Производные пиридо[2,3-в]азепина, имеющие тормозящее действие в отношении обратной транскриптазы вируса hiv-1

 

Использование: в медицине, в качестве веществ, имеющих тормозящее действие в отношении обратной транскриптазы вируса Н IY-I. Сущность изобретения: производные пиридо (2, 3-Ь) азепина ф-лы, приведенной в описании изобретений. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОЛИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 5001742/04 (62) 4830844/04 (23) 28.08,90 (22) 23.09.91 (46) 15.08.93. Бюл. М 30 (31) 400253 (32) 29.08.89 (33) US (71) Берингер Ингельгейм Фармасьютикал

Инк.(US) и Др. Карл Тома ГмбХ. (0Е) (72) Гюнтер Шмидт (ЭЕ) и Карл Харгрейв (113) (56) J. Schmutz et al, Neue Synthee чоп

Lactamen der DIbenz (b, f)-1,4 1hIazeptnoxazepin und DIbenz (b, е) azeptn — Bethe.

НеЬ. Chtm, Аста, v, 48, Кт 2, 1965, р. 336 — 347.

Изобретение относится к новым биологически активным химическим соединениям, в частности к производным пиридо (2, 3-в) азепина общей формулы 1: 1

1ЙЗ )., где Х вЂ” э1 1м кислорода или серы, R1 — алкил с

1-5 атома ли углерода, алкенилметил с 3-5атомами углерода или алканоил с 2 — 3 атомами углерода, Rg — атом водорода. гидроксил или амино, R3 — атом водорода, алкил с 1-4 атомами углерода или амино. R4 — атом водорода или алкил с 1 — 4 атомами углерода, имеющим тормозящее действие в отношении обратной трэнскриптазгя вируса Н IY-I.

Новые соединения общей формулы (I) можно получать по нижеописэнным реакциям А-В.

„„1834890 АЗ (Я)л С 07 0 498/04, 513/04, А 61 К 31/55 (54) ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИДО (2, 3-В)

АЗЕПИНА, ИМЕЮЩИЕ ТОРМОЗЯЩЕЕ

ДЕЙСТВИЕ В ОТНОШЕНИИ ОБРАТНОЙ

ТРАНСКРИПТАЗЫ ВИРУСА HIY--I (57) Использование .в медицине, в качестве веществ, имеющих тормозящее действие в отношении обратной транскриптазы вируса

Н IY-1. Сущность изобретения: производные пиридо (2, З-b) азепина ф-лы, приведенной в описании изобретения. 1 табл.

А, Соединение общей формулы (lt) где Rz-B4 имеют вышеуказанные значения, переводят в его соответству:ощую соль 6— щелочного или щелочноэ мельного металла с последующим взаимодействием с соединением общей формулы (t tl):

R Y, (И1) где В1 имеет вышеуказанные значения, и Y означает отщепляемую группу.

В формуле (Il t) Y предпочтительно означает хлорид, бромид, йодид, алкил ил 4 эрилсульфонат, алкилкэрбонилоксигруппу или арилкарбонилоксигруппу.

Реакцию осущестеля.от в известных условияx алкилирования и ацилиpîíания.

Предпочтительно реакцию осуществляют в

1

1 д

iQ0

1(Л)

1 !

Ср С

1С}

1834881 дробленных пород с содержанием кремнезема 60-71, железа (общего) 11-25 и состоящих из сростков кварца с гематитам, магнетитам, сидеритом и т.д.

Кроме того, совместный помол цемента и кварцитов в соотношении 1;1 обеспечивает наиболее полное связывание влита и белита с кременеземом в смеси. При повышен най дисперснасти не тол bKo увеличивается степень взаимодействия компонентов, но и улучшается структура новообразований из-за повышения активности сырья. Помол компонентов до удельной поверхности 300-400 м./кг приводит к

2 полу унию более монодисперсной смеси, т.е. образованию в.процессе диспергирования более:однородной и равномерной па форме и размерам частиц смеси.

