Способ диагностики непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов

 

Использование: медицина Целью изобретения является повышение точности, скорости, упрощение способа. Сущность изобретения: кровь инкубируют с нестероидным противовоспалительным препаратом в присутствии люминола и регистрируют максимум интенсивности хемилюминесценции клеток цельной крови после стимуляции их взвесью кварцевого песка. Максимум интенсивности хемипюминесценции опытной пробы делят ia величину максимума интенсивности хемилюминесценции в контроле (без нестероидных противовоспалительных препаратов) и при их отношении менее 0,85 диагностируют непереносимость больным нестероидных противовоспалительных средств. Изобретение позволяет повысить точность способа, упростить и ускорить его. 1 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4952157/1 4 (22) 28.06.91 (46) 15.11.93 Бюл. Мю 41-42 (71) Научно-исследовательский институт физикохимической медицины (72) Решетова Н.В.; Дидковский НА; Владимиров

ЮА; Путвинский АВ„Малинин B.Ñ„ Трескунов В.К. (73) Дидковский Николай Антонович (54) CllOCOB ДИАГНОСТИКИ НЕПЕРЕНОСИМОСТИ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕПЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ (57) Использование: медицина Целью изобретения является повышение точности, скорости, упрощение способа. Сущность изобретения: кровь инкубируют (19) RU (11) 2003106 С1 (51) 5 О01ИЗЗ 48 с нестероидным противовоспалительным препаратом в присутствии люминопа и регистрируют максимум интенсивности хемилюминесценции клеток цельной крови после стимуляции их взвесью кварцевого песка. Максимум интенсивности хемилюминесценции опытной пробы делят а величину максимума интенсивности хемилюминесценции в контроле (без нестероидных противовоспалитепьных препаратов) и при их отношении менее 0,85 диагностируют непереносимость больнь1м нестероидных противовоспалительных средств. Изобретение позволяет повысить точность способа, упростить и ускорить его. 1 табл.

2003106

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, предназначено для диагностики и контроля эффективности лечения бронхиальнай астмы с непереносимостью нестероидных противовоспалительных и репаратов, а также для определения реакции немедленного типа в виде кожных проявлений непереногимости нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП).

Существующие методы непереносимости НПВП не могут полностью удовлетворить клиницистов; одни иэ них достаточно чувствительны, но опасны, специфичны, но недостаточно точны (методы in vivo); другие — безопасны, специфичны, но недостаточно точны (методы in vItro). Поэтому в настоящее время ведутся работы с целью создания специфичных методов диагностики непереносимости НПВП 1п чйго. Разработка отечественными специалистами высокочувствительных, доступных по цене и удобных в эксплуатации хемилюминометров позволила в значительной степени 06bективизировать результаты проводимых исследований, упростить методы выявления непереносимости лекарственных средств. Была изучена хемилюминесценция сывороток крови больных с непереносимостью туберкулостатических препаратов (стрептомицин, иэониаэид, ПАСК) при добавлении лекарств и получено статистически достоверное повышение интенсивности . хемилюминесценции, чего не наблюдалось в контрольных группах, Однако этот метод оказался не применим у больных с непереносимЬстью НПВП в аллергологической и рактике. Поп ытка применения указан ного метода у больных с непереносимостью

НПВП дала отрицательные результаты, что, по-видимому, связано с высокой концентрацией циркулирующих антител при длительном применении туберкулостатических препаратов у больных во фтизиатрической клинике, чего не наблюдается у больных с непереносимостью НПВП.

Известно описание диагностики гиперчувствительности при помощи реакций полиморфно-ядерных лейкоцитов с аллергенами инфекционного ряда, Однако этот метод не нашел своего применения в диагностике сенсибилизации к лекарственным средствам. Учет изменений в структуре ядра и цитоплазме нейтрофилов, возникающих под воздействием аллергена является достаточно достоверным методом диагностики, однако требует специальной гистохимической обработки и окраски мазков крови после инкубации с аллергеном, Трудности внедрения того метода в клиническу,о прак5

50 тику связаны также с многоплановостью внутриклеточных дегенеративных изменений, что требует специальной подготовки персонала, выраженность ряда критериев зависит от качества красителя и техники обработки мазков. Кроме того продолжительность проведения теста показателя повреждения нейтрофилов около 4 ч, В настоящее время для выявления бронхиальной астмы с непереносимостью нестероидных и ротивовоспалительных препаратов в клинике применяется энтеральная проба с аспирином или анальгином. Она заключается в исследовании функции внешнего дыхания до и через час после приема больным 5 мг аспирина (анальгина) или плацебо, Если фиксируется снижение бронхиальной проходимости, то пробу расценивают как положительную, При отсутствии признаков бронхоспаэма дозу препарата удваивают, наращивая ее постепенно до 535 мг, контролируя функцию внешнего дыхания после приема ка>кдой дозы. Этот метод позволяет оценить реактивность бронхов и чувствительность больного к нестероидным противовоспалительным средствам. Однако необходимость давать больному препарат, который может вызвать развитие приступа удушья, является крайне отрицательным моментом в проведении этой пробы, Наиболее близким к предлагаемому способу является метод диагностики непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов In vttro c применением флюоресцентного зондирования зондом катионом ДСМ. Способ достаточно специфичен, чувствителен, однако применение его в широкой клинической практике затруднено из-эа необходимости использования тканей лабораторных животных (тимуса крыс), Кроме того, подсчет результатов под микроскопом снижает точность метода из-эа субъективности зрительного восприятия исследователя, Данный способ взят за прототип.

