Производные тейкопланина и способ получения производных тейкопланина

 

Использование: в качестве противомикробного средства. Сущность: продукт-С⁶³-амидные производные 34-де(ацетилглюкозаминил)-34-дезокситейкопланинов ф-лы I, где А-N-(С₉-С₁₂)алифатический ацил-Бета-D-2-дезокси-аминоглюкопиранозил, в котором С₉-С₁₂ алифатический ацил - это (Z)-4-деценоил, 8-метилнонаноил, деканоил, 8-метилдеканоил, 9-метилдеканоил, 6-метилоктаноил, нонаноил, 10-метилундеканоил и додеканоил, В - водород, Y - ди- или полиамин ф-лы 2 -NR-/(CH₂)_mNR¹/-X/(СН₂)_kNR²/ _n-(СН₂)_p-NR³R⁴, где R - водород, R¹ и R² - независимо друг от друга водород или C₁-С₄алкил, R³ и R⁴ - независимо друг от друга водород или С₁-С₄алкил, возможно замещенный группой NH₂ или -ОН, или R³ и R⁴, вместе взятые со смежным атомом азота - пирролидин, пиперидин, оксазолидин, тиазолидин, изоксазолидин, изотнозолидин, морфолин, пиперазин, тиоморфолин, гексагидроазепин, гексагидро-1,5-диазепин или гексагидро-1,4-диазепин, m, k и p - 2, 3 или 4, n и h - 0, 1 или 2, Х - одиночная связь или, если n - 1, взятый вместе со смежной группой NR¹ - радикал ф-лы 3 или их аддитивные соли с фармацевтически приемлемыми кислотами. Продукт получают реакцией соответствующего активированного сложного эфира с амином 2. Структура соединений 1, 2 и радикала 3 (см. в описании з-ки). 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл.

Это изобретение касается С⁶³-амидных производных 34-де-(ацетилглюкозаминил)-34-дезокситеикопланинов формулы: в которой А представляет собой N-/(C₉-С₁₂)-алифатический ацил/-бета-Д-2-дезокси-2-аминоглюкопиранозил; В означает водород или защитную группу аминовой функции; М представляет собой альфа-Д-маннопиразонил; Y представляет собой ди- или полиаминовую группу формулы: //-R-/(CH₂)_m R¹/-X-/(CH₂)_kNR²//_n-(CH₂)_--NR³R⁴, где R означает водород или линейный или разветвленный алкил с 1-8 углеродными атомами; R¹ является водородом или линейным или разветвленным алкилом с 1-8 углеродными атомами; R² является водородом или линейным или разветвленным алкилом с 1-8 углеродными атомами; R³ и R⁴ каждый независимо друг от друга являются водородом, линейным или разветвленным алкилом с 1-8 углеродными атомами, необязательно несущими NH₂-, OH- или SН-заместитель, или взятые вместе с соседним атомом азота образуют 5-7-ми членное насыщенное гетероциклическое кольцо, которое может содержать другой гетероатом, выбранный среди -S-, -О- и -NR⁵-, где R⁵ водород, алкил с 1-4 углеродными атомами, фенил или фенил-(С₁-C₄)-алкил, m, k и p каждая независимо друг от друга представляют собой целое число от 2 до 8; n и h каждая независимо друг от друга представляет собой целое число от нуля до четырех; Х представляет собой ординарную связь или, если n равно единице, то взятый вместе с примыкающей к нему группой NR¹, может представлять собой двухвалентный радикал формулы: где r и s каждая независимо друг от друга представляет собой целое число от 1 до 6, при условии, что их сумма является целым числом от 3 до 8, и их кислотно-аддитивных солей.

Согласно предпочтительному осуществлению этого изобретения алифатические ацильные радикалы, содержащие 9-12 углеводородных атомов и обозначенные символом А, являются предпочтительно насыщенными полностью радикалами или имеют одну ненасыщенную связь. Наиболее предпочтительны следующие радикалы: (Z)-4-деценоил, 8-метилнонаноил, деканоил, 8-метилдеканоил, 9-метилдеканоил, 6-метилоктаноил, нонаноил, 10-метилдеканоил и додеканоил.

Символы R, R¹ и R² предпочтительно представлены водородом или линейным или разветвленным алкиловым радикалом с 1-4 углеродными атомами.

Символы R³ и R⁴ каждый независимо друг от друга представляют водород, линейный или разветвленный алкиловый радикал с 1-4 углеродными атомами, необязательно имеющий NH₂-, ОН- или Н-заместитель, или R³ и R⁴, взятые вместе с соседним атомом азота, образуют 5-7-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, которое может содержать другой гетероатом, выбранный среди -S-, -О- или -NR⁵-, при этом предпочтительны следующие гетероциклические кольца: пирролидин, пиперидин, оксазолидин, триазолидин, изоксазолидин, изотиазолидин, морфолин, пиперазин, тиоморфолин, гексагидроазепин, гексагидро-1,5-диазепин и гексагидро-1,4-диазепин; R⁵ предпочтительно является водородом или алкилом с 1-4 углеродными атомами.

Символы m, k и p предпочтительно представляют собой целые числа от 2 до 6, наиболее предпочтительно от 2 до 4.

Символы n и h предпочтительно представляют собой 0, 1 или 2, наиболее предпочтительно нуль или единицу.

Символ Х предпочтительно представляет собой ординарную связь или, если n равно единице, взятый вместе с примыкающей к нему группой NR¹, представляет собой двухвалентный радикал формулы: где r и s оба равны 2 или один равен единице, а другой равен двум или трем.