ОЩМР представляет собой отработан-. ный моющий раствор щелочи,. образующийся на стадии мойки ферментеров. и посевных аппаратов З раствором NaOH после освобождения их от лизина,:и содержит: лизин (содержание аминного азота

Имн2 0,01-0,1 ); соли аммония, в том числе хлористый и фосфорнокислый (содержание аммонийного азота. Имнз 0,01-0,1 ); щелачь 0,4-1,0 ; вода остальное.

Использование вместо воды затворения при перемешивании компонентов

ОЩМР оказывает палифункцианальное действие на качественный состав бетонной смеси, Так, при температуре да 80ОС О ЩМР выступает в качестве плвстифицирующей добавки из-за присутствия в ней солей аммония и следов лизина, чта позволяет снизить водопотребнасть и улучшить удобаукладываемость бетонной смеси. С повышением температуры при термовлажнастной обработке бетона в действие вступает имеющаяся в

ОЩМР щелочь (NaOH), которая интенсифицирует растворение кремнезема и твердение силикатного материала.

Присутствие в составе хвостов природных минералов, в основном железосодержащих, дает возможность им выступать в качестве кристаллической подложки (за. травки) и обеспечивать срастание гидрасиликатов кальция с ее поверхностью. Такое зародышеобразование энергетически бопее вы годно.

Пример. Часть заполнителя — хвосты обогащения железистых кварцитов с модулем крупности 0,01-2,5, раэмалывают в шаровой мельнице с цементом М-400 (портландцементом) по удельной поверхности

300-400 м /кг. Полученный компонент перемешивают в смесителе с крупным заполнителем — хвостами обогащения кварцитов

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ приготовления бетонной смеси, включающий смешение цемента с заполнителем, наполнителем и водой затворения с добавкой ПАВ, отличающийся тем, что, с целью повышения прочности и сокращения длительности тепловой обработки иэделий, сначала осуществляют смешение цемента с заполнителем M

Mi

В лабораторных условиях из приготовленных по заявляемому способу и по прототипу смесей формуют кубики размером

10 х 10 х 10 см, которые пропаривают при

"0 температуре 95 — 100 С. Соотношение кремнезема и цемента при приготовлении мел.кой фракции заполнителя, а также временной режим теплавлажностной обработки и полученные результаты отражены в

"5 таблице.

При соотношении 1.0,5 цемента и хвостов обогащения кварцитав увеличивается расход. цемента, что приводит к удорожа . нию иэделий, а при соотношении 0,5:1 рас20 хад цемента снижается, что соответственно уменьшает прочность изделий, а эта нежелательно, При соотношении 1;1 цемента и хвостов обогащения кварцитов наблюдается наибо25 лее полное связывание алита и белита с кремнеземом смесИ, что приводит к увеличению прочности готовых изделий.

Удельная поверхность смеси цемента и заполнителя ниже 300 м /кг не абеспе30 чивает заданную прочность изделий. а выше 400 м /кг требует большого расхода электроэнергии при помоле и экономически не выгодно.

Использование предлагаемого способа

35 приготовления бетонной смеси позволяет по сравнению с прототипам сократить цикл тепловлажностной обработки и повысить прочность готовых изделий, а также утили зировать значительное количество отходов

40. промышленности.

1834890

55 твердого остатка гексаном перекристаллизовывают из смеси этилацегата и гексана и получают 0,66 r (14 % теории) целевого продукта в виде желтых кристаллов с точкой плавления 148-149 С, Пример 3, З-амина-б, 9-диметилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5(бН)-он а)2-окси-5-нитроникотиновая кислота.

10 мл (0,24 моль) дымящей азотной кислоты (d 1,5) добавляют к раствору 14 r (0,1 моль) 2-оксиникотиновой кислоты в

40 мл концентрированной серной кислоты.

