Производные пиперидинкарбоновых кислот, фармацевтические композиции, содержащие их, способ стимуляции секреции гормона роста

 

Изобретение относится к 1,4- и 1,3-дизамещенным пиперидинам, которые обладают активностью, стимулирующей секрецию гормона роста гипофизом млекопитающего, и могут найти применение в медицине. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, в частности к 4,4-дизамещенным и 3,3-дизамещенным соединениям пиперидина, к содержащим их композициям и к их применению для лечения патологических заболеваний, вызванных недостаточностью гормона роста.

Уровень техники

Гормон роста представляет собой гормон, который стимулирует рост всех тканей, способных расти. Кроме того, известно, что гормон роста влияет на ряд метаболических процессов, например, стимулирует синтез белка и мобилизацию свободной жирной кислоты и вызывает переключение энергии метаболизма углеводов на метаболизм жирных кислот. Дефицит гормона роста может привести к ряду тяжелых патологических заболеваний, например, к карликовости.

Гормон роста секретируется гипофизом. Его секреция находится под строгим прямым или косвенным контролем ряда гормонов и нейротрансмиттеров. Секреция гормона роста может стимулироваться рилизинг-гормоном гормона роста (GHRH) и ингибироваться соматостатином. В обоих случаях гормоны секретируются гипоталамусом, но их действие опосредуется в первую очередь через специфические рецепторы, локализованные в гипофизе.

Описаны также другие соединения, которые стимулируют секрецию гормона роста гипофизом. Например, аргинин, L-3,4-дигидроксифенилаланин (L-дофа), глюкагон, вазопрессин, РАСАР (гипофизарный пептид, активирующий аденилатциклазу), агонисты мускариновых рецепторов и синтетический гексапептид, GHRH (пептид, высвобождающий гормон роста), вызывают секрецию эндогенного гормона роста, действуя либо непосредственно на гипофиз, либо действуя на секрецию GHRH и/или соматостатина гипоталамусом.

При заболеваниях или состояниях, когда желательно повысить уровень гормона роста, белковая природа гормона роста не позволяет использовать ничего кроме парентерального введения.

Кроме того, другие действующие прямо природные регуляторы секреции, например, GHRH и РАСАР, являются достаточно длинными полипептидами, и по этой причине предпочтительно парентеральное введение.

Ранее было предложено применение определенных соединений для увеличения уровня гормона роста у млекопитающих, например, в патентах ЕР 38072, ЕР 83864, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711, WO 93/04081, WO 9517422, WO 9517423, WO 9514666, WO 9419367, WO 9534311, WO 9602530, WO 9615148, WO 9613265, WO 9622997, WO 9635713, WO 9638471, WO 9632943, WO 9700894, WO 9706803, WO 9709060, WO 9707117, WO 9711697, WO 9722620, WO 9723508, WO 9724369 и WO 9734604.

Для композиции соединений, вызывающих секрецию гормона роста, важна как их активность, стимулирующая секрецию гормона роста, так и их биодоступность. Таким образом, целью настоящего изобретения являются новые соединения, обладающие свойствами, стимулирующими секрецию гормона роста. Более того, целью изобретения являются также новые соединения, обладающие свойствами, стимулирующими секрецию гормона роста (регуляторы секреции гормона роста), которые являются специфичными и/или избирательными и не имеют или, по существу не имеют, побочных эффектов, таких как, например, влияние на секрецию ЛГ, ФСГ, ТТГ, АКТГ, вазопрессина, окситоцина, кортизола и/или пролактина. Целью изобретения являются также соединения с хорошей биологической доступностью при пероральном введении.

Краткое описание изобретения

В соответствии с настоящим изобретением предлагаются новые соединения, которые действуют прямо на гипофизарные клетки в нормальных экспериментальных условиях in vitro, вызывая секрецию ими гормона роста.

Соединения, способствующие секреции гормона роста, могут быть использованы in vitro как уникальный инструмент исследования для понимания, наряду с прочим, как регулируется секреция гормона роста на уровне гипофиза.

Более того, соединения настоящего изобретения, способствующие секреции гормона роста, можно также вводить in vivo для увеличения секреции эндогенного гормона роста.

Описание изобретения

Таким образом, в широком смысле настоящее изобретение относится к соединению общей формулы I

где

R¹ представляет собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом;

a и d независимо равны 0, 1, 2 или 3;

b и с независимо равны 0, 1, 2, 3, 4 или 5, при условии, что b + с равно 3, 4 или 5;

D представляет собой

R²-NH-(CR³R⁴)_e-(CH ₂)_f-M-(chr⁵)_g-(CH ₂)_h-,

где R², R³ , R⁴ и R⁵ независимо представляют собой водород или C_1-6алкил, необязательно замещенный одним или более галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R² и R³ или R² и R ⁴, или R³ и R⁴ могут необязательно образовывать -(СН₂)_i-U-(СН₂) _j-, где i и j независимо равны 1 или 2, а U представляет собой -О-, -S- или валентную связь;

h и f независимо равны 0, 1, 2 или 3;

g и е независимо равны 0 или 1;

М представляет собой валентную связь, -CR⁶=CR⁷ -, арилен, гетарилен, -О- или -S-;

R⁶ и R ⁷ независимо представляют собой водород или C_1-6 алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом;

G представляет собой -О-(CH₂)_k-R ⁸,

J представляет собой -О-(СН₂)_l-R ¹³,

где R⁸, R⁹, R¹⁰, R ¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R ¹⁵, R¹⁶ и R¹⁷ независимо представляют собой водород, галоген, арил, гетарил, C_1-6алкил или C_1-6алкокси;

k и l независимо равны 0, 1 или 2;

Е представляет собой -CONR¹⁸R¹⁹ , -COOR¹⁹, -(СН₂)_m-NR¹⁸ SO₂R²⁰, -(CH₂)_m -NR¹⁸COR²⁰, -(CH₂)_m -OR¹⁹, -(СН₂)_m-ОСОR²⁰ , -CH(R¹⁸)R¹⁹, -(CH₂)_m -NR¹⁸-CS-NR¹⁹R²¹ или -(СН ₂)_m-NR¹⁸-CO-NR¹⁹R ²¹; или

Е представляет собой -CONR²²NR ²³R²⁴, где R²² представляет собой водород, C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или арил или гетарил, необязательно замещенные одним или более C_1-6-алкилом; R²³ представляет собой C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или C_1-7-ацил; и R²⁴ представляет собой водород, C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом; или арил или гетарил, необязательно замещенные одним или более C_1-6-алкилом; или

R²² и R²³ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²² и R²⁴ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²³ и R²⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом;

где m равно 0 1, 2 или 3,

R ¹⁸, R¹⁹ и R²¹ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный галогеном, -N(R²⁵)R²⁶, где R²⁵ и R²⁶ независимо представляют собой водород или C _1-6алкил; гидроксил, C_1-6-алкокси, C _1-6-алкоксикарбонил, C_1-6-алкилкарбонилокси или арил;

или R¹⁹ представляет собой

где

Q представляет собой -СН< или -N<,

К и L независимо являются -СН₂-, -СО-, -О-, -S-, -NR²⁷- или валентной связью, где R²⁷ представляет собой водород или C_1-6-алкил;

n и о независимо равны 0 1, 2, 3 или 4,

R²⁰ представляет собой C_1-6алкил, арил или гетарил;

или к его фармацевтически приемлемой соли;

при условии, что

если М представляет собой валентную связь, то Е является -CONR²²NR ²³R²⁴.