Согласно общему определению, данному выше, представительными примерами группы:
-NR-/CH₂)_mNR¹/-X-/(CH₂)_kNR²/ _n-(CH₂)_p-NR³R⁴ являются следующие группы:
-NH(CH₂)₂NH₂; -NH(CH₂)₃ N(CH₃)₂; -NCH₃(CH₂)₃N(CH₃)₂;
-NC₂H₅(CH₂)₃ N(n-C₄H₉)₂; -NH(CH₂)₃ NH(n-C₈H₁₇);
-NCH₃(CH₂)₃NHCH₃; ; ;
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₂OH; -NH(CH₂)₂NH(CH₂)₄SH;
-NCH₃(CH₂)₄ -NC₂H₅(CH₂)₂NHC₂H₅; -NH(CH₂)₄NH₂;
NCH₃(CH₂)₆N(CH₃)₂; -NC₂H₅(CH₂)₅NH₂;
; ;
-NH(CH₂)₂NH(CH₂)₂NH₂; -NH(CH₂)₃NH(CH)₂₃NH₂;
-NH(CH₂)₃N/(CH₂)₃NH₂/₂; -NH(CH₂)₃N/(CH₂)₃OH/₂;
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₄NH₂; -NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃NH₂;
NH(CH₂)₃NH(CH₂)₂NH(CH₂)₃ NH₂;
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₃NH(CH₂)₃ NH₂;
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₄ NH(CH₂)₃NH₂;
; -NH(CH₂CH₂NH)₂CH₂CH₂NH₂;
-NH(CH₂CH₂CH₂NH)₃CH₂CH₂CH₂ NH₂;
-NCH₃(CH₂)₂NH(CH₂)₃ N(CH₃)₂; -NCH₃(CH₂)₃NCH₃(CH₂)₃N(CH₃) ₂;
-NCH₃(CH₂)₃NH(CH₂)₄ N(n-C₄H₉)₂;
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₄ NH(н-C₈H₁₇);
-NH(CH₂)₃NH(CH₂)₄ NH(CH₂)₃N(н-C₄H₉)₂;
-NH(CH₂)₃ NH(CH₂)₄NH(CH₂)₃ NH(н-С₈H₁₇);
-NCH₃(CH₂)₃NCH₃(CH₂)₃ NCH₃(CH₂)₃NHCH₃;
-NCH₃(CH₂)₃NCH₃(CH₂)₃ NHC₃(CH₂)₃N(н-C₄H₉)₂;





Соединения согласно изобретению проявляют противомикробную активность, в частности, против грамположительных бактерий, включая группу А стрептококков и некоторых коагулазаотрицательных стафилококков.

Различные С⁶³-амидные производные теикопланинового комплекса, отдельные компоненты и агликон и их псевдоагликоны описаны в публикации заявки на Европейский патент N 218099 и в публикации заявки на международный патент N 088/06600.

Соединения согласно изобретению получают амидированием соответствующих производных 34-де-(ацетилглюкозаминил)-34-дезокситеикопланина формулы I, в которых Y означает ОН (т.е. соответствующих карбоновых кислот). Эти исходные материалы специально описаны в публикации заявки на Европейский патент N 290922 или могут быть получены описанным здесь способом.

Упомянутые выше исходные материалы получают либо из комплекса теикопланина А₂ (как результат операций ферментации), или из его пяти основных компонентов (патент США N 4542018; А. Borghi et al. S.Antibiot, Vol. 37, 615-620, 1984; С. S. Barna et al. S. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4895-4902) удалением ацетилглюкозаминилового остатка в положении 34.

Как известно в данной области, упомянутые выше пять основных компонентов комплекса теикопланина А₂ характеризуются тем, что частью молекулы алифатического ацила бета-Д-2-дезокси-2-аминоглюкопиранозилового остатка является алифатический ацил с 10-11 углеродными атомами, а именно:
(Z)-4-деценоил, 8-метилнонаноил, деканоил, 8-метилдеканоил или 9-метилдеканоил.

Следовательно, полученные вещества, используемые в качестве исходного материала для получения соединений согласно изобретению, могут быть либо отдельными соединениями, или смесями одного или более соединений. Поскольку упомянутые исходные материалы для получения соединений согласно изобретению могут быть использованы в обеих упомянутых формах, то полученные конечные продукты в свою очередь могут быть индивидуальными соединениями или смесями двух или более соединений приведенной выше формулы I. Эти смеси соединений являются также частью изобретения и могут быть использованы как таковые для биологических целей и применений или могут быть при случае выделены в форме своих отдельных компонентов известными и описанными в данной области методами разделения. Примерами способов разделения, пригодных для целей получения отдельных компонентов из конечной смеси продуктов производных амида теикопланина, являются примеры, приведенные в публикации описания к Европейскому патенту N 218099 и в публикации описания к заявке на Международный патент N WO 88/06600.

Другие исходные материалы для получения соединений согласно изобретению можно получить при применении публикации описания к Европейскому патенту N 290922 к соединениям теикопланина, таким, как соединения, описанные как соединение В (идентифицировано также как RS-4 в документах, упомянутых ниже), соединение А (идентифицированное также как RS-3 в документах, упомянутых ниже) в публикации описания заявки к Европейскому патенту N 306645, и те соединения, которые идентифицированы как соединения RS-1 и RS-2 в докладе М. Цанола и соавторов на 17-м Международном симпозиуме по хроматографии, Вена, 25-30 сентября 1988 (А. Barghi et al. The Journal of Antibiotics, Vol. 42, N 3, 361-366, 1981). Упомянутые соединения теикопланина характеризуются тем, что части молекулы алифатического ацила бета-Д-2-дезокси-2-аминоглюкопиранозилового остатка являются соответственно: нонаноилом, 6-метилоктаноилом, 10-метилундеканоилом и додеканоилом.

Процессы амидирования описаны в двух упомянутых выше публикациях заявок на Европейский патент N 218099 и на Международный патент WO N 88/06600 и могут быть использованы также для получения соединений согласно настоящему изобретению. Эти процессы включают конденсацию упомянутых выше соединений карбоновой кислоты с избытком подходящего амина формулы II:
NHR-/(CH₂)NR¹/n-X-/(CH₂)_k NR²/_h-(CH₂)_pNR³R⁴,
где R, R¹, R², R³, R⁴, X, m, n, h, k и p имеют определенные выше значения, в инертном органическом растворителе в присутствии конденсирующего средства, выбранного среди алкила с 1-4 углеродными атомами, фенила или гетероциклических фосфоразидатов при температурах от 0^oС до 20^oС. Если аминовый реагент содержит другие функции, которые не инертны в выбранных условиях реакции, то эти функции подходяще защищены посредством известных perse защитных групп.

