Способ микроразмножения шафрана посевного (crocus sатivus l.)

 

Использование: биотехнология, микроклональное размножение растений. Сущность изобретения: большое количество растений шафрана посевного получают путем его микроклонального размножения на модифицированных питательных средах мурасиге-Скуга. 2 табл., 6 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТ;ИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕН-ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4954419/13 (22) 14,05.91 (46) 07.04.93. Бюл. М 13 (71) Институт физиологии растений им, К.А.Тимирязева и Институт генетики и селекции АН АЗССР (72) Э.Н.Комарова, Э.Л. Миляева, Н.В.Катаева, Д.Д.Ахундова и У.К.Алекперов (73) И нститут физиологии растений им.К.М.Тимирязева Российской академии наук (56) Килани А.Н. Выращивание шафрана,—

Изд-во АЗССР, Баку, с.1-24.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу микроразмножения шафрана посевного с помощью культуры ткани in virto, который может быть использован для нужд фармацевтической, пищевой, парфюмерной и медицинской отраслей промышленности, Цель изобретения — увеличение процента образования клубнелуковиц и, следовательно, увеличение коэффициентэ размножения.

Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения шафрана посевного (Crokus satlvus L.) с использованием клубнелуковиц, причем клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту, помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скугу, витамины, мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин

10; пиридоксин 10;; глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозин 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина

500; агар 70;, которая дополнительно содерÄÄ5LJÄÄ 1807843 А3 (54) СПОСОБ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ

ШАФРАНА ПОСЕВНОГО(Сгосиз sativus L) (57) Использование. биотехнология, микроклональное размножение растений. Сущность изобретения: большое количество растений шафрана посевного получают путем его микроклонального размножения на модифицированных питательных средах мурасиге-Скуга. 2 табл., 6 ил, жит регуляторы роста мг/л: индолилуксусную кислоту 0,1-1,0; зеатин 0,5-1,0 и глюкоза 30 г, а затем культивйруют до образования каллуса при освещенности 4-5 тыс.лкс, и температуре 7-10 С, потом переносят на такую же свежую питательную среду, культивируют в тех же условиях до образования клубнелуковичек, затем их помещают в среду 2, состоящую из половинной нормы солей по Мурс сиге и Скугу, витаминов, аминокислот глюкозы и агара по среде 1, который дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,1-1,0 мг/л и зеатин 0,1-1,0, культивируют до появления побегов и корней, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, выдерживают во влажном субстрате во влажной камере.

Пример 1. Клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7 см в ширину и 1 см в высоту, помещают в стерильные условия на питательную среду 1. состоящую из минеральныхсолей поМурасигеиСкугу, макросоли г/л: ИН4МОз 33; КИОз 38; CaClz

1807843

2НгО 8,8; MgS04 7HzO 7,4; микросоли мг/л; НзВОз 620; MnS04 HzO 2230; ZnS04

4НгО 68;KJ- 83; йагМ04 . 2НгО 25;

CuSO4 5Н20 2,5; СоС!2 6Н20 2,5; витамины мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин

10; пиридоксин 10; аминокислоты мг/л: глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фолиевая кислота 5; гидролиэат казеина 500 мг/л, глюкоза 20 г/л, агар 70 г/л и индолилуксусная кислота 0,1-1,0 мг/л, эеатин 0,51,0 мг/л, культивируют до образования каллуса при 7 С, при освещенности 4 тыс,лкс. Затем каллусы помещают на такую же свежую питательную среду и культивируют при тех же условиях, Поверхность каллусов становилась бугристой (фиг, 1), а затем на ней появлялись зародышеподобные структуры 9фиг. 2 и 3), превращающиеся постепенно в клубнелуковички. Их извлекают из питательной среды, отделяют друг от друга и помещают на питательную среду 2, состоящую из половинной нормы минеральных солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы, агара по среде 1, индолилуксусную кислоту 0,1 мг/л и зеатин

0,1 мг/л, культивируют 2 мес до образования побегов (фиг, 4) и корней (фиг, 5). Затем все извлекают иэ среды культивирования, отмывают от агара, выдерживают в воде при комнатной температуре, затем в растворе

0,4/ гетероауксина и высаживают во влажный песок при 25 С и освещенности 4-5 тыс,лкс, накрыв стеклянным колпаком на сутки. Растение готово до посадки в открытый грунт (фиг,6).

Пример 2. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 1,5 см в ширину и 1,5 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,6 мг/л, зеатин 0,7 мг/л, культивируют при 8 С до образования каллуса при освещенности

4,5 тыс.лкс., а среда 2 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 0,6 мг/л, зеатин 0,6 мг/л.

Пример 3, Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 2 см в ширину и 2 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит индолилуксусную кислоту 1,0 мл/л, зеатин 1,0 мг/л, культивируют при 10 С при освещенности 5,0 тыс,лкс„среда 2 дополнительно содержит зеатин 1,0 мг/л, индолилуксусную кислоту 1,0 мг/л.

Результаты примеров представлены на фиг. 1-6.

Фиг. 1 — бугристая поверхность каллуса, Фиг. 2 — появление эмбриоидоподоб5 н ых структур.

Фиг. 3 — превращение эмбриоиподобных структур в клубнелуковички.

Фиг. 4 — образование побегов на клубнелуковичках.

Фиг, 5 — клубнелуковички с корнями и побегами.

Фиг. 6 — растение в вазоне во влажном песке готово к посадке в грунт, В табл, 1 приведены данные влияния различных сахаров на образование каллусов; в табл. 2 — влияние различных фитогормонов на образование каллусов.

Как следует из примеров, в результате заявленного способа из одной клубнелуко20 вицы можно получить до 1000 растений в год, т.е, коэффициент размножения 1:8001;1200.

Формула изобретения

Способ микрораэмножения шафрана посевного (Crocus sativus Ц, включающий получение растений из сегментов клубнелуковиц, отл ич а ю щи йс я тем, чтосегменты клубнелуковиц 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге-Скугу, 1 мг/л никотиновой кислоты, 10 мг/л тиамина, 10 мг/л пиридоксина, 10

35 мг/л глицина, 10 мг/л аденина, 10 мг/л ти- . розина, 100 мг/л иноэита, 5 мг/л фолиевой кислоты, 500 мг/л гидролизата казеина, 70 мг/л агара, 0,1-1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,1-1,0 мг/л зеатина, 3, г/л глюко40 зы, культивируют при температуре 7-10 С и освещенности 4-5 тыс.лкс. до образования каллуса, переносят на свежую питательную среду того же состава и культивируют до образования клубнелуковичек, которые пе45 реносят на среду 2, содержащую половинную по концентрации норму компонентов среды 1 и дополнительно 0,1-1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, культивируют до появления корней и побегов, помещают в

50 раствор, стимулирующий корнеобразование, и выдерживают во влажном субстрате во влажной камере до формирования нормальныхых растений.

1807843

Таблица 1

Таблица 2

ФИГ. 2

1807843

Составитель Л.Чучкина

Техред M.Moðãåíòàë Корректор Т.Валикович

Редактор

Заказ 1386 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101