Противовирусное средство

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии инфекционных болезней. Цель изобретения - повышение эффективности в отношении лекарственно устойчивых вирусных штаммов. Для этого в организм, пораженный вирусной инфекцией , вводят трентал в качестве противовирусного средства. 5 табл.

< ОСЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

I (я)5 А 61 К 31/52

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

З (21) 4909731/14 (22) 07,02.91 (46) 23.08.93. Бюл. М 31 (71) Институт вирусологии им. Д,И,Ивановско1 о (72) В,И,Вотяков, Т,В.Амвросьева, Г.В,Владыко, С.Н,Николаева, О.Т,Андреева, С.Г.Сервет ченко, Н,Д.Коломиец, Г,А,Галегов, И.И,Протас, М,М.ÃàðàåB и В.В,Покровский (56) Вотяков B.Н., Андреева О,Т., Латышева С,В., Полещук Н,Н., Даревский В.И., Ренгарт Т,И.

Лечение ацикловиром больных рецидивирующим герпетическим стоматитом, ж, Здраво° охранение Белорусси, 1986, М 3, с, 40 — 42.

Изобретение относится к разделу вирусологии и может быть использовано для решения задач, связанных с ингибированием вирусных инфекций.

Поиск антивирусных средств среди официальных препаратов является сегодня особенно актуальным в связи с тем, что разработка ингибиторов вирусной активности из химических соединений остается процессом очень длительным, занимающим

10 — 15 лет. При этом, не исключено, данный процесс на определенной стадии может быть вообще сорван из-за возникающих технологических, технических, организационных или других сложностей, Цель изобретения: поиск высокоэффективного антивирусного средства в отношении лекарственно устойчивых вирусных штаммов.

Цель достигается применением сердечно-сосудистого препарата трентал, Трентал известен как средечно-сосудистое спазмолитическое средство. Оказыва Ы, 1835291 А1 (54) ПРОТЙВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО (57) Изобретение относится к медицине, а именно к фармакотерапии инфекционных болезней. Цель изобретения — повышение эффективности в отношении лекарственно устойчивых вирусных штаммов. Для этого в организм, пораженный вирусной инфекцией, вводят трентал в качестве противовирусного средства. 5 табл. ет сосудорасширя ющее действие, способствует улучшению снабжения тканей кислородом, и н ги би рует фосфодиэсте разу и вызывает накопление в тканях циклического АМФ, тормозит агрегацию тромбоцитов д и уменьшает вязкость крови. Применяется Со при нарушениях периферического кровообращения и цереброваскулярной патологии (атеросклеротических нарушениях, ишеми- О ческих состояниях и др.), ври сосудистой M патологии глазного дна, при диабетических ангиопатиях. ° 3

Новизна изобретения заключается в обнаружении у трентала новых биологических сВоАсТВ в виде антивирусного действия.

Неочевидность изобретения состоит в том, что нельзя было предложить наличие у широкоприменяемого в кардиологической практике препарата, обладающего лечебным эффектом при врдечн<и:осудистой патологии, новой функции — ингибирование вирусов, 1835291

Неожиданность положительного эффекта заключается не только в обнаружении новой биологической активности подавлять вирусную репродукцию, но и в выявлении высокой эффективности ингибиции широкого спектра РНК- и ДНК-содержащих вирусов с воздействием на лекарственно устойчивые вирусные штбммы.

Пример 1. Изучение ингибирующей активности препарата трентал в отношении

10 вируса простого repneca (штамм 1С) осуществтоксичным препаратом для культуры клеток (МПК-800 мкг/мл), обладал выраженным ингибирующим действием в отношении виру55 са простого герпеса (штамм 1С), Так, в дозе

100 мкг/мл он полностью подавлял репродукцию вируса в культуре (табл.1), Изучение ингибирующей активности трентала в отношении вируса герпеса, резиляли ин витра на трипсинизированной культуре фибробластов эмбрионов кур (ФЭК).

