Способ микроразмножения шафрана посевного (crocus sатivus l.)

 

Использование: биотехнология, микроразмножение растений. Сущность изобретения: сегменты клубнелуковиц помещают на питательную среду, культивируют до определенной стадии и переносят на другие среды и субстраты, выращивая до получения растений. 2 табл., 7 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4954420/13 (22) 14.05.91 (46) 07.04,93. Бюл. ¹ 13 (71) Институт физиологии растений им, К,А.Тимирязева и Институт генетики и селекции АН АЗССР (72) Э.Л.Миляева, Э.Н.Комарова, Д.Д.Ахундова, Н.В. Катаева и У. К,Алекперов (73) Институт физиологии растений им.

К.А.Тимирязева Российской Академии Наук (56) Килани А.Н. Выращивание шафрана.—

Изд-во Азербайджанской ССР, Баку, 1979, с. 1-24

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу микроразмножения шафрана посевного с помощью культуры ткани in virto, который может быть использован для нужд фармацевтической, пищевой,парфомерной, и медицинской отраслей промышленности.

Цель изобретения — увеличение процента образования клубнелуковиц и, следовательно, увеличение коэффициента размножения, Поставленная цель достигается новым способом микроразмножения шафрана посевного (Crocus sativus) с использованием клубнелуковиц, причем клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту, помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скуга, витамины, мг/л: никотиновая кислота 1; тиамин 10, пиридоксин 1; аминокислоты, мг/n; глицин

10; аденин 10; тирозин 10; ийозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 5; агар 70, которая дополнительно содержит регуляторы роста мг/л; гибберелловая кис„„Я „„1807844 А3 (54) СПОСОБ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ

ШАФРАНА ПОСЕВНОГО (Crocus sativus1,) (57) Использование: биотехнология, микроразмножение растений. Сущность изобретения; сегменты клубнелуковиц помещают на питательную среду, культивируют до определенной стадии и переносят на другие среды и субстраты, выращивая до получения растений. 2 табл., 7 ил, лота 0,1-5,0; 6-бензиаминопурин 0,1-10,0 и глюкоза 20 г, затем культивируют в течение 2

0,5-2,0 мес, потом переносят на питательную среду 2, содержащую минеральные соли по Мурасиге и Скугу, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар по среде 1, которая дополнительно содержит стимуляторы роста мг/л: зеатин 0,1-5,0; нафтилуксусная кислота 0,1-1,0, культивируют до образования побегов в основании и появлением клубнелуковичек, покрытых сухими чешуями, отделяют эти клубнелуковички и помещают в среду 3, состоящую из половинной нормы солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы и агара по средам 1 или 2, индолилуксусную кислоту

0,5-5,5 мг/л, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, выдерживают во влажном субстрате во влажной 6 камере.

Пример 1, Клубнелуковицу разрезают на кусочки размером 0,7 см в ширину и 1 см в высоту, помещают в стерильные условия на питательную среду 1, состоящую из мине1807844 ральных солей по Мурасиге и Скугу, макросоли г/л; ИН4ИОз33; КИОз38; CaClz 2Н20

8-8; MgS04 7Н20 7-4; микросоли мг/л:

НЗВО> 620, Мп$04 HzO 2230; ZnS04

x4Hz0 х 680,KJ 83; NazMO4 . 2Hz0 25;

CuSO4 5Н20 2-5; СоС!г . 6HzO 2-5; витамины мг/л. никотиновая кислота 1 тиамин

10; пиридоксин 1; аминокислоты,мг/л: глицин 10; аденин 10; тирозин 10; инозит 100; фолиевая кислота 5; гидролизат казеина 500 мг/л: глюкоза 20 г/л агар 70 г/л, стимуляторы роста: гибберелловая кислота 0,1 мг/л;

6-бензиламинопурин 0,1 мг/л, культивируют 0,5 мес до почернения эксплантов и среды при освещенности 4 тыс. лкс. и влажности 80 . Затем экспланты пересаживают на новую питательную среду 2, содержащую минеральные соли, витамины, аминокислоты, глюкозу и агар, как в среде

1, и дополнительно зеатин 0,1 мг/л, нафтилуксусную кислоту 0,1 мг/л. Через 2-3 недели из спящих боковых почек, расположенных на сегментах, появляются побеги (фиг. 1) и через месяц в основании их происходит утолщение (фиг, 2), 2-3 месяца формируется в клубнелуковичку(фиг, 3), которая в свою очередь покрывается сухими чешуями (фиг, 4), На этих клубнелуковичках вновь образуются побеги, которые снова утолщаются и дают новые клубнелуковички (фиг, 5). Затем отделяют клубнелуковички одну от другой и пересаживают на среду 3, состоящую из половинной нормы минеральных солей по Мурасиге и Скугу, витаминов, аминокислот, глюкозы, агара по среде