Целью изобретения является создание способа диагностики непереносимости нестероидных противовоспалительных препаратов, удобного для применения в клинической практике.

Цель достигается путем измерения стимулированной кварцем максимальной люминолзависимой хемилюминесценции цельной крови в присутствии нестероидных противовоспалительных препаратов и е контроле, и при значении этого отношения менее 0,85 диагностируют непереносимость этих средств (соотношение компонентов реакции в пробе состявлявг (3-9)- 10

2003106 хемилюминесценции. По показаниям ком-. ц пьютера регистрируют величину максимума j интенсивности свечения (ХЛ-1). К 0,5 мл кро- i В ви добавляют 20 мкл 57-ного раствора р анальгина (0,5-1,5 мг/мл), В кювету хемилю- 20 и минометра с 2 мл 5%-ного раствора люми- с нала вносят 20 мкл крови с анальгином. н

Стимуляцию азвесью кварцевого песка про- н водят в той же концентрации, регистрируя величину максимума интенсивности свече- 25 Д ния опытной пробы (ХЛ-2). Определяют ко- н эффициент изменения максимума т хемилюминесценции: н

ХЛ вЂ” 2 э хл К= ХЛ 30

8 случае снижения хлК менее 0,85 диагно- . н стируют непереносимость больным несте- н роидных противовоспалительных препаратов, к

Отношения компонентов в пробе вы- 35 р браны на следующем основании: т

1) при концентрации в среде анальгина л менее 0,5 мг/мл снижается выраженность т вспышки люминесценции а ответ нэ стиму- н ляцию кварцем, менее выраженной стано- 40 л витая разница максимума в опытном и х контрольном образце; х

2) при концентрации анальгина выше м

1,5 мг/мл в пробе наблюдается нарушение гр корреляции результатов пробы с провока- н ционным тестом, так как высокие концент-: н рации препарата могут оказывать те повреждающее действие на клетки крови, 0 что искажает результаты исследования; 0 и

3) при снижении концентрации в реак- зу ционной смеси взвеси кварцевого песка ме- с нее 2,5 мг/мл происходит увеличение сп времени нэступяения максимума интенсив- со ности хемилюминесценции до 20 мин, что значительно увеличивает время проведения пробы;

4) при увеличении концентрации кварцевых частиц более 10 мг/мл наблюдается. снижение величины максимума хемилюминесценции, что затрудняет определение нейтрофилов, 0.5-1,5 мг анальгина и 2,5-10 мг кварцевой пыли на 1 мл раствора Хэнкса без фенолового красного рН 7,4).

Способ осуществляется следующим образом. У больного из локтевой вены набира- 5 ют 1 мл крови в силиконированную пробирку с гепарином. В термостатируемую кювету (37 С) хемилюминометра помещают

2 мл раствора Хэнкса (без фенолового красного рН 7,4) с люминолом (5 ) и добавляют 10

20 мкл цельной крови. Содержимое кюветы постоянно перемешивается в приборе.

Добавляя в кювету 100 мкл (от 50 до 200 мкл) 1 -ной взвеси кварцевого песка (диаметр частиц 10 мкм), проводят стимуляцию 15 разницы этого показателя в контрольной и опытной пробе и, кроме того, требует увеличения количества этого реагента.

Предлагаемым способом были обследованы 20 человек. У 10 больных с клинически выявленной реакцией на нестероидные протиаовоспалительные средства в виде бронхоспазма на прием НПВП или кожные реакции коэффициент хемилюминесценции составил 0,45 +0,07. 8 контрольной группе, составленной из 10 практически здоровых донороа и лиц с признаками атопии (лекарственная непереносимость других средств, бронхиальная астма с хорошей переносимостью НПВП) коэффициент хемилюминесенции был равен 1,1+ 0,11 (р<0,01).

Результаты представлены в таблице, сем обследуемым была проведена энтиальная проба с анальгином. Результаты роаокационной пробы практически в 100 лучаев совпали с результатами хемилюмиесцентного способа определения непереосимости НПВП..