Согласно предпочтительному осуществлению настоящего изобретения соединения формулы I, в которых Y является ди- или полиаминогруппой, как определено выше, получают взаимодействием "активированного сложного эфира" карбоновой кислоты той же формулы I, в которой Y означает ОН и N¹⁵-аминофункция предпочтительно защищена, с соответствующим амином формулы II.

Аминогруппа при N¹⁵ может быть защищена известными методами в данной области, такими, например, которые описаны в справочниках, подобных T.W. Greene. Protective Groupps in Organic Synthesis, Sohn Wiley and Sons, New Jork, 1981 and M.Mc. Omil. Protecting Groups in Organic Chemistry. Plenum Press, New Jork, 1973.

Эти защитные группы должны быть стабильными в условиях реакционного процесса, не должны отрицательно влиять на реакцию амидирования и должны быть легко отщепляемы и удаляемы из реакционной среды в конце реакции без изменения вновь образовавшейся амидной связи.

Представительными примерами N-защитных групп, которые могут быть благоприятно использованы в способе согласно изобретению для защиты первичной аминофункции при N¹⁵ исходного соединения теикопланина и, если подходяще, то и NR³R⁴-части молекулы аминового реагента формулы II, являются образующие карбамат реагенты, характеризующиеся следующими оксикарбонильными группами: 1,1-диметилпропинилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил, винилоксикарбонил, арилоксикарбонил, циннамилоксикарбонил, бензилоксикарбонил, пара-нитробензилоксикарбонил, 3,4-диметокси-6-нитробензилоксикарбонил, 2,4-дихлорбензилоксикарбонил, 5-бензилоксазолилметилоксикарбонил, 9-антрацилметилоксикарбонил, дифенилметилоксикарбонил, изоникотинилоксикарбонил, дифенилметилоксикарбонил, N-бензилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, 2,2,2-трихлор-трет-бутоксикарбонил и тому подобные. Другими подходящими N-защитными реагентами являются альдегиды или кетоны, или их производные, которые способны образовывать основания Шиффа с подлежащей защите аминогруппой.

Предпочтительными примерами реагентов, образующих основание Шиффа, являются бензальдегиды и в особенности предпочтителен 2-оксибензальдегид (салициловый альдегид). Традиционным средством защиты в случае, когда аминовый реагент формулы II имеет значение R, отличное от водорода, и содержит первичную аминофункцию (т. е. R³ и R⁴ оба представляют собой водород), является в некоторых случаях образование производного бензилидена, который может быть получен взаимодействием амина с бензальдегидом в низшем спирте, таком как этанол, предпочтительно при комнатной температуре. После того, как реакция выбранного исходного соединения теикопланина закончена, бензилиденовая защитная группа может быть удалена известными в данной области методами, т. е. каталитической гидрогенизацией, используя, например, палладий на угле в качестве катализатора.

Однако во всех случаях, когда применяется каталитическая гидрогенизация, внимание следует обращать на присутствие групп, которые могут быть модифицированы каталитической гидрогенизацией. Типичная последовательность каталитической гидрогенизации аминозащитного производного формулы I, в котором А представляет собой группу указанного выше значения, ацильной частью которой является (Z)-деценоил (или содержащая его смесь), заключается по крайней мере частично в том, что деценоильное соединение преобразовывают в соответствующее деканоильное соединение. Поэтому, если удаление защитной группы проводят каталитической гидрогенизацией и исходное соединение 34-де-(ацетилглюкозаминил)-34-дезокси-теикопланина является (или содержит) производное компонента 1 комплекса теикопланина А₂ (ацильной частью которого является (Z)-4-деценоил), то конечный амидный продукт в большинстве случаев не содержит соответствующего производного, но скорее пропорционально большое количество производного компонента 3, ацильным остатком которого является деканоил.

Если желают получить конечное соединение, содержащее компонент 1 амидного производного комплекса теикопланина А₂, то N-защитную группу следует выбирать среди групп, которые можно удалить в условиях, не применяющих гидрогенизации ацильной части или гидролиза частей молекулы сахаров, теикопланинового субстрата. Например, N-защитная группа, которая удаляется в мягких условиях, выбрана из бета-галоидоалкоксикарбонильных групп, таких как 2,2,2-трихлор-трет-бутоксикарбонил, который может быть удален способами, описанными H. Eckert et al. in Angew. Сhem. Int. Ed. Engl. 17, N 5, 361-362 (1978).

Для специалиста в данной области понятно, что окончательный выбор конкретной защитной группы зависит от характеристик конкретно амидного производного, которое желают получать. И действительно, эта амидная функция конечного соединения должна быть стабильной в условиях удаления защитной(ых) группы (групп).

Поскольку условия удаления различных защитных групп известны, то специалист в данной области в состоянии выбрать подходящую защитную группу.

В некоторых случаях, когда амин формулы II содержит две первичных аминогруппы (т.е. R, R³ и R⁴ все представляют собой водород), может быть удобным получать смесь продуктов реакции, полученных от образования амидной связи с каждой из двух первичных аминовых функций и разделять ее обычными методами, такими как испарительная колоночная хроматография, обращенно-фазовая колоночная хроматография или препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография.

Получение "активированных сложных эфиров" описано в общих чертах Л. Физером и М. Физером в "Реагентах для органического синтеза", John Wiley and Sons Inc. 1967, с. 129-130.

Примерами реагентов, образующих активированные сложные эфиры, которые могут быть обычно использованы в способе согласно изобретению, являются реагенты, описанные Р. Швейером и соавторами в Helv. Chim. Acta, 1955, 38, 69-70, и включают: , BrCH₂COOC₂H₅, BrCH(COOC₂H₅)₂, ClCH₂COCH₃, , ClCH₂CH₂N(C₂H₅)₂. Предпочтительным реагентом этого типа является хлорацетонитрил. В этом случае сам хлорацетонитрил или диметилформамид могут быть использованы как предпочтительные растворители. Вообще инертными органическими растворителями, полезными для образования "активированных сложных эфиров", являются те органические апротонные растворители, которые не влияют отрицательно на течение реакции и способны по меньшей мере частично растворять исходное соединение карбоновой кислоты.