1 или 2, индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л, культивируют 2 мес до образования корней и побегов (фиг, 6), отмывают от агара, выдерживают в воде при комнатной температуре, затем в растворе 0,4 гетероауксина и высаживают во влажный песок при 25 С и освещенности 4-5 тыс,лкс, накрыв стеклянным колпаком на сутки, Растение готоводля посадки в открытый грунт, Пример 2. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 1,5 см в ширину и

1,5 см в высоту, далее проводят аналогично, однако среда 1 дополнительно содержит гибберелловую кислоту 3,0 мг/л, 6-бензиламинопурин 5,0 мг/л, глюкозу 25 мг/л, культивируют 1,0 мес, среда 2 дополнительно содержит зеатин 3,0 мг/л. нафтилуксусную кислоту 0,8 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 3,0 мг/л.

Пример 3. Клубнелуковицу разрезают на сегменты размером 2 мс в ширину и 2 см в высоту, далее проводят аналогично примеру 1, однако среда 1 дополнительно содержит гибберелловую кислоту 5,0 мг/л, 6-бензила5

55 минопурин 10 мг/л, глюкозу 30 мг/л, культивируют 2,0 мес. среда 2 дополнительно содержит зеатин 5,0 мг/л, нафтилуксусную кислоту 1,0 мг/л, а среда 3-индолилуксусную кислоту 5,5 мг/л.

Результаты представлены на фиг. 1-7.

Фиг. 1 — через 2-3 недели из спящих почек, расположенных на эксплантах, появились побеги, которые зеленеют.

Фиг. 2 — утолщения основания побега.

Фиг. 3 — образовавшаяся клубнелуковичка в основании побега, Фиг. 4 — образовавшиеся клубнелуковички одеваются сухими чешуями.

Фиг. 5 — на образовавшейся клубнелуковичке появляется побег, который утолщается и формирует новую клубнелуковичку.

Фиг. 6 — клубнелуковички с корнями и побегами после обработки в растворе гетероауксина и выдерживания во влажной камере, Фиг, 7 — график зависимости количества образовывающихся клубнелуковичек от времени года проведения способа.

В табл. 1 приведены данные влияния различных сахаров на образование клубнелуковичек; в табл. 2 — влияние различных фитогормонов на образование клубнелуковичек в среде 1.

Как следует из примеров, в результате заявленного способа из одной клубнелуковицы можно получить до 1000 растений в год, т,е. коэффициент размножения равен

1;1000, В случае проведения способа в марте-мае (фиг. 7) месяце коэффициент размножения может достигнуть 1:1200, Формула изобретения

Способ микроразмножения шафрана посевного (Crocus satlvus L.), включающий получение растений из сегментов клубнелуковиц, отличающийся тем, что сегменты клубнелуковиц размером 0,7-2,0 см в ширину и 1,0-2,0 см в высоту помещают на питательную среду 1, содержащую минеральные соли по Мурасиге-Скугу, 1 мг/л никотиновой кислоты,10 мг/л тиамина, 1 мг/л пиридоксина, 10 мг/л глицина, 10 мг/л аденина, 10 мг/л тирозина, 100 мг/л инозита, 5 мг/л фолиевой кислоты, 500 мг/л глдролизата казеина, 70 мг/л агара, 0,1-5,0 мг/л гибберелловой кислоты, 0,1-10,0 мг/л бензиламинопурина и 20-30 г/л глюкозы, культивируют в течение 0,5-2,0 месяцев, затем переносят на питательную среду 2, содержащую все компоненты среды 1 и дополнительно 0,1-5,0 мг/л зеатина, 0,1-1,0 мг/л нафтилуксусной кислоты, культивируют до образования побегов в основании и

I появления клубнелуковичек, покрытых сухими чешуями, отделяют клубнелуковички и

1807844

Таблица 1

Табл и ца2 переносят на среду 3, содержащую половинный набор компонентов среды 1 по концентрации и дополнительно 0,5-5,5 мг/л индолилуксусной кисоты, культивируют до появления корней и побегов, помещают в раствор, стимулирующий корнеобразование, и выдерживают во влажном субстрате во влажной камере до формирования нормальных растений, 1807844

1807844

O m

g 4Ð

g a я 26

Й I 3 K У У И м а с язва

Составитель Л,Чучкина

Техред М,Моргентал

Корректор Л,Пилипенко

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1386 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5