Способ подавления повышенной чувствительности животных при введении туберкулина или малеина

 

Использование: в ветеринарии. Сущность изобретения: для снижения аллергического действия препаратов проводят путем их обработки 0,5 - 0.7%-ным раствором формалина в течение 5-10 дней при температуре 37 - 40°С, а введение препаратов туберкулина или малеина осуществляют в дозе 1,2 -5 мл в зависимости от вида животного однократно

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕ CKVIX

РЕСПУБЛИК (si)5 А 61 К 39/35

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4145786/15 (22) 12,08.86 (46) 07.07.93. 6юл. ¹ 25 (71) Сельскохозяйственный институт им. проф. И.И.Иванова (72) А.А. Е вгле вский (56) Медуницын Н,B. Повышенная чувствительность замедленного типа. М,: 1983, с.

83 — 84. (54) СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ПОВЫШЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЖИВОТНЫХ

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к методам подавления повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ), разработанными высокоэффективными толерогенами из аллергенов .с целью получения ускоренной специфической длительной десенсибилизации, изучения роли этого подавления, толерантности для диагностики заболевания и устойчивости организма к заражению или неспецифической реактивности в учебном процессе и эксперименте.

Цель — разработка эффективного способа подавления аллергии у животных за счет использования препаратов, обладающих повышенными толерогенными свойствами, обеспечивающие ускоренное проявление десенсибилизации, изучения роли этого подавления для изучения неспецифической реактивности организма в учебном процессе и эксперименте.

Для достижения поставленной цели в способе, заключающийся введением аллергенов, аллергеновые препараты, например

„„ЯЦ„„1825630 А1

ПРИ ВВЕДЕНИИ ТУБЕРКУЛИНА ИЛИ МАЛЕИНА (57) Использование: в ветеринарии. Сущность изобретения: для снижения аллергического действия препаратов проводят путем их обработки 0,5 — 0,7 (-ным раствором формалина в течение 5 — 10 дней при температуре 37 — 40 С, а введение препаратов туберкулина или малеина осуществляют в дозе 1,2 — 5 мл в зависимости от вида животного однократно. туберкулин для подавления туберкулезной аллергии, малеин для подавления ПЧЗТ при сапе. обработанные 0,5 — 0,7 ф,-ным раствором формалина в течение 5 — 10 дней при о

У

37 — 40 вводят однократно подкожно крупному рогатому скоту 4 — 5 мл, морским свинкам — 1,2 — 1,5 мл. Обработку аллергенов проводили с учетом того, что реакция формальдегид-белок (пептид) состоит из двух стадий. В течение первой стадии. быстрой и необратимой, происходит взаимодействие формальдегида с аминогруппами белка и особенно лизина с образованием метилоламинной группы. На втором этапе в реакции участвуют активные радикалы циклических аминокислот. содержащие фенольные, гуанидиновые и индольные группы. Наибольшее значение имеет соединение через формальдегид свободных аминогрупп лизина с СН-группами ядер тироэина и гистидина, которые характеризуются большой стойкостью. В результате блокирования свободных аминогрупп происходит увеличение отрицательных зарядов аллергенов, например туберкулина, малеина и т.д.

1825630

В целом. перестройка азотистого состава выражается в значительном уменьшении количества аминного азота и увеличении содержания высокомолекулярных пептидов в аллергене. Важное значение для увеличения десенсибилизирующих свойств формо;:аллергенов или их целесообразнее именовать оответствующим аллергену толерогеном или антиаллергеном имеет фиксация формальдегида, которая лучше происходит после стерилизации в течение 5 — 10 дней при 37 — 40 и рН 6,8 — 7,3. Для усил а;-I Q десен с и бил изи рующих свойств аллергенов проводились исследования по полy,ению толерогенов из туберкулина, ма. .е на. гафилококкового аллергена и т,д. путем обработки аллергенов циклофосфаном, ". .-меркаптопурином. фенолом, уротролиi:ом, формалином с адьювантами и без них с,ело индуцирования специфической есенсибилизации аллергии у животных. В ка:,естве здь:овантов использовали полизт:;ленгликоль.. идроксид алюминия, минеоальное масло,:1анолин, сапонин.

C "-.5ëã üíûe результать свыше 95% восле.:извод,:.мосги полной десенсибилизации ,1G!:учен . с использован"IeM нативных аллергенов. обраоотанных 0.5 0,7%-ным рас1зором формалина, 0,8 1,0% уротропина. Кроме формальдегида формалин содержи;-муравьиную кислотуи 10 12% метанола, котора е способствую-. сохранению устойчивости препарата, препят твуют его полимедизаци, Лзвестнс. что для лечения аллер;ических заáолеваний используется уротропин, гексаметилентетрамин}, который в кислой среде разлагается до образования формальдегида. а избирательность действия препаратов заключается в образовании гистамина при декарбоксилировании незаменимой аминокислоты гис 1 идина. В практике одним из ан.иаллергических пре-аратое являегся гистаглобулин, представляющий -..обой комплекс гамма-глобулина и

;истамина. Зтог г:репарат увеличивает спо: сбность организма связывать и инактивирова-.: вободный -истамин, выделяющийся при образоваь.и комплекса антиген-антитело у =енсибилизированных животных. В здоровом организме свободный гистамин быстрс инахтивируется.

Следовательно, соединение формальдегида с аминогруппами лизина, тирозина и

;:ëñTидина аллергенов один из вариантов пол,чения специфических антиаллергиче=ких средств, а т, . для дифференциации истинной и "ложной" аллергии у животных.

Возможно принцип получения толерогенов из аллергенов или других препаратов с помощ;.ю формалина, уротропина, сапонина

55 может представлять и другое значение замедленной аллергии.