Примерами упомянутых инертных органических растворителей являются органические амиды, простые алкиловые эфиры, сульфоксиды и ароматические соединения. Предпочтительными примерами инертных органических растворителей являются диметилформамид, диметоксиэтан, гексаметилфосфорамид, диметилсульфоксид, бензол, толуол и их смеси.

Более предпочтительно растворитель выбирать из ацетонитрила, диметилсульфоксида, диметилформамида. Получение активированного сложного эфира обычно проводят в присутствии основания, которое не влияет на течение реакции, такое как карбонат натрия или калия или бикарбонат, триалкиламин, т.е. триэтиламин. Вообще основание применяют в 2-6-молярном отношении к исходному карбоксикислотному соединению теикопланина и предпочтительно использовать его примерно в троекратном молярном избытке. Предпочтительным основанием является триэтиламин.

Реагент, образующий "активированный сложный эфир", используют в большом избытке по отношению к исходному карбоксикислотному материалу теикопланина. Он, в общем, используется в 5-35-кратном молярном отношении и предпочтительно его использование в 20-30-кратном молярном избытке. Температура реакции находится в интервале 10-60^oC и предпочтительно между 15^oС и 30^oC. Как обычно, время реакции зависит от других специфических параметров реакции и может составлять в общем от 3 до 48 ч.

В этом случае течение реакции может сопровождаться высокоэффективной жидкостной хроматографией или тонкослойной хроматографией, чтобы определить, когда реакцию можно считать законченной и начать процесс выделения желаемого промежуточного соединения. Промежуточный "активированный сложный эфир" может быть использован непосредственно в той же самой реакционной среде, в которой он получен, однако, в общем, его выделяют осаждением посредством осадителя или экстракцией растворителями, и его используют как таковой без дальнейшей очистки на следующей стадии реакции. Однако, если желают, он может быть очищен колоночной хроматографией, такой как испарительная хроматография или обращенно-фазовая колоночная хроматография.

Полученный "активированный сложный эфир", как промежуточное соединение, взаимодействует затем с молярным избытком аминового производного формулы II:
NHR-/(CH₂)_mNR¹/_n-X-(CH₂)_k NR²/_h-(CH₂)_p-NR³R⁴
в присутствии органического полярного растворителя и интервале температур от 5 до 60^oС, предпочтительно 10-30^oС.

Органический полярный растворитель может быть в этом случае полярным протонным или апротонным растворителем.

Предпочтительными примерами органических полярных протонных растворителей являются низшие-(С₂-С₄)-алканолы, такие как этанол, н-пропанол, изопропанол, н-бутанол и тому подобные, или их смеси, предпочтительно используемые в сухой форме.

Предпочтительными примерами органических полярных апротонных растворителей являются N, N-диметилформамид, гексаметилфосфорамид или их смеси, 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидон, диметилсульфоксид или диметоксиэтан.

Реакция между "активированным сложным эфиром" и выбранным амином может проходить при температуре между 5^oС и 60^oС, но предпочтителен интервал температур в общем между 10 и 30^oС, и наиболее предпочтительно в интервале 20-25^oС, тогда как предпочтительным молярным отношением между "активированным сложным эфиром" и амином формулы II, как определено выше, является от 1:5 до 1:30 и более предпочтительно от 1:10 до 1:20. Ход реакции может быть проконтролирован как обычно тонкослойной хроматографией или высокоэффективной жидкостной хроматографией.

Полученное от реакции амидирования амидное производное выделяют из реакционного раствора обычными методами, например, выпариванием растворителя или добавлением осадителя. Удаление аминозащитной группы обычно проводят на неочищенном продукте, выделенном из реакции амидирования.

Примеры способов удаления упомянутых защитных групп у производных теикопланина описаны, например, в публикации Международной заявки на патент N WO 88/06600.

Если используют процесс каталитической гидрогенизации, то реакцию проводят обычно в присутствии разбавленной водной сильной кислоты, предпочтительно минеральной кислоты, в органическом растворителе, смешивающемся с упомянутой разбавленной водной, сильной кислотой. Фильтрат от реакционной смеси затем обрабатывают для выделения либо аддитивной соли с минеральной кислотой амида формулы I, или соответствующее свободное основание. Аналогичных процессов придерживаются, когда аминозащитная группа является группой, которая может быть удалена обработкой разбавленными минеральными кислотами (т. е. основание Шиффа или C₁-C₄-алкоксикарбонильная группа) в условиях, не вызывающих расщепления молекул сахара (т.е. низкие температуры, короткое время реакции).

Для выделения кислотно-аддитивной соли реакционный раствор, полученный после отщепления аминозащитной группы, обычно приводят к значению рН 6 и 7 добавлением водного основания, т.е. водной гидроокиси натрия, и после выпаривания растворителя при пониженном давлении полученное твердое вещество выделяют в форме аддитивной соли с сильной кислотой, которую добавляли в процессе операции по снятию защиты. Такой продукт может быть далее очищен обычными методами, т.е. колоночной хроматографией, осаждением из растворов при добавлении осадителей, препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией и тому подобными. Кислотно-аддитивная соль может быть преобразована в соответствующее свободное основание формулы I суспендированием или растворением кислотно-аддитивной соли в водном растворителе, который затем приводят к подходящему значению pН, при этом восстанавливается форма свободного основания. Затем продукт выделяют, например, экстракцией органическим растворителем или преобразовывают в другую кислотно-аддитивную соль добавлением выбранной кислоты и обработкой, как описано выше.

Иногда после описанной выше процедуры может быть необходимым подвергнуть выделенный продукт обычной процедуре обессоливания.

Например, могут быть использованы общепринятые хроматография на декстрановых смолах с регулируемыми размерами пор (такие как сефадекс LH 20) или на обработанном силаном силикагеле. После вымывания нежелательных солей водным раствором желаемый продукт элюируют посредством линейного градиента или ступенчатого градиента смеси воды с полярным или апротонным органическим растворителем, такой как смесь ацетонитрил-вода или ацетонитрил-водная уксусная кислота с содержанием ацетонитрила от 50 до 100% и затем выделяют упариванием растворителя или лиофилизацией.