В более узком варианте настоящее изобретение относится к соединению общей формулы I

где

R¹ представляет собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом;

a и d независимо равны 0 1, 2 или 3;

b и с независимо равны 0 1, 2, 3, 4 или 5, при условии, что b + с равно 3, 4 или 5,

D представляет собой

R²-NH-(CR³R⁴)_e-(CH ₂)_f-M-(chr⁵)_g-(СН ₂)_h-,

где R², R³ , R⁴ и R⁵ независимо представляют собой водород или C_1-6алкил, необязательно замещенный одним или более галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R² и R³ или R² и R ⁴, или R³ и R⁴ могут необязательно образовывать -(СН₂)_i-U-(СН₂) _j-, где i и j независимо равны 1 или 2, а U представляет собой -О-, -S- или валентную связь;

h и f независимо равны 0, 1, 2 или 3;

g и e независимо равны 0 или 1;

М представляет собой -CR⁶=CR⁷-, арилен, гетарилен, -О- или -S-;

R⁶ и R⁷ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом;

G представляет собой -О-(СН₂)_k-R⁸,

J представляет собой -О-(CH₂)_l-R ¹³,

где R⁸, R⁹, R¹⁰, R ¹¹, R¹², R¹³, R¹⁴, R ¹⁵, R¹⁶ и R¹⁷ независимо представляют собой водород, галоген, арил, гетарил, C_1-6-алкил или C_1-6-алкокси;

k и l независимо равны 0, 1 или 2;

Е представляет собой -CONR¹⁸R¹⁹ , -COOR¹⁹, -(CH₂)_m-NR ¹⁸SO₂R²⁰, -(CH₂)_m -NR¹⁸COR²⁰, -(СН₂) _m-ОR¹⁹, -(CH₂)_m-OCOR ²⁰, -CH(R¹⁸)R¹⁹, -(CH₂ )_m-NR¹⁸-CS-NR¹⁹R²¹ или -(CH₂)_m-NR¹⁸-CO-NR ¹⁹R²¹; или

Е представляет собой -CONR ²²NR²³R²⁴, где R²² представляет собой водород, C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или арил или гетарил, необязательно замещенные одним или более C_1-6-алкилом; R²³ представляет собой C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или С_1-7-ацил; и R²⁴ представляет собой водород, C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом; или арил или гетарил, необязательно замещенные одним или более С_1-6-алкилом; или

R²² и R²³ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²² и R²⁴ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²³ и R²⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом;

где m равно О, 1, 2 или 3,

R¹⁸, R¹⁹ и R²¹ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный галогеном, -N(R²⁵)R²⁶, где R²⁵ и R²⁶ независимо представляют собой водород или C _1-6-алкил; гидроксил, C_1-6-алкокси, С _1-6-алкоксикарбонил, C_1-6-алкилкарбонилокси или арил;

или R¹⁹ представляет собой

где

Q представляет собой -СН< или -N<,

К и L независимо являются -СН₂-, -СО-, -О-, -S-, -NR²⁷- или валентной связью, где R²⁷ представляет собой водород или C_1-6-алкил;

n и о независимо равны 0, 1, 2, 3 или 4,

R²⁰ представляет собой C_1-6алкил, арил или гетарил;

или к его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, соединения формулы I могут включать любые их оптические изомеры, в форме разделенных, чистых или частично очищенных оптических изомеров или их рацемических смесей. В случае присутствия одного или более хиральных атомов углерода, такой хиральный центр или центры могут быть в R- и/или S-конфигурации, или в смеси R и S конфигураций.

Более того, соединения формулы I могут иметь одну или более двойных углерод-углеродных связей с возможностью геометрической изомерии, и подразумевается, что возможные стереоизомеры (Е или Z изомеры) включены в объем изобретения, если специфический геометрический изомер не указан.

В одном варианте изобретения в соединении формулы I R ¹ представляет собой водород. В другом варианте в соединении формулы I R¹ представляет собой C_1-6-алкил, такой как C_1-4-алкил, в частности метил.

В другом варианте в соединении формулы I а равно 1.

В еще одном варианте в соединении формулы I d равно 1.

В другом варианте в соединении формулы I b равно 1.

В еще одном варианте в соединении формулы I b равно 2.

В другом варианте в соединении формулы I b равно 3.

В еще одном варианте в соединении формулы I с равно 1.

В другом варианте в соединении формулы I с равно 2.

В еще одном варианте в соединении формулы I с равно 3.

В конкретном варианте в соединении формулы I b+с равно 4.

В другом варианте в соединении формулы I D представляет собой

R²-NH-(CR³R ⁴)_e-(CH₂)_f-M-(chr ⁵)_g-(СН₂)_h-,

где R², R³, R⁴ и R⁵ независимо представляют собой водород или C_1-6алкил, необязательно замещенный одним или более галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R² и R³ или R ² и R⁴, или R³ и R⁴ могут необязательно образовывать -(СН₂)_i-U-(СН ₂)_j-, где i и j независимо равны 1 или 2, а U представляет собой -О-, -S- или валентную связь,

h и f независимо равны 0 1, 2 или 3;

g и е независимо равны 0 или 1;

М представляет собой -CR⁶=CR⁷ -, арилен, гетарилен, -О- или -S-; где R⁶ и R ⁷ независимо представляют собой водород или C_1-6 -алкил. В одном варианте R² представляет собой водород. Во втором варианте R³ представляет собой водород. В третьем варианте R³ представляет собой C_1-6 -алкил, в частности метил. В другом варианте R⁴ представляет собой водород. В еще одном варианте R⁴ представляет собой C_1-6-алкил, в частности метил. В еще одном варианте R³ и R⁴ образуют -(СН ₂)_i-U-(СН₂)_j-. В еще одном варианте i равно 1. В другом варианте i равно 2. В еще одном варианте j равно 1. В другом варианте j равно 2. В еще одном варианте U представляет собой валентную связь. В другом варианте R³ и R⁴ образуют -(СН₂ )₃-. В другом варианте h равно 0. В еще одном варианте f равно 0. В другом варианте f равно 1. В другом варианте g равно 0. В еще одном варианте е равно 0. В другом варианте е равно 1. В еще одном варианте М представляет собой -CR⁶=CR ⁷-, арилен, -О- или -S-. В другом варианте R⁶ и R⁷ оба являются водородом или один R ⁶ и R⁷ представляет собой метил, а другой представляет собой водород. В еще одном варианте М представляет собой Е-изомер -CR⁶=CR⁷-. В другом варианте М представляет собой -СН=СН-. В еще одном варианте М представляет собой -С(СН ₃)=СН-. В другом варианте М представляет собой арилен, в частности фенилен.

