2,5 