Если соединение формулы I получено в форме свободного основания, то оно может быть обращено в соответствующую кислотно-аддитивную соль суспендированием или растворением формы свободного основания в водном растворителе и добавлением небольшого молярного избытка выбранной кислоты. Полученный раствор или суспензию затем лиофилизируют для выделения желаемой кислотно-аддитивной соли. Вместо лиофилизации в некоторых случаях возможно выделение конечной соли путем осаждения при добавлении осадителя, смешивающегося с водой.

В случае, когда конечная соль нерастворима в органическом растворителе, тогда как форма свободного основания растворима, она может быть выделена фильтрацией из органического раствора несолевой формы после добавления стехиометрического количества или небольшого молярного избытка выбранной кислоты.

Представительные и подходящие кислотно-аддитивные соли соединений формулы I включают соли, образованные стандартной реакцией как с органической, так и с неорганической кислотами, такими, как, например, хлористоводородная, бромистоводородная, серная, фосфорная, уксусная, трифторуксусная, трихлоруксусная, янтарная, лимонная, аскорбиновая, молочная, малеиновая, фумаровая, пальмитиновая, холевая, пальмовая, слизевая, камфорная, глутаровая, гликолевая, фталевая, винная, лауриновая, стеариновая, салициловая, метансульфоновая, бензолсульфоновая, сорбиновая, пикриновая, бензойная, коричная и тому подобные кислоты.

Предпочтительными аддитивными солями соединений согласно изобретению являются фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли.

Под термином "фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли" понимают те соли с кислотами, которые с точки зрения биологической, получения и приготовления лекарственных форм препаратов совместимы с фармацевтической практикой.

Примеры кислот, пригодных для получения "фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей", включают перечисленные выше кислоты.

Характеристикой соединений согласно изобретению, которая далее отличает их от соответствующего исходного соединения, является конфигурация амидной связи в 51, 52-м положении, которая является цис-конфигурацией, тогда как та же самая связь в исходной теикопланиновой карбоновой кислоте является "транс". Это означает, что конформация сердцевины теикопланина новых соединений заметно изменена в сравнении с конформацией исходных материалов.

Соединения согласно изобретению как в форме свободных оснований, так и своих кислотно-аддитивных солей, полезны в качестве противомикробных средств, главным образом активны против грамположительных бактерий. Более конкретно, они полезны при лечении инфекций, вызываемых стрептококками группы А (т. е. Streptococcus pyogenes). И действительно, в настоящее время они являются наиболее активными антибиотиками теикопланина против микроорганизмов этого рода. Они также более активны, чем теикопланин, против коагулаза-отрицательных стафилококков (т. е. Streptococcus hemolyticus и Streptococcus epidermidis, в особенности против Staphylococcus haemolyticus.

Антибактеральную активность соединений согласно изобретению определяли in vitro посредством стандартных тестов разведения агара в микротитре. Изочувствительная питательная жидкая среда (оксоид, Oxoid) и бульон Тодда-Гевитта (дифко, Difco) использовали для выращивания стафилококков и стрептококков соответственно. Бульонные культуры разбавляли так, что конечная посевная культура содержала 10⁴ жизнеспособных единиц в миллилитре. Минимальную ингибирующую концентрацию принимали как самую низкую концентрацию, которая не показывает видимого роста через 18-24 ч инкубации при 37^oС.

Результаты противомикробных испытаний отдельных соединений формулы I сведены в табл. 1.

Активность соединений согласно изобретению против Streptococcus pyogenes в некоторых случаях выше, чем активность теикопланина и наиболее активных соединений согласно публикации заявки на Европейский патент N 290922, публикации заявки на Европейский патент N 218099 и публикации заявки на Международный патент N WO 88/06600, минимальные концентрации которых (микрограмм/миллилитр) против тех же микроорганизмов никогда не были ниже 0,06.

Из наиболее полезных применений биологической активности соединений согласно изобретению особый интерес представляет их избирательная активность против Streptococcus pyogenes, которая проявляется путем сравнения значений минимальной ингибирующей концентрации против упомянутых организмов со значениями минимальной ингибирующей концентрации против других испытываемых микроорганизмов, представленных в табл. 1 выше, в особенности против Staphylococcus aureus.

Активность против некоторых клинических культур микроорганизмов Streptococcus pyogenes соединений 3, 5 и 32 представлена в табл. 2.

Соединения согласно изобретению проявляют гораздо более низкую активность против бактерий других групп стептококков, отличных от группы А и коагулаза-отрицательных стафилококков, и поэтому могут рассматриваться как антибиотики, показывающие очень узкий и избирательный спектр активности, особенно полезный для конкретной мишени в борьбе со стрептококковыми инфекциями с малой вероятностью выбора устойчивых штаммов другого рода.

Стрептококковые инфекции обычно ответственны за тяжелые патологические осложнения, такие как ревматическая атака, нефриты, эндокардиты, рожистые воспаления и тому подобные.

Получение антибиотиков с очень узким специфическим спектром активности расценивается как важная необходимость для развития химиотерапии. См. W. Brumfitt et al. Postgraduate Medical Journal, Vol. 64, (1988), N 753, с. 552-558.

Ввиду описанной выше противомикробной активности соединения согласно настоящему изобретению могут быть применены в качестве активного ингредиента противомикробных препаратов, используемых при лечении человека и домашних животных, а также для профилактики инфекционных болезней, вызванных патогенными бактериями, которые чувствительны к упомянутому активному ингредиенту.