В еще одном варианте соединения формулы I D представляет собой

R²-NH-(CR³ R⁴)_e-(CH₂)_f-M-(chr ⁵)_g-(СН₂)_h-,

где R², R³, R⁴ и R⁵ независимо представляют собой водород или C_1-6алкил, необязательно замещенный одним или более галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R² и R³ или R² и R⁴, или R³ и R ⁴ могут необязательно образовывать -(CH₂) _i-U-(CH₂)_j-, где i и j независимо равны 1 или 2, а U представляет собой -О-, -S- или валентную связь,

h и f независимо равны 0, 1, 2 или 3;

g и е независимо равны 0 или 1;

М представляет собой валентную связь. В одном варианте R² представляет собой водород. Во втором варианте R³ представляет собой водород. В третьем варианте R³ представляет собой C_1-6 -алкил, в частности метил. В другом варианте R⁴ представляет собой водород. В еще одном варианте R⁴ представляет собой C_1-6алкил, в частности метил. В другом варианте R³ и R⁴ образуют -(СН ₂)_i-U-(CH₂)_j-. В еще одном варианте i равно 1. В другом варианте i равно 2. В еще одном варианте j равно 1. В другом варианте j равно 2. В еще одном варианте U представляет собой валентную связь. В другом варианте R³ и R⁴ образуют -(СН₂ )₃-. В другом варианте h равно 0. В еще одном варианте f равно 0. В другом варианте f равно 1. В другом варианте g равно 0. В еще одном варианте е равно 0. В другом варианте е равно 1. В предпочтительном варианте соединения формулы I D представляет собой (1Е)-4-амино-4-метилпент-1-енил,

(1Е)-4-амино-2,4-диметилпент-1-енил, (1Е)-3-(1-аминоциклобутил)проп-1-енил, 1-амино-1-метилэтил или 3-аминометилфенил.

В еще одном варианте соединения формулы I G представляет собой -О-(CH₂)_k-R ⁸,

где R⁸, R⁹, R¹⁰, R ¹¹ и R¹² независимо представляют собой водород, галоген, арил, гетарил, С_1-6-алкил или C_1-6 алкокси; k равно 0, 1 или 2. В другом варианте R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ и R¹² независимо представляют собой водород. В еще одном варианте один из R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ и R¹² независимо представляет собой фенил, а другие являются водородом, в частности R¹⁰ представляет собой фенил. В другом варианте R⁸ представляет собой фенил. В еще одном варианте k равно 1. В еще одном варианте G является фенилом, 1-нафтилом или 2-нафтилом, предпочтительно фенилом или 2-нафтилом. В другом варианте G является бензилокси. В еще одном варианте G является 1H-индолом. В другом варианте G является бифенил-4-ил.

В указанном выше соединении формулы I G предпочтительно представляет собой 2-нафтил, бензилокси, 1H-индол или бифенил-4-ил.

В другом варианте соединения формулы I J представляет собой

где R¹³, R¹⁴, R¹⁵, R ¹⁶ и R¹⁷ независимо представляют собой водород, галоген, арил, гетарил, C_1-6-алкил или C_1-6 алкокси. В еще одном варианте J представляет собой

В конкретном варианте J представляет собой

В предпочтительном варианте R¹³, R¹⁴ , R¹⁵, R¹⁶ и R¹⁷ все представляют собой водород.

В еще одном варианте соединения формулы I E представляет собой -CONR¹⁸R¹⁹, -COOR ¹⁹ или -(CH₂)_m-OR¹⁹ , где m равно 0, 1, 2 или 3, R¹⁸ и R¹⁹ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил, необязательно замещенный галогеном, -N(R²⁵)R²⁶ , где R²⁵ и R²⁶ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил; гидроксил, C_1-6 -алкокси, C_1-6-алкоксикарбонил, C_1-6 -алкилкарбонилокси или арил. В конкретном варианте Е представляет собой -CONR¹⁸R¹⁹. В другом варианте R ¹⁸ и R¹⁹ независимо представляют собой водород или C_1-6-алкил. В конкретном варианте один из R ¹⁸ и R¹⁹ представляет собой водород и другие являются метилом. В другом варианте Е представляет собой -COOR ¹⁹. В конкретном варианте R¹⁹ представляет собой C_1-6-алкил, в частности этил.

В другом варианте Е представляет собой -CONR²²NR²³ R²⁴, где R²² представляет собой водород, C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или арил или гетарил, необязательно замещенный одним или более C_1-6-алкилом; R²³ представляет собой C_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом, или C_1-7-ацил; и R ²⁴ представляет собой водород, С_1-6-алкил, необязательно замещенный одним или более арилом или гетарилом; или арил или гетарил, необязательно замещены одним или более C_1-6 -алкилом; или

R²² и R²³ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²² и R²⁴ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом; или

R²³ и R²⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, необязательно замещенную одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом. В еще одном варианте R²² представляет собой водород. В другом варианте R²² представляет собой C_1-6-алкил, такой как С_1-4-алкил, в частности метил. В дополнительном варианте R²³ представляет собой C_1-6-алкил, такой как C_1-4-алкил, в частности метил. В другом варианте R²³ представляет собой C_1-7-ацил, такой как С_2-4-ацил, в частности ацетил. В еще одном варианте соединения формулы I R ²⁴ представляет собой водород. В другом варианте соединения формулы I R²⁴ представляет собой C_1-6-алкил, такой как C_1-6-алкил, в частности метил. В специальном варианте R²² представляет собой водород, а R²³ и R²⁴ представляют собой C_1-6-алкил, такой как C_1-4-алкил, в частности метил. В другом варианте R²² и R²³ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, которая необязательно замещена одним или более C _1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом. Такая гетероциклическая система, включающая R ²² и R²³, может быть ароматической или неароматической и может быть выбрана из, например, пиразола, пиридазина, триазина, индазола, фталазина, циннолина, пиразолидина или пиразолина. В еще одном варианте R²² и R²⁴ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, которая необязательно замещена одним или более С_1-6алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом. Такая гетероциклическая система, включающая R²² и R²⁴, может быть ароматической или неароматической и может быть выбрана из, например, пиразола, пиридазина, триазина, индазола, фталазина, циннолина, пиразолидина или пиразолина. В другом варианте R²² и R²³ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, которая необязательно замещена одним или более C_1-6-алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом. Такая гетероциклическая система, включающая R²² и R²³, может быть ароматической или неароматической и может быть выбрана из, например, пиразола, пиридазина, триазина, индазола, фталазина, циннолина, пиразолидина или пиразолина. В дополнительном варианте соединения формулы I R²³ и R²⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, могут образовывать гетероциклическую систему, которая необязательно замещена одним или более C_1-6 -алкилом, галогеном, амино, гидроксилом, арилом или гетарилом. Такая гетероциклическая система, включающая R²² и R²³, может быть ароматической или неароматической и может быть выбрана из, например, азиридина, дитиазина, пиррола, имидазола, пиразола, изоиндола, индола, индазола, пурина, пирролидина, пирролина, имидазолидина, имидазолина, пиразолидина, пиразолина, пиперидина, пиперазина, индолина, изоиндолина или морфолина. В конкретном варианте R²³ и R²⁴ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пирролидин.

Когда R²² и R²³ образуют гетероциклическую систему, R²³ и R²⁴ могут также одновременно образовывать гетероциклическую систему или R²⁴ может быть водородом, C_1-6-алкилом, необязательно замещенным одним или более арилом или гетарилом, или арилом или гетарилом, необязательно замещенными одним или более C_1-6-алкилом.

Когда R²² и R²⁴ образуют гетероциклическую систему, R²³ и R²⁴ могут одновременно также образовывать гетероциклическую систему или R²³ может быть C_1-6-алкилом, необязательно замещенным одним или более арилом или гетарилом или C_1-7-ацилом.

В указанном выше соединении формулы I E предпочтительно представляет собой (метиламино)карбонил, N,N-диметилгидразинокарбонил, этоксикарбонил или (пирролидин-1-ил)аминокарбонил.