Полученную смесь нагревают при температуре 50 С: в течение 4 ч, затем осторожно выливают в ледяную воду. Собирают светлооранжевый осадок, промывают холодной водой, и затем перекристаллизовывают из воды. Получают 13,3 г (72 % теории) почти чистого соединения в виде желтоватых кристаллов с точкой плавления 2400С, которые можно использовать для проведения последующей стадии. б)2-хлор-5-нитроникотиновая кислота

Раствор 9,2 г (0,05 моль) 2-окиси-5-нитроникотиновой кислоты в 25 мл хлорокиси фосфора нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч. Растворитель удаляют в вакууме, и остаток растворяют в смеси тетрагидрофурана и простого эфира. После охлаждения раствора в ледяной ванне при размешивании осторожно каплями добавляют воду до разделения слоев. Органический слоЙ промывают водой и насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и сгущают. В результате перекристаллизации из простого эфира получают 6,94 г (69 % теории) чистого ,соединения с точкой плавления 135 С (разложениеие). в) 2-хлор-5-нитро-(3-оксиитол-4-ил)-3пиридинкарбоксамид.

Смесь 6,1 г (0,03 моль) 2-хлор-5-нитроникотиновой кислоты и 15 мл тионилхлорида нагревают с обратным холодильником в течение 3 ч, Растворитель удаляют в вакууме, и хлорангидрид кислоты растворяют в

150 мл тетрагидрофурана, Полученный раствор медленно при температуре 0 С в атмосфере аргона добавляют к раствору 4 г (0,03 моль) б-амино-м-крезола в 7 мл (0,04 моль) N, N-диизопропилэтиламина и

150 мл тетрагидрофурана, и полученный раствор перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют водой, экстрагируют простым эфиром, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом магния и сгущают до половины обьема. Вязкий оранжевый сырой продукт собирают и

40 размешивают в 50 мл метиленхлорида l! течение 30минут. Осадок промывают метиленхлоридом и сушат на воздухе, s результате чего получают 6,3 г (68 % теории) чистого соединения в виде порошка интенсивного оранжевого цвета. г) 3-нитро-9-метилпиридо (2, 3-в) (1,5) бензоксазепин-5-(б Н)-он

Смесь 6,3 г (0,02 моль) 2-хлор-5-нитроN-(3-оксиитол-4-ил)-пиридин кар боксами да и 100 мл пиридина при температуре

90 С в течение 2,5 ч нагревают в атмосфере аргона. Охлажденный раствор разбавляют водой, желто-оранжевый осадок собирают и промывают водой. Твердое вещество в течение 45 минут перемешивают в 100 мл горяче воды, фильтруют и промывают этанолом и простым эфиром, в результате чего получают 4,3 r темнокоричневого твердого вещества, Путем перекристаллизации из смеси диметилформамида и воды получают 3,76 г (69 % теории) продукта. д) З-нитро-б, 9-диметилпиридо (2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5(6Н}-он

К суспензии 0,73 г (0,015 моль) 50 %-ной суспензии гидрида натрия в минеральном масле в 75 мл диметилформамида B атмосфере аргона добавляют 3,75 с (0,14 моль)

З-нитро-9-метилпиридо(2, 3-Ь) (1,5)бензоксазепин-5(6Н)-она, Доба: ляют 1,3 мл (0,021 моль) метилйодида,.и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют ледяной водой, и осадившийся продукт собирают и промывают водой и петролейным эфиром.

Сырой продут перекристаллизовывают из этилацетата, в результате чего получают

3,14 г (79 % теории) продукта в виде желтого твердого вещества с точкой плавления 197—

198 С, е) З-амино-б, 9-диметилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5(6H)-он.

К суспензии 1,6 г (5,6 моль) З-нитро-6,9диметилпиридо(2, 3-в) (1.5)бензоксазепин5-(áH)-она в 30 мл уг-.усной кислоты добавляют раствор 10 r (44 моль) дигидрата хлористого олова в 13 мл концентрированной соляной кислоты, Полученную. смесь перемешивают в течение 3 ч, осадившийся продукт фильтруют и промывают простым эфиром. Затем продукт растворяют в воде, подщелачивают 2 NHGTpGBblM щелоком, экстрагируют flpoстым эфиром и этилацетагом, сушат над безводным сульфатом магния и сгущают.