Для таких целей эти соединения могут быть применены как таковые или в форме смесей в любом соотношении.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть введены перорально, локально или парентерально, из которых, однако, парентеральное введение предпочтительно. В зависимости от пути введения эти соединения могут быть приготовлены в различных дозированных формах. Препараты для перорального введения могут иметь форму капсул, таблеток, жидких растворов или суспензий. Как известно в данной области, капсулы и таблетки могут содержать в дополнение к активному ингредиенту традиционные наполнители, такие как разбавители, т.е. лактоза, фосфат кальция, сорбит и тому подобные, смазки, т.е. стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, связующие средства, т.е. поливинилпирролидон, желатин, сорбит, трагакант, аравийская камедь, ароматические средства и приемлемые диспергирующие и смачивающие средства. Жидкие препараты обычно в форме водных или масляных растворов или суспензий могут содержать традиционные добавки, такие как суспендирующие средства. Для локального применения соединения согласно настоящему изобретению могут быть также приготовлены в подходящих формах для нанесения на кожу, слизистые оболочки носа и глотки или бронхиальные ткани, и могут иметь соответствующую форму кремов, мазей, жидкостей для распыления и ингаляции, лепешек, смазок для горла. Для лечения глаз или ушей лекарственная форма может быть представлена в жидком или полужидком виде и приготовлена на гидрофобной или гидрофильной основе в форме мазей, кремов, лосьонов, смазок или порошков.

Для ректального введения соединения согласно изобретению применяют в форме суппозиториев, смешанных с традиционными носителями, такими как, например, масло какао, воск, спермацет или полиэтиленгликоли и их производные.

Композиции для инъекции могут иметь такие формы препаратов, как суспензии, растворы или эмульсии: в масляных или водных носителях и могут содержать формообразующие средства, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства.

Альтернативно активный ингредиент может быть в форме порошка для разбавления ко времени применения в подходящем носителе, таком как стерильная вода.

Количество активной составной части для введения зависит от различных факторов, таких как размер и состояние подлежащего лечению субъекта, пути и частоты введения и от вызвавшего заболевание возбудителя.

Соединения согласно изобретению обычно эффективны в дозе, заключенной в интервале от 0,3 до 30 мг активного ингредиента на кг веса тела, предпочтительно разделенной на 2-4 введения в день. Особенно желательны композиции, приготовленные в форме дозированных единиц, содержащих от 20 до 600 кг активного ингредиента на единицу.

Примеры
Общий процесс
В приведенных ниже примерах исходным материалом может быть комплекс 34-де-(ацетилглюкозаминил)-34-дезокситеикопланина А₂ (т.е. смесь соединений, полученных из комплекса теикопланина А₂ методом, описанным в публикации заявки на Европейский патент N 290922, отдельный его компонент или смесь двух или более упомянутых компонентов).

Типичная комплексная смесь, в основном, состоит из пяти компонентов, соответствующих формуле I, в которых части молекулы алифатического ацила бета-Д-2-дезокси-2-аминогликопиранозилового радикала, представленного символом А, являются соответственно: (Z)-4-деценоилом (АС₁), 8-метилнонаноилом (АС₂), деканоилом (АС₃), 8-метилдеканоилом (АС₄) и 9-метилдеканоилом (АС₅). В является водородом, М является альфа-Д-маннопиранозилом и Y означает ОН. Эта смесь определяется акронимом TGAC_1-5. Если в качестве исходного материала используют один из индивидуальных компонентов смеси, то его идентифицируют следующим образом: ТGAC₁, ТGAC₂, ТGAC₃, ТGAC₄ или ТGAC₅ в зависимости от конкретного остатка алифатического ацила упомянутого выше аминоглюкопиранозилового радикала. Если используют смесь одного или более компонентов, то ее определяют по той же системе, что и для комплекса. Например, акроним ТGAC_2-5, тогда как компонент 1 отсутствует. Эту смесь в настоящее время получают методом, описанным в публикации заявки на Европейский патент N 290922, где применяют каталитическую гидрогенизацию, которая насыщает двойную связь компонента 1, преобразуя его в компонент 3. Акроним ТGAC_2,3 определяет смесь компонентов 2 и 3, а акроним ТGAC_4,5 указывает на смесь компонентов 4 и 5.

Полученные конечные продукты в приведенной ниже табл. 3 идентифицированы со ссылкой на формулу I с указанием для символа А конкретного алифатического ацильного заместителя бета-Д-2-дезокси-2-аминоглюкопиранозильного радикала (А/АС) путем использования традиционных определителей АС₁, АС₂, АС₃, АС₄ и АС₅, как разъяснено выше. Если получена смесь двух или более компонентов, то это показано посредством тех же условных дескрипторов, о которых сказано выше.

Анализ высокоэффективной жидкостной хроматографией проводили насосом Varian модели 5000 LC, снабженным обводным инжектором для введения пробы на 20 микролитров типа Rheodyme, модель 7125 и детектором ультрафиолетового излучения при 254 нанометрах.

Колонки: предварительная колонка (1,9 см) Hibar Lichro Cart 25-4 (Merck), предварительно заполненная Lichrosorb RР-8 (20-30 мкм) с последующей колонкой Hibart RТ 250-4 (Merck) с набивкой Lichrosorb BR-8 (10 мкм). Элюенты: А) 0,2% водный HCOONH₄; В) CH₃CN. Скорость потока: 2 мл/мин. Инъекция: 20 микролитров. Элюирование: линейный градиент от 20 до 60% элюента В в элюенте А в течение 30 мин. Время задержки некоторых примерных соединений представлено в таблице 3 b.

Кислотно-основное титрование. Продукты растворяли в метилцеллозольве и воде в отношении 4:1 по объему, затем в ту же смесь растворителей добавляли избыток 0,01 М хлористоводородной кислоты, и полученные растворы титровали 0,01 н. гидроокисью натрия. Эквивалентный вес некоторых примерных соединений представлен в таблице 3 а.

Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах водорода при 500 МГц записан в интервале температур от 20 до 30^oС на спектрометре Брукера АМ 500 в диметилсульфоксиде Д₆ с тетраметилсиланом в качестве внутреннего стандарта (дельта равна 0,00 млн. частей). В таблице 3 с представлены некоторые существенные химические сдвиги (дельта, млн. доли) некоторых представительных соединений.