Особенно предпочтительной группой соединений формулы I являются соединения, имеющие формулу Iа

где R¹, D, G, E, J, а и d принимают значения описанные выше.

Другой особенно предпочтительной группой соединений формулы I являются соединения, имеющие формулу Ib

где R¹, D, G, Е, J, а и d принимают значения, описанные выше.

Предпочтительные соединения формулы I изобретения представляют собой:

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламид 1-((2R)-2-{N-[(2E)-4-(1-аминоциклобутил)бут-2-еноил]-N-метиламино}-3-(бифенил-4-ил)пропионил)-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

2-Амино-N-[(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамид

2-Амино-N-{(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-бензилоксиметил-2-оксоэтил 2-метил-пропионамид

2-Амино-N-[(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((1Н-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамид

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этиловый эфир 3-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-(3-(аминометил)бензоиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

N-{(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-N-метиламид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

N-[(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]амид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-N-метиламид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}амид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

2-Aмино-N-{2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-((бифенил-4-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

2-Aмино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

2-Амино-N-{2-[3-бензил-3-(N’-метилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((бензилоксиметил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’-метилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

(Пирролидин-1-ил)амид-1-[(2R)-2-(2-амино-2-метилпропиониламино)-3-(lH-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N,N’,N’-триметилгидразино-карбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

и их фармацевтически приемлемые соли.

Общий способ

Схему I см. в конце описания.

Методики, применяемые в данном изобретении и иллюстрируемые на указанной выше схеме I, основаны на пептидных реакциях присоединения, хорошо известных в уровне техники, и ни в коей мере не должны рассматриваться как лимитирующие в каком-либо отношении настоящее изобретение. На первой стадии амина (1) осуществляют присоединение к карбоновой кислоте с помощью присоединяющего агента, такого как карбодиимид и гидроксиазабензотриазол (HOAt) с получением амида. Перед следующим присоединением подходящая защитная группа, такая как трет-бутилоксикарбонил (Воc), может быть удалена с помощью способов, хорошо известных в данной области, в результате чего получают соединение (2). Возможно также избежать применения защитных групп. После этого соединение (2) присоединяют к карбоновой кислоте формулы D-COOH с помощью присоединяющего агента, получая таким образом соединение (3).

Схему II см. в конце опис.

Соединения общей структуры I, содержащие на С-конце гидразин, могут быть получены, как показано на схеме II. Методики, используемые в данном изобретении и иллюстрируемые на схеме II, основаны на пептидных реакциях присоединения, хорошо известных в данной области, и ни в коей мере не должны рассматриваться как лимитирующие изобретение в каком-либо отношении. На первой стадии моно-, ди- или три-замещенные гидразин или гидразон (4) взаимодействует с подходящим образом защищенной аминокислотой с образованием соединения (5), с использованием подходящего присоединяющего реагента, такого как гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида, 1-гидроксибензотриазол или другой присоединяющий агент, известный для применения в реакциях присоединения пептидов, в подходящем растворителе, таком как диметилформамид или дихлорметан. После этого, амид (5) и карбоновую кислоту соединяют с помощью присоединяющего агента, получая таким образом соединение (6). После этого соединение (6) присоединяют к карбоновой кислоте формулы D-COOH с помощью присоединяющего агента, получая таким образом соединение (7). В методике перед следующим присоединением подходящая защитная группа, такая как трет-бутилоксикарбонил (Воc), может быть удалена с помощью способов, хорошо известных в данной области. Возможно также избежать применения защитных групп. Защита и снятие защиты с соответствующих аминокислот могут быть выполнены с помощью способов, хорошо известных в данной области и описанных, например, в T.W. Green (Protective Groups in Organic Synthesis, 2. Ed., John Wiley and Sons, New York, 1991).

Соединения формулы I проявляют повышенную устойчивость к протеолитическому разложению под действием ферментов, потому что они являются неприродными соединениями, в частности, потому что природные амидные связи замещены неприродными миметиками амидных связей. Повышенная устойчивость к протеолитическому разложению соединений изобретения по сравнению с известными пептидами, вызывающими высвобождение гормона, как ожидается, улучшит их биологическую доступность по сравнению с биологической доступностью пептидов, предложенных в предшествующих литературных публикациях.

В указанных выше структурных формулах и в тексте описания следующие термины имеют указанное ниже значение.

Группы C_1-6 -алкил, C_1-6-алкилен, C_1-4-алкил или C_1-4-алкилен, описанные выше, включают алкильные или алкиленовые группы указанной длины либо в линейной, либо в разветвленной, либо в циклической конфигурации. Примерами линейного алкила являются метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил и их соответствующие двухвалентные производные, такие как этилен. Примерами разветвленного алкила являются изопропил, втор-бутил, трет-бутил, изопентил и изогексил и их соответствующие двухвалентные производные, такие как изопропилен. Примером циклического алкила является С_3-6-циклоалкил, такой как циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил и их соответствующие двухвалентные производные, такие как циклопропилен.

C_1-6-Алкоксигруппы, описанные выше, включают алкоксильные группы указанной длины либо в линейной, либо в разветвленной, либо в циклической конфигурации. Примерами линейных алкокси являются метокси, этокси, пропокси, бутокси, пентокси и гексокси. Примерами разветвленных алкокси являются изопропокси, втор-бутокси, трет-бутокси, изопентокси и изогексокси. Примерами циклических алкокси являются циклопропилокси, циклобутилокси, циклопентилокси и циклогексилокси.

C _1-7-Ацильные группы, описанные выше, включают ацильные группы указанной длины либо в линейной, либо в разветвленной, либо в циклической конфигурации. Примерами линейного ацила являются формил, ацетил, пропионил, бутирил, валерил и т.д. Примерами разветвленных ацилов являются изобутирил, изовалерил, пивалоил и т.д. Примерами циклических ацилов являются циклопентилкарбонил, циклогексилкарбонил и т.д.

В контексте настоящего изобретения термин "арил" включает части одновалентного карбоциклического ароматического кольца, являющегося или моноциклическим, бициклическим или полициклическим, например, выбираемым из группы, состоящей из фенила и нафтила, необязательно замещенных одним или более C_1-6-алкилом, C_1-6-алкокси, галогеном, амино или арилом.

В контексте настоящего изобретения термин "арилен" включает части двухвалентного карбоциклического ароматического кольца, являющегося или моноциклическим, бициклическим или полициклическим, например, выбираемым из группы, состоящей из фенилена и нафтилена, необязательно замещенных одним или более C_1-6-алкилом, C_1-6-алкокси, галогеном, амино или арилом.

В контексте настоящего изобретения термин "гетарил" включает части одновалентного гетероциклического ароматического кольца, являющегося или моноциклическим, бициклическим или полициклическим, например, выбираемым из группы, состоящей из пиридила, 1-Н-тетразол-5-ила, тиазолила, имидазолила, индолила, пиримидинила, тиадиазолила, пиразолила, оксазолила, изоксазолила, оксадиазолила, тиенила, хинолинила, пиразинила или изотиазолила, необязательно замещенных одним или более C_1-6-алкилом, C_1-6-алкокси, галогеном, амино или арилом.