С учетом полученных данных по десенсибилизации был определен количественный состав формалина. режим обработки при получении толерогенов. При внесении менее 0,5% формалина в аллерген, содержащий белка свыше 0,5 мг/мл для усиления десенсибилизирующих свойств препарата после стерилизации и инкубировании при

37 — 40 необходимо прибавление формалина до 0,2 — 0,3%, а использование формалина свыше 0,8% практически не отражалось на толерогенном действии препарата, В определенной степени соотношение формалина и белка должно находиться соответственно в пределах 0,5% формалина и 0,5 мгlмл белка или 0,6% формалина и 0,6 мгl мл белка для получения биологически активных десенсибилизирующих препаратов, При изучении толерогенных свойств ряда препаратов былоустановлено, чтодесенсибилизация крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин увеличением кожной складки в пределах 15 — 25 мм, наступает в 95% воспроизводимости через 24 ч после однократного подкожного введения формолбезальбумозного туберкулина в дозе 4 — 5 мл и продолжается 1,5 — 2 месяца, Десенсибилизация бецежированных морских свинок наступает через 24 — 30 ч после подкожного введения 1,2 — 1,5 мл формолтуберкулина, а морских свинок, сенсибилиэированных убитой сапной культурой подкожным введением также 1,2 — 1,5 мл формолмдлеина.

В медицинской и ветеринарной практике формалин применяется для консервирования патологического материала, дезинфекции, получения вакцин и анатоксинов из токсинов, Получение толерогенов иэ аллергенов с помощью формалина впервые использовано нами при обработке туберкулина, малеина стафилококкового и других аллергенов. Формолаллергены обеспечивают полную в 95% воспроизводимости десенсибилиэацию кожной чувствительности к соответствующему аллергену от однократного применения. В то же время при применении существующих способов десенсибилиэации необходимо курс введения препаратов от 30 до 60 в течение многих месяцев или проводить непрерывный курс в течение 2 — 3 лет.

Формолаллергены или толерогены технологически удобно и оперативно готовить путем обработки того или иного очищенного или нативного аллергена 0,5 — 0,7% формалина путем стерилизации с последующим выдерживанием в термостате при 37 — 40 в течение 5 -- 10 дней. или без стерилизации.

1825630

Формула изобретения

Способ подавления повышенной чувствительности животных при введении туберкулина или малеина, включающий снижение аллергического действия указанных препаратов. отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа, снижение аллергического действия препаратов проводят путем их обработки 0,5 — 0.7 -ным раствором формалина в течение 5 — 10 дней при 37 — 40 С, а их введение животным

40 осуществляют в дозе 1,2 — 5,0 мл в зависимости от вида животного однократно.

Составитель А. Евглинский

Редактор М, Никольская Техред М.Моргентал Корректор А. Козориз

Заказ 2297 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб,. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Но при инкубировании в течение 15 — 20 дней.

Пример 1. В опыте использовано 18 коров, сенсибилиэированных убитыми микобактериями туберкулеза бычьего вида со средним до15 — 20 мм увеличением кожной складки на внутрикожное введение туберкулина. За сутки до очередной туберкулинизации 6 коровам ввели 4 — 5 мл подкожно формолтуберкулин безальбумозный и 7 коровам формолтуберкулин безальбумозный с 17, гидроокиси алюминия и 0,5 сапонина. Через 24 ч всем животным был введен

ППД туберкулин, в т.ч. и 5 контрольным коровам, которым не вводили перед туберкулинизацией формолтуберкулин, При учете реакций через 24, 48 и 72 ч у

13 коров увеличение кожной складки до 2—

3 мм на введение туберкулина не отмечено, Животные первой группы были анергичны к туберкулину в течение 2 месяцев. У сенсибилизированных 5 контрольных коров увеличение кожной складки находилось на прежнем уровне.

Пример 2. Сенсибилизированным живой вакциной БЦЖ 17 морским свинкам подкожно 13 животным через месяц ввели по 1,2 — 1,5 мл формолбеэальбумозного туберкулина, а на следующий день внутрикожно по 0,1 мл ввели ППД туберкулин для млекопитающих в разведениях 1:100, 1:500, и 1:1000, При учете реакций через 24 ч у 15 морских свинок гиперемии кожи к туберкулину не отмечено, а у двух морских свинок реакции находились в пределах 10 — 12, 8—

9 и 7 — 8 мм соответственно вышеуказанным разведениям аллергена. У контрольных четырех свинок средние размеры диаметров гиперемии кожи составляли соответственно

14 — 16, 11 — 13, 9 — 10 мм.

П ример 3, В опытебыло использовано

11 морских свинок, сенсибилизированных убитой сапной культурой с реакцией в диа5

1О

30 метре 13 — 14 мм на внутрикожное введение

0,1 мл 1:20 разведения малеина эа 24 ч до очередного введения аллергена подкожно 9 животным ввели 1,2 — 1,5 мл формолмалеина. На внутрикожное введение малеина у 8 сенсибилиэированных морских свинок реакций не отмечено, а у одной — 50 интенсивности, по сравнению с реакциями у двух контрольных свинок.

По сравнению с прототипом, предлагаемый способ подавления аллергии за счет обработки аллергенов формалином обеспечивает воспроизведение ускоренного проявления десенсибилизации через 24 ч после однократного введения соответствующего толерогена (формолаллергена). безвреден, доступен, хорошо переносится животными, пригоден для оперативного изготовления и применения с целью изучения толерантности, специфической и неспецифической реактивности организма, а также для установления развития механизма толерантности и ее роли в усилении или ослаблении иммунитета, в диагностике и профилактике инфекционно-аллергических заболеваний.

Способ апробирован в учхоэе l4 1 Курского сельскохозяйственного института и может быть рекомендован для учебных, научных целей и практической иммунологии.