Способ получения
а) Раствор 4 г (около 2,5 ммоль) ТGАС (комплекс, его отдельный компонент или смесь двух или более отдельных компонентов) и 0,36 мл (около 2,6 ммоль) триэтиламина в 20 мл диметилформамида перемешивали при комнатной температуре 30 мин, добавляя тем временем 0,4 мл (около 2,8 ммоль) бензилового эфира хлормуравьиной кислоты. Затем дополнительно добавляли 0,4 мл (около 3,3 ммоль) триэтиламина и 4 мл (около 65 ммоль) хлорацетонитрила, и перемешивание продолжали при комнатной температуре 20 ч. Реакционную смесь выливали в 300 мл этилацетата, выпавшее в осадок твердое вещество собирали фильтрацией, промывали 100 мл этилового эфира и после сушки в вакууме при комнатной температуре в течение полусуток получали 4,3 г неочищенного цианометилового эфира N¹⁵-карбобензилокси-ТGАС.

b) К перемешиваемому раствору полученного выше продукта в 30 мл диметилформамида добавляли 35 ммоль подходящего реакционноспособного амина, и полученный раствор оставляли на ночь при перемешивании при комнатной температуре. Затем добавляли 25 мл абсолютного этанола с последующим добавлением 250 мл этилацетата. Выпавшее в осадок твердое вещество собирали фильтрацией, промывали 100 мл этилового эфира, сушили в вакууме при комнатной температуре 4 ч и получали 4,1 г неочищенного N¹⁵-карбобензилоксисоединения формулы I, которое
с) растворяли в 350 мл смеси метанол 0,01 н. хлористоводородная кислота в отношении 7:3 по объему. Полученный раствор доводили до pН 3,0 с помощью 1 н. хлористоводородной кислоты при 1 атм и комнатной температуре в присутствии 4 г 5% палладия на угле, поглощая при этом 120 мл газообразного водорода в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывали, и pН прозрачного фильтрата устанавливали 6,5 с помощью 1 н. гидроокиси натрия. После добавления 300 мл н-бутанола и 15 г силанизированного силикагеля (0,06-0,2 мм, Merck) растворители выпаривали при 40^oC при пониженном давлении. Твердый остаток суспендировали в 200 мл воды и полученную суспензию загружали в верхнюю часть колонки с тем же обработанным силаном силикагелем в воде (400 г). Колонку проявляли линейным градиентом от 10 до 80% ацетонитрила в 0,1 н. уксусной кислоте в течение 20 ч при скорости потока 250 мл/ч, собирая 25 мл фракции, которые проверяли высокоэффективной жидкостной хроматографией. Фракции, содержащие чистые соединения, указанные в названии примера, объединяли, и pН полученного раствора устанавливали 8,5 с помощью 1 н. гидроокиси натрия, а затем концентрировали при 40^oС при пониженном давлении до малого объема (около 50 мл). Выделившееся твердое вещество собирали центрифугированием, промывали 10 мл воды, затем 250 мл этилового эфира. После сушки при комнатной температуре в вакууме в течение полусуток получали соединение формулы I в форме свободного основания.

Для получения соединений согласно изобретению, в которых присутствует часть молекулы АС₁, операцию а) модифицируют путем взаимодействия комплекса ТGАС_1-5 или ТGАС₁ или смеси двух или более компонентов, содержащей эту часть, с 2,2,2-трихлор-н-бутоксихлорформиатом по описанной выше процедуре и первую часть операции с) заменяют контактированием полученного С⁶³-амид-N¹⁵-защищенного амина с цинком в уксусной кислоте по методу, описанному Г. Эккертом и соавторами в Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 17, N 15, 361-362 (1978). Очистку проводили таким же образом, как описано во второй части операции с).

Используя подходящие реагенты ТGAC и амин формулы:
NHR-/(CH₂)_mNR¹/_n-X-/(CH₂)_k NR²/_h-(CH₂)_p-NR³R⁴,
в описанных выше условиях, получали соединения, представленные в табл. 3.

Пояснения к табл. 3 (легенда)
(*) АС₁ означает (Z)-4-деценоил)
АС₂ означает 8-метилнонаноил
АС₃ означает деканоил
АС₄ означает 8-метилдеканоил
АС₅ означает 9-метилдеканоил
(**) М означает альфа-д-маннопиранозил
(1) и (2): два продукта, полученные одновременно при взаимодействии двух различных аминогрупп, разделены в процессе обращенно-фазовой колоночной хроматографии.

(3): продукт, полученный при осуществлении того же процесса получения соединения 2, но выделением и накоплением только тех фракций обращенно-фазовой хроматографии, которые показали очень близкое время задержки (мин), будучи проверены высокоэффективной жидкостной хроматографией (вместо сбора всех фракций, содержащих продукт реакции формулы I).

(4): продукт получен при проведении того же процесса, что и при получении соединения 3, но выделением и накоплением только тех фракций обращенно-фазовой хроматографии, которые показали очень близкие значения времени задержки (мин) при проверке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (вместо накопления всех фракций, содержащих продукты реакции формулы I).

(5): продукт получен при проведении того же процесса для получения соединения 3, но выделением и накоплением только тех фракций обращенно-фазовой хроматографии, которые показали очень близкие значения времени задержки (мин), определенные методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (вместо накопления всех фракций, содержащих продукты формулы I).

(6): продукт получен при проведении процесса получения соединения 4, но выделением и накоплением только тех фракций обращенно-фазовой хроматографии, которые показывают очень близкие значения времени задержки (мин) при проверке высокоэффективной жидкостной хроматографией (вместо накопления всех фракций, содержащих продукты реакции формулы I).

Существенные значения спектра ЯМР на ядрах водорода некоторых представительных соединений, зарегистрированные в диметилсульфоксиде-d₆ с тетраметилсиланом в качестве внутреннего стандарта (дельта 0,00 млн. долей).

Соединение 1
2,17 (NCH₃): 3,15, 2,32 (СН₂ полиаминовой алифатической цепи); 2,02, 1,45, 1,13, 0,82 (цепь алифатического ацила); 4,32-6,09 (пептидные группы СН); 6,32-8,62 (ароматические протоны и пептиды группы NН).

Соединение 2
3,23, 2,95, 1,58 (СH₂-полиаминовая алифатическая цепь); 2,04, 1,45, 1,15, 0,84 (цепь алифатического ацила); 3,42 (манноза); 4,36-6,13 (пептидные СН); 6,43-8,56 (ароматические протоны и пептидные NH).