В контексте настоящего изобретения термин "гетероциклическая система" включает части ароматического, так же как неароматического кольца, которое может быть или моноциклическим, бициклическим или полициклическим, и содержать в структуре своего кольца по меньшей мере один, например, один, два или три атома(мов) азота и необязательно один или более, например, один или два других гетероатома, например, атомы серы или кислорода. Предпочтительно гетероциклическую систему выбирают из пиразола, пиридазина, триазина, индазола, фталазина, циннолина, пиразолидина, пиразолина, азиридина, дитиазина, пиррола, имидазола, пиразола, изоиндола, индола, индазола, пурина, пирролидина, пирролина, имидазолидина, имидазолина, пиразолидина, пиразолина, пиперидина, пиперазина, индолина, изоиндолина или морфолина.

Термин "галоген" включает хлор (Сl), фтор (F), бром (Вr) и иод (I).

Соединения настоящего изобретения могут содержать один или более асимметричных центров (хиральные атомы углерода), и это означает, что стереоизомеры, в виде разделенных, чистых или частично очищенных стереоизомероа или их рацемических смесей включены в объем изобретения.

Соединения настоящего изобретения могут необязательно находиться в форме фармацевтически приемлемой соли, такой как фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы I, которые включают соли, получаемые взаимодействием соединения формулы I с неорганической или органической кислотой, такой как соляная, бромистоводородная, серная, уксусная, фосфорная, молочная, малеиновая, миндальная, фталевая, лимонная, глутаровая, глюконовая, метансульфокислота, салициловая, янтарная, винная, толуолсульфокислота, трифторуксусная, сульфаминовая или фумаровая кислота, и/или водой.

Соединения формулы I можно вводить в форме фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли или, при возможности, в виде соли щелочного металла или щелочноземельного металла или соли (низший)алкиламмония. Считается, что такие солевые формы обладают активностью приблизительно того же порядка, что и формы в виде свободных оснований.

В другом варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение настоящего изобретения, могут быть получены традиционными способами, как, например, описанные в Remington s Pharmaceutical Sciences, 1985 или в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Edition (1995). Композиции могут находиться в обычных формах, например, капсулах, таблетках, аэрозолях, растворах, суспензиях или составах для местного введения.

Используемым фармацевтическим носителем или разбавителем может быть традиционный твердый или жидкий носитель. Примерами твердых носителей являются лактоза, белая земля, сахароза, циклодекстрин, тальк, желатин, агар, пектин, аравийская камедь, стеарат магния, стеариновая кислота или низшие алкиловые эфиры целлюлозы. Примерами жидких носителей являются очищенная патока, арахисовое масло, оливковое масло, фосфолипиды, жирные кислоты, амины жирных кислот, полиоксиэтилен или вода.

Подобным образом, носитель или разбавитель может включать любой известный в данной области материал, обеспечивающий замедленное выделение, такой как глицерин моностеарат или глицерин дистеарат, отдельно или в смеси с воском.

Если используется твердый носитель для перорального введения, препарат может быть таблетирован, помещен в твердую желатиновую капсулу в форме порошка или лепешки, или может находиться в форме облатки или пастилки. Количество твердого носителя может изменяться в широких пределах, но обычно должно находиться в диапазоне от приблизительно 25 мг до приблизительно 1 г. Если используется жидкий носитель, препарат может быть в форме сиропа, эмульсии, твердой желатиновой капсулы или стерильной жидкости для инъекции, такой как водная или неводная жидкая суспензия или раствор.

Типичная таблетка, которую можно приготовить традиционными способами таблетирования, может включать:

Для назального введения препарат может содержать соединение формулы I, растворенное или суспендированное в жидком носителе, в частности, водном носителе, для нанесения в виде аэрозоля. Носитель может содержать добавки, такие как солюбилизирующие агенты, например, пропиленгликоль, поверхностно-активные вещества, усилители всасывания, такие как лецитин (фосфатидилхолин) или циклодекстрин, или консерванты, такие как парабены.

Как правило, соединения настоящего изобретения готовят в виде единичной дозированной формы, включающей 50-200 мг активного ингредиента вместе с фармацевтически приемлемым носителем на единичную дозу.

Приемлемая доза соединений согласно этому изобретению составляет 0,01-500 мг/день, например от приблизительно 5 до приблизительно 50 мг/день, как например 10 мг на дозу, при введении больным, например, людям, в качестве лекарственного средства.

В следующем варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции в виде единичной дозированной формы, включающей в качестве активного ингредиента от приблизительно 10 до приблизительно 200 мг соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Было показано, что соединения общей формулы I обладают способностью стимулировать выделение гормона роста in vivo. Поэтому эти соединения могут быть использованы для лечения состояний, требующих повышенного уровня гормона роста в плазме крови, таких как имеющих место у людей с дефицитом гормона роста или пожилых людей или у крупного рогатого скота.

Таким образом, в частном варианте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для стимуляции выделения гормона роста из гипофиза, причем эта композиция включает в качестве активного ингредиента соединение общей формулы I или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

В следующем варианте настоящее изобретение относится к способу стимуляции выделения гормона роста из гипофиза, включающему введение нуждающемуся в ней субъекту эффективного количества соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном варианте настоящее изобретение относится к использованию соединения общей формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для стимуляции выделения гормона роста из гипофиза.

Специалистам хорошо известно, насколько разнообразным и множественным является текущее и потенциальное использование гормона роста у человека. Так, соединения общей формулы I можно вводить с целью стимуляции выделения гормона роста из гипофиза, и это должно приводить к эффектам, сходным с эффектами при применении самого гормона роста. Соединения формулы I полезны для стимуляции выделения гормона роста у пожилых; предотвращения катаболических побочных эффектов глюкокортикоидов; предотвращения и/или лечения остеопороза; лечения синдрома хронической усталости (CFS), лечения синдрома острого утомления и потери мышечной массы после хирургической операции, стимуляции иммунной системы, ускорения заживления ран, ускорения восстановления кости при переломах, ускорения заживления осложненных переломов, например остеогенеза с помощью дисктракции, лечения вторичного истощения при переломах, лечения задержки роста, лечения задержки роста вследствие почечной недостаточности, лечения кардиомиопатии, лечения хронического заболевания печени, лечения тромбоцитопении, лечения болезни Крона, лечения неполного синдрома кишечника, лечения хронической обструктивной болезни легких (COPD), лечения осложнений, связанных с трансплантацией, лечения физиологической низкорослости, включая детей с дефицитом гормона роста и низкорослостыо, связанной с хроническим заболеванием, лечения ожирения и связанной с ожирением задержки роста, лечения анорексии, лечения задержки роста, связанной с синдромом Прадера-Вилли и синдромом Тернера; увеличения скорости роста больного с синдромом частичной нечувствительности к гормону роста, ускорения выздоровления и снижения периода госпитализации ожоговых больных; лечения внутриматочной задержки роста, скелетной дисплазии, гиперкортицизма и синдрома Кушинга; индукции пульсаторного выделения гормона роста; восполнения гормона роста у стрессированных больных, лечения остеохондродисплазий, синдрома Нунана, шизофрении, депрессий, болезни Альцгеймера, замедленного заживления ран и психосоциальной депривации, лечения легочной дисфункции и зависимости от вентиляции, лечения сердечной недостаточности или связанной с ней дисфункции сосудов, лечения ослабленной сердечной функции, лечения или предотвращения инфаркта миокарда, снижения кровяного давления, защиты от дисфункции желудочка или предотвращения явлений реперфузии, лечения взрослых при хроническом диализе, ослабления снижения катаболизма белка в результате значительной хирургической операции, снижения кахексии и потери белка из-за хронического заболевания, такого как рак или СПИД; лечения гиперинсулинемии, включая незидиобластоз (гиперплазию панкреатических островков), дополнительного лечения для индукции овуляции; для стимуляции развития тимуса и предотвращения возрастного ослабления функции тимуса, лечения больных с иммуносупрессией, лечения саркопении, лечения связанного со СПИДом истощения, улучшения мышечной силы, подвижности, поддержания толщины кожи, гомеостаза обмена веществ, почечного гомеостаза при болезненной старости, стимуляции остеобластов, ремоделирования кости и роста хряща, регуляции потребления пищи, стимуляции иммунной системы у комнатных животных и лечения расстройств старения у домашних животных, стимуляции роста у крупного рогатого скота и роста шерсти у овец, лечения метаболического синдрома (синдрома X), лечения резистентности к инсулину, включая ИНСД типа II, у млекопитающих, например у человека, улучшения качества сна и коррекции относительного гипосоматотропизма старения из-за сильного увеличения фазы REM сна и снижения латентного периода REM сна и лечения гипотермии. Лечение также включает профилактическое лечение.