Культуру клеток, выращенную на чашках Петри ("скрининг-тест") и дне пенициллиновых флаконов (метод редукции бляшек) отмывали от ростовой среды и вносили

0,001-0,00001 ВОЕ/клетка вируса. После адсорбции при 37 С вирус удаляли и моно, слой покрывали твердым питательным по- 20 крытием, приготовленным на основе среды

199+ 1% агара+ 0,005% нейтрального красного. На инфицированные чашки Петри, покрытые агаровым покрытием, вносили в стеклянные трубочки (0,05 мл) препарат, По- 25 сле инкубации при 37 С определяли диаметры зон токсичности и подавления образования бляшек (мм), Используя метод редукции бляшек, препарат добавляли в различных концентрациях в состав твердо- 30 го агарового покрытия. После инкубации при 37 С в течение 48 — 72 ч определяли инфекционный титр вируса как в присутствии препарата, так и беэ него. Критерием антивирусной активности служило сниже- 35 ние титра вируса в присутствии препарата в сравнении с контролем. Минимальной активной концентрацией (МАК) считали снижение титра вируса в сравнении с контролем на 1,25

Ig БОЕ/кл. 40

Определение токсичности для культуры

ФЭК проводили путем инкубации клеток при

37 С в присутствии различных концентраций препарата в течение 96 часов. Максимально переносимой концентрацией (МПК) считали наивысшую дозу, не вызывающую цитодеструктивных изменений клеток при регистрации под малым увеличением микроскопа.

Химиотерапевтический индекс (ХТИ) определяли как отношение МПК/MAK, 50

В результате проведенных исследований оказалось, что трентал, являясь малостентного к действию ацикдовира (штамм

АЦВ) осуществлялось по той же схеме. При этом в качестве сравнительного контроля был взят официнальный препарат ацикловир, Полученные результаты свидетельствовали о выраженной способности трентала подавлять репродукцию АЦВР в культуре, ФЭК, который в этих >ке условиях не ингибировался ацикловиром. Применяя дозу препарата, равную 100 мкг/мл, удавалось полностью ингибировать размножение ацикловиррезистентного штамма с инфекционным титром 4,64 lg БОЕ/мл (табл.1).

Пример 2. Изучение противогерпетической активности трентала в системе ин виво осуществлялось на модели экспериментального герпетического менингоэнцефалита мышей. Мышей (вес 7-10,граммов) заражали штаммом. "Коптев" интраобдоминально в дозе 100 LDgo Трентал в толерантных дозах вводили внутривенно в объеме

0,2 мл по следующей лечебной схеме: через

4 часа после инфицирования, затем однократно, в течение 7 дней ежедневно. Результаты оценивали по летальности леченых животных в сравнении с группой плацебо, получаемой внутривенно Q,85% раствор

NaCl по аналогичной схеме.

Полученные результаты представлены в таблице 2, Как видно, трентал проявлял выраженный защитный эффект- снижение летальности в .группе леченных животных составило 66,6 — 75% . При этом высокая степень антивирусной активности сочеталась с большой широтой защитного эффекта — ХТИ препарата превышал показатель 100.

Испытанные дозы препарата были толерантными для мышей, При их внутривенном введении токсические явления не отмечались, Особого внимания заслуживает тот факт, что препарат сохранял противовирусную активность в очень низких дозах, по крайней мере, в 100 раз меньших по сравнению с фармакопейными, Пример 3, Изучение ингибирующей активности трентала в отношении вирусов осповакцины осуществляли по схеме, описанной в примере 1, Полученные результаты свидетельствовали о способности препарата существенно подавлять репродукцию вирусов осповакцины (ВОВ) в культуре. При этом препарат ингибировал как чувствительный к метисазону лабораторный штамм (ВОВ, так и резистентный штамм вируса (ВОВ, который естественно, не подавлялся метисазоном (табл.3).

Пример 4, Изучение ингибирующей активности трентала в отношении ротавируса (штамм A) осуществляли по обычной, уже описанной в примере 1 схеме. Исследо1835291

Таблица 1

Характеристика ингибирующего действия трентала в отношении вирусов простого герпеса (ВПГ) *! С вЂ” лабораторйый штамм ВПГ, чувствительный к действию ацикловира; инфекционный титр 4,77 Ig БОЕ/мл.