Путем кристаллизации из смеси этанола и гексана 0,82 г (57 % теории),<истого продукта в виде темных иголок с,ë÷êîé плавления 191 — 193 С.

1834890

П р и и е р ы 4-15.

Соединения нижеследующих примеров получают аналогично описанным в примерах 1 — 3 методам.

Пример М:

4. З-амино-6, 7, 9-триметилпиридо(2, 3в) (1,5)-бенэоксазепин-5(6Н)-он, точка плавления: 234 — 236 С;

5. З-амино-7,9-диметил-б-этилпиридо(2, 3-в) (1,5) бензоксазепин-5(6Н)-он точка плавления: 232-234 С;

6. З-амино-7, 9-диметил-6-(н-пропил)пиридо(2, З-e)(1,51-бензоксазепин-5(6H)-он, точка плавления:195 — 197 С..

7. 6-метилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксаэепин-5(6Н)-он, точка плавления: 107109 С.

8.6-этилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5(6Н)-он — точка плавления: 8183 С.

9. 6-аллилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксаэепин-5(6Н)-он, точка плавления, 5860 С, 10. 6-пропионилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксаэепин-5(6Н)-он, точка плавления: 111113 С.

11. 6; 9-диметилпиридо(2, 3-e) (1,5)бенэоксазепин-5(6Н)-он, точка плавления 165168 С, 12. 6-атил-9-метилпиридо(2, 3-в) 1,5)бенэоксаэепин-5{6Н)-он, точка плавления: 114116ОС.

13. З-окси-6, 9-диметилпиридо{2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5{6Н)-он, точка плавления: 257 — 258,5 С.

14. 7-амино-б-этилпиридо(2, 3-в)

{1,5)бензоксазепин-5(6Н)-он, точка плавления 114-116 С.

15, 6-метилпиридо(2, 3-в) (1,5)бензоксазепин-5{6Н)-он, точка плавления: 1721740С.

В нижеследующем описан проведенный с применением новых соединений опыт, который показал, что они тормозят активность обратной транскриптазы Н IYl, зависящей от РНК ДНК-полимеразы.

С помощью нижеописанного опыта с применением обратной транскриптазы можно испытывать способность соединений к торможению активности обратной транскриптазы Н IY-I, зависящей от РНК

ДНК-полимеразы. Описанным методом испытывали соединения примеров 1-15.

Результаты опытов приведены в нижеследующей таблице.

Опыт с применением обратной транскриптазы

Теория опыта:

Среди энзимов, кодирующих вирус иммунодефицита человека HIY-I, находится и

После удаления нерастворимых нежелаемых компонентов путем центрифугирования осаждают белок путем добавления 3 объемов насыщенного водного сульфата аммония, после чего сгущают и остаток повторно суспендируют в буфере обратной транскриптазы (50 ммоль трис. рН 7,5; 1 моль этилендиаминотетрауксусной кислоты, 5 моль ДТТ (1, 4-димеркапто-2, З-бутандиола), 0,1 % поверхностно-активного вещества NP-40;

0,1 моль хлорида натрия и 50 % глицерина), и хранят при температуре - 70 С до использования. обратная транскриптаза (1), названная так, потому, что она транскрибирует копию ДНК с матрицы РНК, Эту активность можно определять количественно в рамках известно5 ro опыта с применением энзима без клеток, основанного на наблюдении того, что обратная, транскриптаза в состоянии испольэовать синтетическую матрицу (поли r{C), снабженный олиго d{C)j для транскрипции

10 радиомаркированной, поддающейся осаждению кислотой однонитьевой ДНК, причем

ЗН -dGTP используется в качестве субстрата.

