Способ получения высококачественного препарата "лидаза"

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к производству лекарственных препаратов. Технический результат: разработан промышленный способ получения высококачественного ферментативного препарата "Лидаза" для внутримышечных инъекций и электрофореза, не содержащего примесей. Сущность изобретения заключается в том, что экстракция семенников крупного рогатого скота проводится уксусной кислотой, затем экстракт очищается центрифугированием и ультрафильтрацией через мембраны с размером пор 50000 Да при рН 7,0 - 7,1, после чего проводится стерилизующая фильтрация и лиофильная сушка препарата при режиме, позволяющем сохранить лечебные свойства фермента. 1 табл.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к производству лекарственных препаратов.

Целью изобретения является разработка промышленного способа получения высококачественного ферментативного препарата "Лидаза" для внутримышечных инъекций и электрофореза, не содержащего посторонних примесей, пригодного для производства препарата в промышленных объемах. Во всех описанных в литературе и применяемых в промышленности способах для автолиза (экстрагирования) используется ацетон. Полученный таким способом препарат содержит органические примеси как от самого растворителя, так и примеси, которые ацетон извлекает из семенников.

Наиболее близким аналогом предлагаемого способа является способ получения препарата "Лидаза", описанный в [1] (А.с. 827068, A 61 K 37/48. Способ получения Лидазы, заявитель Ленинградское производственное объединение мясной промышленности). Измельченные семенники крупного рогатого скота экстрагируются уксусной кислотой, осаждаются и промываются охлажденным ацетоном, затем полученный продукт фильтруют и сушат. Таким образом, этот способ также не лишен недостатков, описанных выше. Кроме того, этот способ не позволяет наладить производство качественного препарата в промышленных объемах.

Сущность предлагаемого нами способа заключается в следующем. Для экстракции фермента используется уксусная кислота при pH 4,1 - 4,4. Экстрагирование проводится в течение 19 - 20 часов, что позволяет получить препарат "Лидаза", полностью соответствующий требованиям фарм.статьи 42-2606-93 по содержанию белка и гиалуронидазной активности. Центрифугированием отделяется осадок от надосадочной жидкости на центрифугах PC-6. Центрифугат концентрируют и очищают ультрафильтрацией через мембраны с размером пор 50000 Да. Стерилизующая фильтрация проводится через мембраны 0,22 мкм, что позволяет максимально очистить продукт, а тщательно подобранный режим лиофильной сушки, который проводится на промышленных аппаратах типа LZ - 45/27, позволяет сохранить лечебные свойства фермента. Препарат разливают в 5 мл - ампулы и в кассетах помещают в сублиматор лиофильной установки и проводят замораживание препарата при температуре не выше -40^oC в течение 12 часов непосредственно в сублиматоре аппарата LZ - 45.27. Замораживание препарата непосредственно в сублиматоре и исключение предварительного замораживания препарата в низкотемпературных прилавках позволяет получить более качественный конечный препарат. Началом процесса лиофильной сушки считается момент включения вакуумного насоса. Остаточное давление в камере не должно превышать 10 Па. Через 3 часа процесс "сорбции" интенсифицируют подогревом полок сублиматора. Температуру подогрева полок регулируют таким образом, чтобы температура замороженного препарата не превышала -20^oC в течение 10 - 16 часов. Затем постепенно повышают температуру от минусовой до плюсовой и переходят на стадию теплового досушивания ("десорбции") в течение 10 - 14 часов. На конечном этапе сушки температура "Лидазы" не должна превышать +25^oC.

В таблице приведена статистика по препарату "Лидаза", полученная при проверке в Государственном научно-исследовательском институте по стандартизации и контролю лекарственных средств. Проверка препарата производилась в двух лабораториях: в лаборатории органопрепаратов и в лаборатории биохимии лекарственных средств. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает получение высококачественного ферментативного препарата "Лидаза" для внутримышечных инъекций и электрофореза с активностью от 64 до 128 у.е. с гарантированным сроком сохранения гиалуронизадной активности в течение 2-х лет и содержанием белка не менее 10 мг/мл, что соответствует требованиям фарм. статьи 42- 2606-93.

Литература 1. Авторское свидетельство N 827068, МКИ A 61 K 37/48, "Способ получения Лидазы", заявитель - Ленинградское производственное объединение мясной промышленности.

Формула изобретения

Способ получения препарата "Лидаза" путем измельчения семенников крупного рогатого скота, заключающийся в том, что проводят экстракцию уксусной кислотой при рН 4,1 - 4,4 в течение 19 - 20 ч, затем проводят центрифугирование, полученный центрифугат концентрируют и проводят ультрафильтрацию через мембраны с размером пор 50000 Да при рН 7,0 - 7,1 при разбавлении 0,9%-ным раствором хлорида натрия, стерилизующую фильтрацию осуществляют на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм, затем препарат разливают в ампулы и в кассетах помещают в сублиматор лиофильной установки и проводят замораживание препарата при температуре не выше -40^o непосредственно в сублиматоре в течение 12 ч, температуру подогрева полок регулируют таким образом, чтобы температура замороженного продукта не превышала -20^o в течение 10 - 16 ч, затем постепенно повышают температуру от минусовой до плюсовой и переходят на стадию теплового досушивания в течение 10 - 14 ч.

РИСУНКИ

Рисунок 1