Способ оценки влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза

 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике. Способ позволяет повысить точность оценки влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза за счет оценки взаимного влияния тромбоцитов и плазменных факторов. Проводят исследование плазмы крови, при этом богатую тромбоцитами плазму делят на две аликвоты - первую и вторую и только в первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов под действием индуктора, измененную первую аликвоту и первоначальную вторую синхронно центрифугируют, получают в первом и втором случае бедную тромбоцитами плазму, раздельно определяют в первой и второй аликвотах содержащиеся в бедной тромбоцитами плазме идентичные факторы, вычисляют разницу между ними и по потреблению и высвобождению этих факторов оценивают степень агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике.

Оно может быть использовано при оценке системы гемостаза у больных ИБС, хирургического профиля и других заболеваний.

Суть изобретения в том, что богатую тромбоцитами плазму делят на две аликвоты и только в первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов, например, под действием АДФ; измененную первую аликвоту и первоначальную вторую аликвоту синхронно центрифугируют, получают в первом и втором случае бедную тромбоцитами плазму; определяют в первой и второй аликвотах содержащиеся в бедной плазме идентичные факторы, например фибриноген, антитромбин-111, протеин C и другие, проводят дифференциальное сравнение указанных факторов, определенных для первой и второй аликвот; наблюдают как положительную так и отрицательную динамику идентичных факторов, выполняют оценку степени влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза.

Известны способы-аналоги [1] данного изобретения. Недостаток аналогов в том, что они не позволяют выполнить дифференциальный анализ факторов системы гемостаза в бедной тромбоцитами плазме до и после агрегации тромбоцитов.

В качестве прототипа выбран способ [2] . Ему присущи недостатки. Оценивается только суммарная функциональная активность тромбоцитов. Способ-прототип не позволяет выявить и оценить влияние функции тромбоцитов на плазменные факторы.

В изобретении решена задача оценки взаимного влияния тромбоцитов и плазменных факторов (компонентов плазмы).

Указанная задача решена тем, что богатую тромбоцитами плазму делят на две аликвоты и только в первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов, например, под действием АДФ; измененную первую аликвоту и первоначальную вторую аликвоту синхронно центрифугируют, получают в первом и втором случае бедную тромбоцитами плазму; определяют в первой и второй аликвотах содержащиеся в бедной плазме идентичные факторы, например фибриноген, антитромбин-111, протеин C и другие, проводят дифференциальное сравнение указанных факторов, определенных для первой и второй аликвот; наблюдают как положительную, так и отрицательную динамику идентичных факторов, выполняют оценку степени влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза.

В пробирку с консервантом берут 10 мл крови из вены больного. Центрифугируют кровь и получают богатую тромбоцитами плазму. Делят указанную плазму на две аликвоты. В первой аликвоте выполняют необратимую агрегациию тромбоцитов. Используют в качестве индуктора, например, АДФ. Измененную первую аликвоту и находящуюся в первоначальном состоянии вторую аликвоту центрифугируют синхронно при частоте вращения 3000 об/мин в течение 10 мин. Синхронное центрифугирование позволяет снизить влияние различных факторов на процесс разделения в аликвотах. Частота вращения менее 3000 об/мин и время менее 10 мин не позволяют качественно провести разделение составляющих крови. Увеличение числа оборотов свыше 3000 об/мин и времени более 10 мин незначительно улучшает разделение фракций, но сильно увеличивает энергозатраты.

В первой аликвоте получают бедную тромбоцитами плазму, в которой ранее проведена необратимая агрегация тромбоцитов. Во второй аликвоте бедная тромбоцитами плазма из первоначально подготовленной крови.

При создании изобретения экспериментально доказано возможное различное изменение взаимного влияния тромбоцитов и плазменных факторов в первой и второй аликвотах.

Определяют в первой и второй аликвотах содержащиеся в бедной плазме идентичные факторы, например: фибриноген, антитромбин-111, протеин C и другие.

Проводят дифференциальное сравнение идентичных факторов. Получают положительную или отрицательную динамику, а также возможное отсутствие отдельных изменений указанных идентичных факторов, определенных в первой и во второй аликвотах. Формируют наиболее информативную группу дифференциальных показателей факторов крови, характерных для заболевания данного пациента.

По результатам дифференциального сравнения группы идентичных факторов выполняют оценку степени влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза.

Пример 1. Больной П-ов, 58 лет. Для исследования взяли 10 мл крови в пробирку с консервантом. Стандартным центрифугированием получают богатую тромбоцитами плазму. Делят ее на две аликвоты. В первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов, используя в качестве индуктора АДФ. Измененную первую и первоначальную вторую аликвоты центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 10 мин. Получают бедную тромбоцитами плазму. Раздельно определяют в первой и второй аликвотах: фибриноген, антитромбин-111, протеин C, D-димеры. Вычисляют разницу между ними. Находят: фибриноген снизился, антитромбин-111 не изменился, протеин C снизился, D-дмеры не повысились. Выполняют оценку влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза, сущность которой в том, что наблюдают потребление фибриногена и протеина C, а также образование D-димеров.

Пример 2. Больная Я-ва, 64 года. Выполняют забор крови и готовят богатую тромбоцитами плазму. Делят ее на две равные аликвоты. В первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов. Затем аликвоты центрифугируют. Получают бедную тромбоцитами плазму. Раздельно определяют в первой и второй аликвотах: плазминоген, антиплазмин, ПАИ, фактор Виллебранда. Находят разницу между идентичными факторами. Плазминоген и ПАИИ снизились. Антиплазмин не изменился. Фактор Виллебранда повысился. Выполняют оценку влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза, сущность которой в том, что наблюдают потребление плазминогена и ПАИ, а также высвобождение фактора Виллебранда.

Эффективность предложенного изобретения в том, что: 1. Способ позволяет расширить возможности клинико-лабораторной диагностики нарушений в системе гемостаза при различных заболеваниях и проводимых методов лечения.

2. В клинической практике по данному способу выполняют антитромботическую и ангиопротекторную коррекционную терапию.

3. Способ используют для аттестации новых фармакологических препаратов, влияющих на систему гемостаза.

Литература 1. Баркаган З. С. , Момот А. А. Основы диагностики нарушений гемостаза. - М. , 1999.

2. Born G. V. R. , Cross M. J. , "The agregation of blood platelets". J. Physiol. 168, 178-195, 1963.

Формула изобретения

Способ оценки влияния агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза при выполнении клинико-функциональных исследований, включающий исследование плазмы крови, отличающийся тем, что богатую тромбоцитами плазму делят на две аликвоты - первую и вторую и только в первой аликвоте выполняют необратимую агрегацию тромбоцитов под действием индуктора, измененную первую аликвоту и первоначальную вторую синхронно центрифугируют, получают в первом и втором случае бедную тромбоцитами плазму, раздельно определяют в первой и второй аликвотах содержащиеся в бедной тромбоцитами плазме идентичные факторы, вычисляют разницу между ними и по потреблению и высвобождению этих факторов оценивают степень агрегации тромбоцитов на факторы системы гемостаза.