Для указанных выше показаний доза должна изменяться в зависимости от используемого соединения формулы I, способа введения и желаемой терапии. Однако для достижения эффективного выделения эндогенного гормона роста больным и животным обычно вводят дозы с уровнем между 0,0001 и 100 мг/кг веса тела в день. Более того, соединения формулы I не имеют или, по существу, не имеют побочных эффектов при введении указанных выше уровней доз, причем такие побочные эффекты, как, например, выделение ЛГ, ФСГ, ТСГ, АКТГ, вазопрессина, окситоцина, кортизола и/или пролактина. Обычно дозированные формы, пригодные для перорального, интраназального, легочного или чрезкожного введения, включают от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг, предпочтительно от приблизительно 0,001 до приблизительно 50 мг соединений формулы I, смешанных с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Фармацевтическая композиция изобретения необязательно может включать соединение формулы I в сочетании с одним или более соединениями, проявляющими различную активность, например, с антибиотиками или с другим фармацевтически активным материалом.

Способ введения может быть любым способом, который эффективно переносит активное соединение к подходящему или желаемому месту действия, таким как пероральный, интраназальный, легочный, чрезкожный или парентеральный, причем предпочтительным является пероральный способ введения.

Помимо фармацевтического применения соединений формулы I, они могут быть пригодны как инструмент для исследований регуляции секреции гормона роста in vitro.

Соединения формулы I могут быть также пригодны как инструмент для оценки способности гипофиза секретировать гормон роста in vivo. Например, в образцах сыворотки, взятых до и после введения этих соединений человеку, может быть определен уровень гормона роста. Сравнение уровня гормона роста в каждом образце сыворотки должно прямо определить способность гипофиза больного секретировать гормон роста.

Соединения формулы I могут быть введены коммерчески важным видам животных для увеличения скорости и степени роста и для увеличения продукции молока.

Дополнительным применением соединений формулы I, регулирующих секрецию гормона роста, является их сочетание с другими регуляторами секреции, такими как GHRH (2 или 6), GHRH и аналогами, гормон роста и его аналоги или соматомедины, включая IGF-1 и IGF-2.

Фармакологические способы

Эффективность и степень активности соединений формулы I по отношению к выделению гормона роста можно оценить in vitro в первичных культурах гипофиза крысы, и такая оценка может быть проведена, как описано ниже.

Выделение клеток гипофиза крысы представляет собой модификацию способа О.Sartor et al., Endocrinology 116, 1985, pp.952-957. Самцов-альбиносов крыс линии Sprague-Dawley (250+/-25 г) получали от М llegaard, Lille Skensved, Германия. Крыс содержали в групповых клетках (по четыре животных на клетку) в помещениях с 12-часовым циклом освещения. Комнатная температура изменялась от 19 до 24°С, а влажность - от 30 до 60%.

Крыс умерщвляли и иссекали гипофизы. Удаляли заднюю и среднюю доли, а оставшуюся ткань немедленно помещали в охлаждаемый льдом буфер для выделения (среда Gey (Gibco 041-04030), содержащий дополнительно 0,25% D-глюкозы, 2% заменимых аминокислот (Gibco 043-01140) и 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Sigma A-4503)). Ткань разрезали на мелкие кусочки и переносили в буфер для выделения, содержащий дополнительно 3,8 мг/мл трипсина (Wortington #3707 TRL-3) и 330 мг/мл ДНКазы (Sigma D-4527). Эту смесь инкубировали при 70 об/мин в течение 35 мин при 37°С в атмосфере O ₂/CO₂ 95/5%. Затем ткань три раза промывали в указанном выше буфере. Затем с помощью стандартной пастеровской пипетки ткань разбивали на одиночные клетки. После диспергирования клетки фильтровали через нейлоновый фильтр (160 мм) для удаления непереваренной ткани. Суспензию клеток 3 раза промывали буфером для выделения, дополнительно содержащим ингибитор трипсина (0,75 мг/мл, Worthington #2829), и, наконец, ресуспендировали в культуральной среде; DMEM (Gibco 041-01965), дополнительно содержащей 25 мМ HEPES (Sigma Н-3375), 4 мМ глутамин (Gibco 043-05030Н), 0,075% бикарбоната натрия (Sigma S-8875), 0,1% заменимой аминокислоты, 2,5% фетальную бычью сыворотку (FCS, Gibco 011-06290), 3% сыворотку лошади (Gibco 034-06050), 10% свежую сыворотку крысы, 1 нМ Т ₃ (Sigma Т-2752) и 40 мг/л дексаметазон (Sigma D-4902) рН 7,3, до плотности 2×10⁵ клеток/мл. Клетки высевали в планшеты для микротитрования (Nunc, Германия), 200 мл на лунку, и культивировали в течение 3 дней при 37°С и 8% СO₂.

Тестирование соединения

После культивирования клетки промывали дважды буфером для стимуляции (сбалансированный солевой раствор Хенкса (Gibco 041-04020), дополнительно содержащий 1% БСА (Sigma А-4503), 0,25% D-глюкозу (Sigma G-5250) и 25 мМ HEPES (Sigma H-3375) рН 7,3) и проинкубировали в течение 1 часа при 37°С. Буфер заменяли 90 мл буфера для стимуляции (37°С). Добавляли десять мл раствора тестируемого соединения и планшеты инкубировали в течение 15 мин при 37°С и 5% СО ₂. Среду декантировали и анализировали на содержание 6Н с помощью тестирующей системы rGH SPA.

Все соединения тестировали при дозах, изменяющихся от 10 пМ до 100 мМ. График зависимости доза-ответ строили с помощью уравнения Хилла (Fig P, Biosoft). Эффективность (максимальное выделение 6R, E _max) выражали в % от Е_mах 6HRP-6. Активность (EC₅₀) определяли как концентрацию, вызывающую полумаксимальную стимуляцию выделения 6R.

Метаболическую стабильность соединений формулы I можно оценить с помощью методики, описанной ниже.

Соединения растворяют в воде при концентрации 1 мг/мл. 25 мл этого раствора добавляют к 175 мл соответствующего раствора фермента (что дает соотношение фермент:субстрат (вес/вес) приблизительно 1:5). Раствор хранят при 37°С в течение ночи, 10 мл порции растворов с различной степенью разрушения анализируют путем сравнения с нулевым образцом с помощью масс-спектрометрии с впрыскиванием струи электрораспылителем (ESMS) с установленным ионным мониторингом молекулярного иона. Если сигнал снижался более чем на 20% по сравнению с нулевым образцом, то оставшуюся часть раствора анализировали с помощью ВЭЖХ и масс-спектрометрии для точного определения степени и места (мест) разрушения.