Материалы:

15 а) Выделение энзима

Обратная транскриптаза из штамма

LAV вируса иммунодефицита человека Н IY-i (1) выделяют из штамма бактерии IM 109 (3), экспрессирующей клон pBRTprti + ДНК, 20 контролируемый промотором lac в экспрессионном векторе plH 121 {4). Культивированную в среду 2 ХУТ (при 37 С и 225 o6/мин) (5) в течение ночи культуру, в которую в целях положительной селекции подают

25 100 мкгlмл ампициллина {5), инокулируют при разбавлении 1, 40 в среде М9, содержащей 10 мкг/мл тиамина, 0,5 % каз-аминокислот и 50 мкг/мл ампициллина (5).

Культуру инкубируют при температуре

30 37 С при 225 об/мин до достижения оптической плотности 0.3 — 0,4 при 540. В этот момент добавляют репрессорный ингибитор изопропил "P-D òèîãàëàêòonèðàíîñèä до достижения концентрации 0,5 ммоль, и

35 продолжают инкубировать в течение 2 ч после чего сгущают и остаток повторно суспендируют в 50 ммоль трис-буфера, содержащего 0,6 ммаль этилендиаминотетрауксусной кислоты и 0,375 моль хлорида

40 натрия и добавлением лизозима в количестве 1 мг на мл переваривают в течение 30 мин на льду. Клетки растворяют подачей в 0,2 % поверхностно-активного вещества NP-40, а затем подают в 1М хлорида

45 натрия.

1834881 с Ф

o <

m к

O О:Е а сп

c z

° Î ("Ъ

LA

СЧ

О) сО Ф co co a

n O ССЪ 1- СО СП

СЧ СЧ CV CV СЧ СЧ

00 LA СО СЧ Ct э съсоо- СЧ CV СЧ

< о"> с X ! v

vo ,o v r х .ООх х х

С, !С

СЧ СЧ С"Ъ CV СЧ СЧ CV.СЧ СЧ

Ф LA CD ., СЧ о о о

СЧ с,! е4 с, СЧ СЧ сч сч

О с !!. !

= и

e o,z +

*ОО

СС М Х!СЪ

Х m m

Фс а.

o.e а

11Ъ о

Ql

СЪ СЧ СЪ

+ +

СО С!Ъ со

+ + +

С > СЧ С"З! с Ф Z

lX V e o " с

m o

z z с Х !с Д с ао е Ф е Б

<Ф 2 е о !0 х

Ол ! о !-, eåo

О X и

Ь ООООО

О O ID O ID O

Ct Ъ СЧ СЪ С"Ъ Ct

ОООО ОО

lD LA LD O ID O

СаЪ С Ъ CV С Ъ СаЪ Г

О SX О е ;+IX

jv Ф

Б,о 2 оооо а а- а—

C"CV ! !

1,... 1 1 1 I

Ш

О ;

m cx m

m Б у

oem

CLI aLO! I I I I !

I 1 I I I I

Ctl

LA .СЪ ! ! а

1 I I I ! со о

1me! х !

e l- l l»

oЕхXО

ХФСФС

)- 2т О О О

О с vX

ОБИЛО

О Ф щ

ОЗ

1 I I I

LDz r а а

1 I I с3 а и

СЧ

ID

О и е >+i

5 ал

L c

Щ

z о

lФ !

СЪ

5 с

Ф

Щ

Я

V

-О

О

e o

0.

5

Щ

C e

О а

Ф

IX а. K

Z е

o !

= о

u ""

1, .; с

ФУ О !

- с 1" -

vemс

m Q co e !

vie

mФ. т

Е а

C

Б

О

l» о

Cl (.Ь ОЪ ОЪ ОЪ Cll

СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ

+++++

ID ID lD ID LP

СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ

СЧ СЧ СЧ СЧ СЧ ,+, СЧ СЧ СЧ CV СЧ

1834890

Примечание. * 1.мкмоль

2,5 мкмоль

Составитель Н, Капитанова

Техред M,Ìîðãåíòàë - Корректор Н. Кешеля

Редактор Л. Павлова

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. ужгород. ул.Гагарина. 101

Заказ 2704 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5