Пример 1. Бальная К., 52 года. иагH03: бронхиальная астма l, инфекционо-аллергическая форма, средней степени яжести течения. Полипоз носа. Энтеральэя проба с аспирином положительная. Коффициент бронхоспазма после приема 50

r препарата 32 . Коэффициент хемилюмиесценции хлК 0,39, т,е. хемилюминесцентая проба с анальгином положительная.

Пример 2. Больной Т., 44 года, При линическом обследовании клинически здоов. Прием нестероидных противовоспалиельных препаратов (реопиринэ) вызвал екарственную токсикодермию. хлК 0,18,,е. хемилюминесцентная проба с анальгиом положительная. Этому же больному быа проведена аналогичная емилюминесцентная проба с аспизолом: лК 0,68, что подтверждает непереносиость больным различных препаратов из уппы нестероидных протиаовоспалительых средств. Кроме того, у больного выяалеа высокая чувствительность к НПВП в сте флюоресцентного зондирования (флК ,56), который был выбран за прототип редлагаемого способа, Совпадение рельтатов проведенных тестов и клиничекой картины заболевания говорит о ецифичности хемилюминесцентного споба определения непереносимости НПВП, Пример 3. Больная 3Ä 62 года.

Диагноз: бронхиальная астма il, инфекционно-эллергическая форма, Хронический обструктивный бронхит, Обструктивная эмфизема легких. Аллергическая ринопатия.

2003106

Результаты исследования люминолзависимой стимулированной кварцем хемилюминесценции цельной крови в тесте с анальгином

При сборе анамнестических данных указания на непереносимость нестероидHbix противовоспалительных средств получены не были. Больная периодически принимала теофедрин, после которого от- 5 мечала резко выраженное сердцебиение и ухудшение дыхания через 1,5-2 ч после приема таблетки. Препараты, используемые от головной боли, как правило, облегчения не приносили; 10

Энтеральный тест.с аспирином и анальгином отрицательные — максимальный поток форсированного выдоха (flzs) через мелкие бронхи практически не изменился. через»ас и через 2 ч после приема 0,25 г 15 аспирина: исходно 1,38 л/с; через 1 ч 1,30 л/с; через 2 ч 1,28 л/с, В хемилюминесцентном тесте: исход — темновай ток (ТТ) 95, максимум стимулированной . хемилюминесценции (ХЛ-1) 155; с 20 анальгином TT 95 максимум стимулираванной хемилюминесценции (Xfl-2) 122.

ХЛ вЂ” 2 — ТТ 155 — 95

ХЛ вЂ” 1 — ТТ 122 — 95 .— 0,45, Тест положительный..Через 2 мес наблюдения 25 эа больной были отмечены приступы удушья, возникающие через час после приема нестероидных анальгетических препаратов. Энтеральный тест с аспирином стал положительным.

Пример 4. Больной Щ.. 49 лет.

Диагноз: бронхиальная астма I, атопичеекая форма. Поллиноз. Сенсибилизация к бытовым, пыльцевым аллергенам. Энтеральный тест с аспирином отрицательный. В хемилюминесцентной пробе с анальгином хлК1,84, т,е. проба отрицательная.

Таким образом по сравнению с прототипом хемилюминесцентный способ определения непереносимости НПВП позволяет: сократить время проведения анализа (одна проба при флюоресцентном зондировании занимает 60мин, а при хемилюминесцентном способе — 10 мин); упростить проведение анализа, так как для пробы берется цельная кровь, не требуется выделения клеток из тимуса крыс; .AosblcMTb точность метода, так как максимум хемилюминесценции крови регистрируется на экране компьютера, а в тесте флюоресцентного зондирования подсчет доли светящихся клеток производится под микро. скопом, (56) Способ диагностики непереносимости пестероидн ых противовоспалительных средств. Рац.предложение НИИФХМ, М 25, 1990.

2003106

Продолжение таблицы

Формула изобретения

Составитель Л, Сабурова

Редактор Г. Мельникова Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор M. Керцман " . — вгагзат—

Тйрвж Падписноа

НПО" Поиск" Роспатента 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕПЕРЕНО.СИМОСТИ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЪНЫХ ПРЕПАРАТОВ(НПВП

), включающий инкубацию клеток крови с

НПВП в присутствии активатора свечения с последующей регистрацией свечения иммунокомпетентных клеток в сравнении с контролем, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, ускорения и упрощения способа, инкубируют цельную

5 кровь с 0,5 - 1,5 мг/мл НПВП, в качестве

; активатора используют кварцевую пыль диаметром 1 мк в концентрации 2,5 - 10 мгlмл с последующей регистрацией люми; нолзависимой хемилюминесценции, и при

jp отношении максимума интенсивности свечения в опыте и контроле менее 0,85 диаг; ностируют непереносимость НПВН.