Соединение 3
3,31, 2,93, 2,11, 1,58 (полиаминовая алифатическая цепь СН₂): 2,04, 1,45, 1,15, 0,82 (цепь алифатического ацила); 4,35-5,75 (пептидные СН); 6,42-8,42 (ароматические протоны и пептидные NH).

Соединение 4
3,31, 2,93, 2,22, 1,58 (СН₂-полиаминовая алифатическая цепь); 2,04, 1,45, 1,15, 0,82 (алифатическая ацильная цепь); 4,35-5,75 (пептидные СН); 6,42-8,42 (ароматические протоны и пептидные NH).

Соединение 5
3,29, 2,93, 2,64, 2,08, 1,71, 1,22 (СН₂-полиаминовая алифатическая цепь); 2,03, 1,43, 1,18, 0,84 (алифатическая ацильная цепь); 4,32-6,04 (пептидные СН); 6,28-8,62 (ароматические и пептидные NН).

Соединение 32
3,33, 2,82 (CH₂-N, полиамин); 1,65 (СН₂-полиаминовая алифатическая цепь); 1,43, 1,22, 0,83 (алифатическая ацильная цепь); 3,45 (манноза); 4,12-5,63 (пептидные СН); 6,31-8,53 (ароматические протоны и пептидные NH).

Формула изобретения

1. Производные тейкопланина общей формулы I

где A N[(С₉ С₁₂)-алифатический ацил] бета - D-2-дезокси-2-аминоглюкопиранозил, где С₉ С₁₂ - алифатический ацил это (Z)-4-деценоил, 8-метилнонаноил, деканоил, 8-метилдеканоил, 9-метилдеканолин, 6-метилоктаноил, нонаноил, 10-метилдудеканоил и додеканоил;
В водород или защитная группа для аминогруппы;
Y ди- или полиамин формулы
NR [(CH₂)_mNR₁]_n X - [(CH₂)_kNR₂]_n (CH₂)_p NR₃R₄
где R водород, R₁ и R₂ каждый независимо друг от друга водород или С₁ С₄-алкил;
R₃ и R₄ каждый независимо друг от друга водород или С₁ С₄-алкил, необязательно замещенный группой NH₂ или -ОН, или R₃ и R₄, вместе взятые со смежным атомом азота, пирролидин, пиперидин, оксазолидин, тиазолидин, изоксазолидин, изотиазолидин, гексагидро-1,5-диазепин, или гексагидро-1,4-диазепин;
m, k и p 2, 3, 4;
n и h 0,1 или 2;
Х одиночная связь, или если n 1, взятый вместе со смежной группой NR₁ представляет собой радикал формулы

или их аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами.

2. Способ получения производных тейкопланина общей формулы I

где A N[(С₉ С₁₂)-алифатический ацил] бета - D-2-дезоксиаминоглюкопиранозил, где С₉ С₁₂-алифатический ацил это (Z)-4-деценоил, нонаноил, деканоил, 8-метилдеканоил, 9-метилдеканоил, 6-метилокстаноил, наноноил, 10-метилудеканоил и додеканоил;
B водород или защитная группа для аминогруппы;
Y ди- или полиамин формулы
NR [(CH₂)_mNR₁]_n X - [(CH₂)_kNR₂]_h (CH₂)_p NR₃R₄
где R водород;
R₁ и R₂ каждый независимо друг от друга водород или С₁ С₄-алкил;
R₃ и R₄ каждый независимо друг от друга водород, или С₁ С₄-алкил, необязательно замещенный группой NH₂ или ОН, или R₃ и R₄, вместе взятые со смежным атомом азота, пирролидин, пиперидин, оксазолидин, тиазолидин, изоксазолидин, изотиазолидин, гексагидро-1,5-диазепин, или гексагидро-1,4-диазепин;
m, k и p 2, 3, 4.

n и h 0,1 или 2.

Х одиночная связь, или если n 1, взятый вместе со смежной группой NR₁ представляет собой радикал формулы

или их аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами, отличающийся тем, что осуществляют превращение карбонового производного тейкопланина формулы I, где Y-OH, в соответствующий активированный сложный эфир, возможно защищенный по N₁₅-аминогруппе, затем проводят взаимодействие указанного активированного сложного эфира с молярным избытком амина формулы
NHR-[(CH₂)_mNR₁]_n- X-[(CH₂)_kNR₂]_h-(CH₂)_p- NR₃R₄
где R, R₁, R₂, R₃, R₄, X, m, n, h, k и p имеют указанные значения, в присутствии органического полярного растворителя в интервале температур 5 60^oС и при необходимости снимают защиту N₁₅-аминогруппы.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что активированный сложный эфир является цианометиловым сложным эфиром и его молярное соотношение с амином находится в пределах 1:10 1:20.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что сложный цианометиловый эфир получают взаимодействием исходной карбоновой кислоты, предпочтительно защищенной на N-аминофункции, примерно с 20-30-кратным молярным избытком хлорацетонитрила в присутствии инертного органического растворителя и основания, инертного к реакции, при 15 30^oС.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс проводят в инертном органическом растворителе в присутствии конденсирующего агента, выбранного среди (С₁-С₄)-алкил, фенил- или гетероциклофосфороазидата при 5 - 20^oС.

6. Способ по любому из пп.1 4, отличающийся тем, что алифатическим ацильным радикалом части молекулы, представленной символом A, является С₁₀-С₁₁ алифатический ацильный радикал, выбранный среди (Z)-4-деценоила, 8-метилнонаноила, деканоила, 8-метилдеканоила, 9-метилдеканоила,
В водород или защитная группа аминофункции;
R метил;
R₁ и R₂ водород;
R₃ и R₄ каждый независимо друг от друга водород, линейный или разветвленный алил С₁ С₄, возможно замещенный NH₂-группой, ОН-группой, или R₃ и R₄, взятые вместе со смежным атомом азота, пирролидин, морфолин или пиперазин;
m, k и р 2, 3, 4;
n и h 0 или 1;
Х одиночная связь или, если n 1, то, взятый вместе со смежной группой NR₁, представляет собой радикал формулы

или его аддитивных солей с фармацевтически приемлемыми кислотами.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6