Для проверки способности разных растворов вызывать разрушения пептидов в тесты по стабильности были включены несколько стандартных пептидов (АКТГ 4-10, ангиотензин 1-14 и глюкагон).

Стандартные пептиды (ангиотензин 1-14, АКТГ 4-10 и глюкагон) были получены от Sigma, МО, США.

Все ферменты (трипсин, химотрипсин, эластаза, аминопептидаза М и карбоксипептидазы Y и В) были получены от Boehringer Mannheim GmbH (Mannheim, Германия).

Смесь ферментов поджелудочной железы: трипсин, химотрипсин и эластаза в 100 мМ бикарбонате аммония рН 8,0 (все в концентрации 0,025 мг/мл).

Смесь карбоксипептидаз: карбоксипептидазы Y и В в 50 мМ ацетате аммония рН 4,5 (все в концентрации 0,025 мг/мл).

Раствор аминопептидазы М: аминопептидаза М (0,025 мг/мл) в 100 мМ бикарбонате аммония рН 8,0.

Масс-спектрометрический анализ проводили с помощью двух различных масс-спектрометров. Sciex API III тройного квадрупольного ЖХ-МС прибора (Sciex instruments, Thomhill, Ontario), снабженного электрораспылительным источником ионов и плазменно-десорбционного прибора Bio-Ion 20 (Bio-Ion Nordic AB, Uppsala, Швеция).

Количественное определение соединений (до и после разрушения) проводили с помощью прибора API III, используя одноионный мониторинг исследуемого молекулярного иона при струйном впрыскивании анализируемого вещества. Ток жидкости (МеОН:вода 1:1) со скоростью 100 мл/мин контролировался блоком ВЭЖХ ABI 140В (Perkin-Elmer Applied Biosystems Divisions, Foster City, CA). Параметры прибора были установлены в соответствии со стандартными операционными условиями и мониторинг SIM проводился с использованием наиболее интенсивного молекулярного иона (в большинстве случаев он соответствовал молекулярному иону с двойным зарядом).

Идентификация продуктов разрушения включала, кроме того, применение плазменно-десорбционной масс-спектрометрии (PDMS) с нанесением образца на мишени, покрытые нитроцеллюлозой, и стандартной настройкой прибора. Точность определяемых при этом масс обычно лучше 0,1%.

Разделение и выделение продуктов разрушения проводили с помощью колонки 4,6×105 мм для обращенно-фазовой ВЭЖХ HY-TACH С-18 (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA) со стандартным разделяющим градиентом ацетонитрил: ТФУК. В качестве системы ВЭЖХ использовали НР1090М (Hewlett-Packard Company, Palo Alto, CA).

Любое новое свойство или комбинация описанных здесь свойств рассматриваются как неотъемлемая часть настоящего изобретения.

Примеры

Способ получения соединений формулы I и содержащих их композиций иллюстрируется далее следующими примерами, которые однако не должны истолковываться как лимитирующие.

Структуры соединений подтверждены либо высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ), ядерным магнитным резонансом (ЯМР, Bruker 400 МГц) или жидкостной хроматографией-масс-спектрометрией (ЖХ-МС). Сдвиги ЯМР (d) представлены в частях на миллион (м.д.) и представлены только отдельные пики. Т.пл. представляет собой точку плавления и выражена в °С. Колоночную хроматографию проводили с применением методики, описанной в W.C.Still et al., J. Org. Chem. 1978, 43, 2923-2925, на силикагеле 60 Merck (Art 9385). Соединения, применяемые в качестве исходных материалов, являются либо известными соединениями, либо соединениями, которые могут быть легко получены с помощью известных способов. Применяемый раствор метанол/аммоний является 10% раствором аммония в метаноле.

ВЭЖХ-анализ:

Способ A1

RP-анализ проводили с помощью УФ детектирования при 214, 254, 276 и 301 нм на колонке с двуокисью кремния 218ТР54 4,6 мм × 250 мм 5m C-18 (The Seperations Group, Hesperia), которую элюировали при скорости 1 мл/мин при 42°С. Колонку уравновешивали 5% ацетонитрилом в буфере, содержащем 0,1 М сульфата аммония, рН которого доводили до 2,5 4 М серной кислотой. После инъектирования образец элюировали градиентом ацетонитрила от 5% до 60% в том же буфере в течение 50 мин.

Способ В1

RP-анализ проводили с помощью УФ детектирования при 214, 254, 276 и 301 нм на колонке с двуокисью кремния 218ТР54 4,6 мм × 250 мм 5m C-18 (The Seperations Group, Hesperia), которую элюировали при скорости 1 мл/мин при 42°С. Колонку уравновешивали 5% (ацетонитрил + 0,1% ТФУК) в водном растворе ТФУК в воде (0,1%). После инъектирования образец элюировали градиентом от 5% до 60% (ацетонитрил + 0,1% ТФУК) в том же водном буфере в течение 50 мин.

ХЖ-МС-анализ:

ХЖ-МС-анализы проводили с помощью РЕ Sciex API 100 LC/MS System с применением Waters® 3 мм × 150 мм 3,5 m C-18 Symmetry колонки и распыления положительных ионов со скоростью потока 20 мл/мин. Колонку элюировали линейным градиентом 5-90% ацетонитрила, 85-0% воды и 10% трифторуксусная кислота (0,1%)/вода в течение 15 минут при скорости потока 1 мл/мин.

Обозначения:

ТСХ: тонкослойная хроматография

ДМСО: диметилсульфоксид

Мин: минуты

ч: часы

Вос: трет-Бутилоксикарбонил

ДМФ: диметилформамид

ТГФ: тетрагидрофуран

EDAC: N-этил-N-диметиламинопропилкарбодиимида гидрохлорид

HOAt: 1-гидрокси-7-азабензотриазол

ДИЭА: диизопропилэтиламин

ТФУК: трифторуксусная кислота

Блоки для синтеза:

N-метилированные аминокислоты, использованные в следующих примерах, были получены, как описано в Can. J. Chem. 1977, 55, 906.

Пример 1

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Стадия А

N-трет-Бутилоксикарбонил-4-бензилпиперидин-4-карбоновая кислота

Этиловый эфир N-трет-бутилоксикарбонил-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты (полученный, как описано Gilligan et al., J. Med. Chem., 1994, 364-370 с использованием в качестве алкилирующего агента бромистого бензила) (11,0 г; 32 ммоль) нагревали с обратным холодильником в течение 7 ч в смеси с этанолом (190 мл) и водной гидроокисью натрия (18% 190 мл). Объем уменьшали до одной трети в вакууме и рН доводили до 3 водным кислым сернокислым натрием. Добавляли воду (300 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (2 × 250 мл). Объединенные органические фазы упаривали с получением 8,6 г N-трет-бутилоксикарбонил-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты.

¹H-ЯМР: d (CDCl₃) 1,45 (с, 9Н); 1,5 (м(уш.); 2Н) ; 2,08 (м(уш.); 2Н); 2,88 (м(уш.); 2Н); 2,89 (с, 2Н); 3,95 (м(уш.); 2Н); 7,09-7,30 (5 аром. Н).

