Способ оценки антиокислительной активности химических и биохимических соединений

 

Изобретение может быть использовано в медицине и биологии, в частности при исследовании антиокислительных свойств лекарственных препаратов, применяемых для коррекции процессов перекисного окисления липидов. В оксигенератор помещаются водные растворы солей неорганического происхождения, а так же би- и дистиллированная вода и проводится перфузия озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 1,2 и 1,6 мг/л при экспозиции 5 - 10 мин. Затем 2 мл озонированного раствора вносят в кювету и ставят в светонепроницаемую камеру устройства, регистрируют уровень светового потока спонтанной хемилюминесценции раствора. Затем вносят исследуемое вещество и снова регистрируют уровень светового потока хемилюминесценции. Степень выраженности антиокислительной активности оценивают по разнице хемилюминесценции между опытным и контрольным образцами раствора. Упрощается способ оценки антиокислительной активности химических соединений за счет сокращения числа трудоемких операций и повышения точности оценки антиокислительной активности. 1 табл.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано, в частности, при использовании антиоксидантных свойств лекарственных препаратов, применяемых для коррекции процессов перекисного окисления липидов.

Известно, что свободнорадикальные реакции организма усиливаются вследствие различных патологических процессов [1]. Поэтому появилась необходимость в лекарственных препаратах, способных ингибировать свободнорадикальные реакции и защищать органы и ткани организма от их повреждающего действия.

Об антиокислительной активности химических и биохимических препаратов судят по интенсивности и длительности вспышки хемилюминесценции и ее затуханию в тест-системах в присутствии и отсутствии в них исследуемых веществ. Вспышки хемилюминесценции подтверждают наличие свободных радикалов в растворе, а по гашению хемилюминесценции можно оценить способность вводимого в раствор препарата связывать свободные радикалы.

В качестве тест-системы в известном способе используют цельную кровь. Свободнорадикальное окисление индуцируют, пропуская через образец крови озон в концентрации 0,26 - 0,35 мг/л в течение 5 - 7 мин, а перед измерением хемилюминесценции дополнительно усиливают ее введением в образец ионов двухвалентного железа [2].

Однако использование в качестве тест-системы плазмы крови, представляющей собой многокомпонентную систему с высокой концентрацией различных ионов и белков, усложняет способ оценки антиокислительной активности химических соединений, так как для инициирования перекисного окисления липидов кроме озонирования необходимо дополнительно вводить в тест-системы ионы двухвалентного железа и гидроперекись третичного бутила. Поэтому задачей изобретения является упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций и повышение точности оценки антиокислительной активности.

Поставленная задача решается в известном способе оценки антиокислительной активности химических и биохимических соединений путем индукции свободнорадикальных реакций в тест-системе посредством озонирования в присутствии и отсутствии исследуемого соединения с последующим измерением быстрой вспышки хемилюминесценции и определением антиокислительной активности по степени тушения хемилюминесценции в образцах, содержащих исследуемое соединение, в соответствии с изобретением в качестве тест-системы используют водные растворы солей неорганического происхождения, а также би- и дистиллированную воду, свободнорадикальные реакции индуцируют, пропуская через образец раствора озон в концентрации 1,2 - 1,6 мг/л в течение 5 - 10 мин. Диапазон концентраций озона и продолжительность озонирования образцов установлены опытным путем. Было установлено, что при концентрации озона меньше 1,2 мг/л и времени озонирования меньше 5 мин вспышка хемилюминесценции самая низкая, а концентрацию озона выше 1,6 мг/л и продолжительность озонирования свыше 10 мин поддерживать нецелесообразно, так как вспышка хемилюминесценции практически не меняется (см. таблицу).

В источниках научно-технической и патентной информации не выявлены сведения об определении антиокислительной активности химических соединений описанным способом. Поэтому предлагаемое техническое решение способа обладает новизной и соответствует критерию патентоспособности "изобретательский уровень".

Способ оценки антиокислительной активности химических соединений в соответствии с изобретением осуществляется следующим образом.

В оксигенератор помещаются водные растворы солей неорганического происхождения, а также би- или дистиллированная вода и проводится перфузия озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 1,2 - 16 мг/л при экспозиции 5 - 10 мин. После этого 2 мл озонированного раствора вносят в кювету и ставят в светонепроницаемую камеру устройства, регистрируют уровень светового потока спонтанной хемилюминесценции раствора. Затем в эту же кювету, не вынимая из камеры, вносят исследуемое вещество, тщательно перемешивают и снова регистрируют уровень светового потока хемилюминесценции при закрытой створке прерывателя светового потока темновой камеры. При этом полученные результаты автоматически выводятся на цифровой регистратор устройства или на экран компьютера.

Степень выраженности антиокислительной активности исследуемого вещества оценивают по разнице хемилюминесценции между опытным и контрольным образцами раствора.

Пример. В стеклянный оксигенатор помещают раствор Кребса-Ханзеляйта, где он озонируется 10 мин озоно-кислородной смесью с концентрацией озона 1,6 мг/л. 2 мл раствора после озонирования помещают в светонепроницаемую камеру устройства, замеряют быструю вспышку хемилюминесценции I max=0,7 имп/с. Затем в кювету вносится пипеткой 0,5 мг/л цитохрома С и снова замеряется быстрая вспышка хемилюминесценции I max=0,32 имп/с. По полученным результатам видно, что цитохром С гасит быструю вспышку хемилюминесценции, т.е. обладает антиокислительной активностью.

Выводы: изобретение существенно упрощает способ оценки антиокислительной активности химических соединений за счет сокращения числа трудоемких операций и повышения точности оценки антиокислительной активности.

Источники информации.

1. Журавлев А.И., Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение в комплексной диагностике. М.: Медицина. 1979, с. 128.

Авт. св. СССР 1045127, кл. G 01 N 33/48, 1985.

Формула изобретения

Способ оценки антиокислительной активности химических и биохимических соединений путем индукции свободнорадикальных реакций в тест-системе на основе водных растворов посредством озонирования в присутствии и отсутствии исследуемого соединения с последующим измерением быстрой вспышки хемилюминесценции и определением антиокислительной активности по степени тушения хемилюминесценции в образцах, содержащих исследуемое соединение, отличающийся тем, что в качестве тест-системы используют водные растворы солей неорганического происхождения, а также би- и дистиллированную воду, а свободнорадикальные реакции индуцируют, пропуская через образец раствора озона в концентрации 1,2 - 1,6 мг/л в течение 5 - 10 мин.

РИСУНКИ

Рисунок 1