Способ выделения натриевой соли днк

 

Изобретение относится к получению биологически активных веществ, а именно к способу получения натриевой соли нативной ДНК, которая может найти применение в химико-фармацевтической промышленности. Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта и сокращение потерь в процессе получения натриевой соли нативной ДНК, сокращение количества этилового спирта, используемого при получении целевого продукта. Сущность способа заключается в том, что в процессе получения натриевой соли ДНК путем обработки гомогената исходного сырья детергентом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, отделения в образовавшейся реакционной массе жидкой фазы и последующих очистки и выделения целевого продукта используют обработку реакционной массы ультразвуком с последующим выделением и очисткой нативной ДНК с помощью баромембранных методов - ультрафильтрации и диафильтрации. Преимуществами предлагаемого способа являются отсутствие стадий пересаждения натриевой соли нативной ДНК, связанное с этим уменьшение потерь и увеличение выхода целевого продукта, значительно меньшее количество используемого при получении натриевой соли нативной ДНК этилового спирта. 1 табл.

Изобретение относится к получению биологически активных веществ, а именно к способу получения натриевой соли нативной ДНК из молок осетровых рыб, эритроцитов крови цыплят селезенки свиньи и др., которая может найти применение в химико-фармацевтической промышленности.

Известен способ получения натриевой соли нативной ДНК, в котором гомогенат исходного сырья обрабатывают детергентом (например, додецилсульфатом натрия) и высококонцентрированным раствором NaCl, отделяют жидкую фазу реакционной смеси от осадка фильтрацией или центрифугированием. Из фильтрата или супернатанта, содержащих натриевую соль ДНК, избыточное количество хлористого натрия, цитрата натрия и балластных органических веществ, двойным переосаждением этиловым спиртом выделяют очищенную соль нативной ДНК [1].

Недостатками указанного способа являются: длительность и усложненность процесса, большой расход этанола, низкий выход основного продукта.

Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ получения нативной ДНК [2].

Недостатками известного способа является медленное растворение ДНК, при осуществлении стадий переосаждения, заметно ухудшающее производительность процесса, увеличивающее потери целевого продукта (до 25%), использование больших количеств этилового спирта на очистку и выделение целевого продукта (на 1 кг натриевой соли нативной ДНК расходуется около 3,5 тонн этилового спирта).

Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта за счет обработки ультразвуком реакционной массы, концентрирования ультрафильтрацией и отмыванием целевого продукта диафильтрацией.

Это достигается тем, что в предлагаемом способе выделения натриевой соли ДНК путем обработки гомогената сырья детергентом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, отделения в образовавшейся реакционной массе жидкой фазы и последующих очистки и выделения целевого продукта используют обработку реакционной массы ультразвуком с последующим выделением и очисткой нативной ДНК с помощью баромембранных методов - ультрафильтрации и диафильтрации.

Отличительными особенностями предлагаемого изобретения от способа прототипа являются использование ультразвуковой обработки реакционной массы и осуществление очистки целевого продукта от избытка солей и балластных веществ диафильтрацией, концентрирование целевого продукта методом ультрафильтрации.

П р и м е р 1. 1 кг замороженных молок осетровых рыб измельчают, гомогенизируют в цитратно-солевом растворе (ССЦ), состоящем из 0,15 М хлористого натрия и 0,015 М цитрата натрия, промывают трижды ядерный материал ССЦ. Отмытый ядерный материал помещают в реактор, куда добавляют ССЦ, 6% раствор додецилсульфата натрия в 45% -ном этиловом спирте, нагревают до 60^оС, добавляют равный объем 5 М раствора хлористого натрия, перемешивают, охлаждают до 12-16^оС, реакционную массу обрабатывают ультразвуком, отделяют выпавший осадок балластных веществ от раствора ДНК фильтрацией реакционной массы через кизельгур на нутч-фильтре. Фильтрат концентрируют на мембране с размером пор 0,45 мкм (потери ДНК при этом до 3%) и затем отмывают концентрат диафильтрацией на той же мембране до отрицательной реакции на белок в пермеате.

Полученная натриевая соль ДНК имеет следующее характеристики: - содержание белка не более 1,5% - молекулярная масса 450 кДальтон - молекулярный эффект 44% - содержание РНК не более 2% - содержание полисахаридов не более 2%.

П р и м е р 2. 1 кг охлажденной крови цыплят гомогенизируют в ССЦ, промывают трижды ядерный материал раствором ССЦ. Далее как в примере 1.

Полученная натриевая соль ДНК имеет следующие характеристики: - содержание белка не более 1,5% - молекулярная масса 420 кДальтон - гиперхромный эффект 44% - содержание РНК не более 2% - содержание полисахаридов не более 2%.

П р и м е р 3. До стадии концентрирования фильтрата обработка сырья как в примере 1, 2. Концентрирование фильтрата производят на мембранах с размером пор 0,8 мкм. Потери ДНК составляют при этом 23%.

П р и м е р 4. До стадии концентрирования фильтрата - как в примерах 1, 2. Концентрирование фильтрата проводят на мембранах с размером пор 0,05 мкм. Скорость процесса фильтрования уменьшилась в 10 раз.

Ниже приводится сводная таблица с результатами примеров.

Таким образом, предложенный способ выделения натриевой соли ДНК из тканей животного происхождения позволяет получить повышенный выход целевого продукта высокой степени очистки с повышением производительности процесса и уменьшением расхода этанола.

Формула изобретения

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ НАТРИЕВОЙ СОЛИ ДНК из тканей животного происхождения путем гомогенизации исходного сырья в цитратно-солевом растворе, обработки гомогенета додецил-сульфатом и высококонцентрированным раствором хлористого натрия, прогревания реакционной массы при 60^oС, ее охлаждения с последующим выделением и очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, реакционную смесь обрабатывают ультразвуком, жидкую фазу отделяют, концентрируют ультрафильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,05 - 1 мкм и концентрат, содержащий целевой продукт, отмывают диафильтрацией.

РИСУНКИ

Рисунок 1