**АцВр — ацикловиррезистентный штамм ВПГ; инфекционный титр 4,641g БОЕ/мл вания проводили на перевиваемой культуре клеток почки зеленой мартышки (MA — 140).

МПК препарата для данной культуры составила 800 мкг/мл, что соответствовало таковой на клетках ФЭК. В результате проведенных исследований оказалось, что трентал, используемый в концентрациях 800, 400, 200 и 100 мкг/мл, снижал инфекционный титр более, чем на 1,34 Ig БОЕ/мл, что, согласно принятой оценки антивирусного действия (7), свидетельствует о наличии у него противоротавирусной активности (табл.4), Пример 5. Изучение ингибирующих свойств трентала в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1) осуществляли на культуре лимфобластоидных клеток MT4. В резуЛьтате проведенных исследований оказалось, что препарат, будучи мвлотоксичным для данной клеточной культуры (МПК = 400 мкг/мл), обладал выраженной способностью подавлять накопление внутриклеточных ВИЧ-антигенов. Так, по данным иммунофлуоресцентного анализа трентал в дозах 4, 20 и 200 MKf /MR ингибировал аккумуляцию ВИЧ-антигенов в клетках на 55; 63 и 68 соответственно, что, согласно принятой системе оценки (), позволяет отнести его к препаратам, обладающим анти-ВИЧ активностью. В этих же дозах трентал значительно снижал инфекционный титр вируса. Доза препарата в 200 мкг/мл оказалась достаточной для полного подавления репродукции ВИЧ с титром 4 Ig

ТЦД50/мл (табл.5). При этом высокая степень антивирусной активности трентала сочеталась с большой широтой его ингибирующего действия — ХТИ препарата составил 200, Изучение трентала в вирусологическом скриннинге при использовании других тествирусов выявило, дополнительно к описанным примерам, его ингибирующую активность в отношении вируса везикулярного стоматита (штамм Индиана).

Таким образом, цель изобретения достигнута. Выявлено высокоэффективное антивирусное средство. подавляющее

10 лекарственно устойчивые вирусные атаммы. Как видно из примеров 1-5, трентвл, являясь малотоксичным препаратом, суще ственно, а иногда полностью подавлял репродукцию вирусов в культуре (от 50$ до

15 100@, а также обладал защитным эффектом в условиях экспериментальной инфекции ин виво. (66,6 — 75,07ь), что позволяет считать ецо (согласно общепринятой системе оценки) высокоэффективным ингибито20 ром вирусной активности. Способность же препарата существенно подавлять репродукцию ацикловир и метисазонрезистентных штаммов позволяет считать его высокоэффективным ингиби ором лекарст25 венно устойчивых вирусов.

Положительный эффект трентала в отношении целого ряда ДНК-и PHK-содержащих вирусов, простого герпеса, осповакцины, иммунодефицита человека, 30 Ъезикулярного стоматита и ротавируса позволяет отнести его к антивирусным средствам широкого спектра действия.

Формула изобретения.

Применение трентала в качестве проти-. вовирусного средства.

1835291

Таблица 2

Эффективность препарата трентал на модели экспериментального герпетического менингоэнцефалита мышей. а) " ++++" — степень активности высокая

Таблица 8

Характеристика ингибирующего действия трентала в отношении вирусов осповакцины.

*BOB" - чувствительный к метисазрну вирус осповакцины.

**SOBР— резистентный к метисазону вирус осповакцины.

Таблица 4

Влияние трентала на репликацию ротавируса (штамм SA) в культуре клеток MA-140.

1835291

Табл и,ц.а 5

Ингибирующее действие трентала в отношении ВИЧ-1

Составитель Г. Ефремов

Редактор Н. Козлова Техред M.Moðãåéòàë Корректор! А. Обручар

Заказ 2970 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Ф

* Данные иммунофлуоресцентного анализа с использованием человеческой поликлональной антисыворотки, полученной от вирусоносителей; рабочее разведение 1:460, ** Исходный титр вируса составлял 4 lg ТЦДьо!мл.