Стадия В

трет-Бутиловый эфир 4-бензил-4-метилкарбамоилпиперидин-1- карбоновой кислоты

N-трет-Бутилоксикарбонил-4-бензилпиперидин-4-карбоновую кислоту (3,0 г; 9,0 ммоль) растворяли в метиленхлориде (25 мл) и добавляли EDAC (1,8 г; 9,0 ммоль) и HOAt (1,3 г; 9,0 ммоль). Смесь перемешивали в течение 15 мин, затем добавляли метиламин (33% в этаноле; 2,3 мл; 18 ммоль) и ДИЭА (1,6 мл; 9,0 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли метиленхлорид (100 мл) и смесь промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл) и водным раствором кислого сернокислого натрия (10%, 50 мл), сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на двуокиси кремния (90 г) с использованием в качестве элюента смеси водный аммоний/этанол/метиленхлорид (1:7:92) с получением 2,8 г трет-бутилового эфира 4-бензил-4-метилкарбамоилпиперидин-1-карбоновой кислоты.

¹Н-ЯМР: d (CDCl₃) 1,44 (с, 9Н); 1,55 (м(уш.); 2Н); 1,98 (м(уш.); 2Н); 2,70 (д, 3Н); 2,98 (м(уш.); 2Н); 2,89 (с, 2Н); 3,87 (м(уш.); 2Н); 5,15 (кв (уш.); 1Н); 7,01-7,32 (5 аром. Н).

Стадия С

Метиламид 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Трет-бутиловый эфир 4-бензил-4-метилкарбамоилпиперидин-1-карбоновой кислоты (2,8 г) растворяли в смеси ТФУК и метиленхлорида и перемешивали в течение 40 мин. Растворитель удаляли в вакууме, остаток растворяли в воде (30 мл) и рН доводили до 13 с помощью водной гидроокиси натрия (1 н). Водную фазу экстрагировали метиленхлоридом (3×75 мл), объединенные органические фазы сушили (MgSO₄) и упаривали в вакууме с получением 1,50 г метиламида 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты.

¹H-ЯМР: d (CDCl₃) 1,80 (тд; 2Н); 2,14 (д(уш.), 2Н); 2,70 (д, 3Н); 2,81 (с, 2Н); 2,85 (дт; 2Н); 3,21 (дт, 2Н); 5,25 (т, 1Н); 7,00-7,35 (5 аром. Н).

Стадия D

Метиламид 4-бензил-1-((2R)-2-метиламино-3-(2-нафтил)про-пионил)пиперидин-4-карбоновой кислоты

(2R)-2-трет-Бутилоксикарбамоиламино-N-метил-3-(2-нафтил)-пропионовую кислоту (709 мг; 2,15 ммоль), HOAt (293 мг, 2,25 ммоль) и EDAC (412 мг; 2,25 ммоль) растворяли в метиленхлориде (5 мл) и перемешивали в течение 15 мин. Добавляли метиламид 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты (500 мг; 2,25 ммоль) и ДЭА (0,35 мл) и смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли метиленхлорид (30 мл) и смесь промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл) и водным раствором кислого сернокислого натрия (10%, 20 мл), сушили (MgSO ₄) и упаривали в вакууме. Остаток хроматографировали на двуокиси кремния (40 г) с использованием в качестве элюента этилацетата с получением 810 мг метиламида 4-бензил-1-((2R)-2-(N-метил-трет-бутилоксикарбониламино)-3-(2-нафтил)пропионил)пиперидин-4-карбоновой кислоты, который растворяли в ТФУК/метиленхлориде (8+8 мл) и перемешивали в течение 40 мин при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, остаток нейтрализовывали насыщенным раствором бикарбоната натрия и экстрагировали этилацетатом (50 мл). Органическую фазу сушили (MgSO₄) и упаривали с получением 729 мг метиламида 4-бензил-1-((2R)-2-метиламино-3-(2-нафтил)пропионил)пиперидин-4-карбоновой кислоты.

Стадия Е

Метиламид 4-бензил-1-((2R)-2-метиламино-3-(2-нафтил)про-пионил)пиперидин-4-карбоновой кислоты (360 мг; 0,82 ммоль) конъюгировали с (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5-метил-2-гексеновой кислотой с использованием той же методики конъюгации, что и на стадии D. Удаление N-концевой Воc группы проводили как на стадии D, но при -10°С. Сырой продукт очищали на RP-18-Seppak® (5 г; Waters) с использованием градиента от 0,1% ТФУК в воде/ацетонитриле 100/0 до 0,1% ТФУК в 60/40 воде/ацетонитриле с получением 306 мг соединения, указанного в заголовке, в виде трифторацетата.

¹Н-ЯМР: δ (МеОН) (выбранные пики для основного ротамера) 1,30 (с, 3Н); 1,31 (а, 3Н); 2,10 (AB-syst, 2H); 2,55 (с, 3Н); 5,81 (м, 1Н).

ВЭЖХ: R_t = 31,88 мин (А1)

R_t = 33,30 мин (B1)

ESMS: m/z: 569,4 (M+H)⁺.

Пример 2

Метиламид 1-{(1R)-2-[N-((2E)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Соединение получали как в примере 1, используя (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5,3-диметил-2-гексеновую кислоту вместо (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5-метил-2-гексеновой кислоты на стадии Е.

ВЭЖХ: R_t = 33,70 мин (А1)

R_t = 34,22 мин (B1)

ESMS: m/z: 583,4 (M+H)⁺.

Пример 3

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Соединение получали как в примере 1, используя (2R)-2-(трет-бутилоксикарбониламино)-N-метил-3-(4-бифенил)пропионовую кислоту вместо (2R)-2-(трет-бутилоксикарбониламино)-N-метил-3-(2-нафтил)пропионовой кислоты на стадии D.

ВЭЖХ: R_t = 34,53 мин (А1)

R_t = 36,15 мин (B1)

ESMS: m/z: 595,4 (М+Н)⁺.

Пример 4

Метиламид 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Соединение получали как в примере 1, используя (2R)-2-(трет-бутилоксикарбониламино)-N-метил-3-(4-бифенилил)пропионовую кислоту вместо (2R)-2-(трет-бутилоксикарбониламино)-N-метил-3-(2-нафтил)пропионовой кислоты на стадии D и используя (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5,3-диметил-2-гексеновую кислоту вместо (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5-метил-2-гексеновой кислоты на стадии Е.

ВЭЖХ: R_t = 35,15 мин (А1)

R_t = 36,83 мин (B1)

ESMS: m/z: 609,4 (M+H)⁺.

Пример 5

Метиламид 1-((2R)-2-{N-[(2E)-4-(1-аминоциклобутил)бут-2-еноил]-N-метиламино}-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Соединение получали как в примере 1, используя (2R)-2-трет-бутилоксикарбониламино-N-метил-3-(4-бифенилил)пропионовую кислоту вместо (2R)-2-трет-бутилоксикарбониламино-N-метил-3-(2-нафтил)пропионовой кислоты на стадии D и используя (2Е)-4-(1-(трет-бутилоксикарбониламино)циклобутил)бут-2-еновую кислоту вместо (2Е)-5-(трет-бутилоксикарбониламино)-5-метил-2-гексеновой кислоты на стадии Е.

ВЭЖХ: R_t = 35,15 мин (А1)

R_t = 36,68 мин (B1)

ESMS: m/z: 607,4 (M+H)⁺.

Пример 6

2-Амино-N-[(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-((lH-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамид

трет-Бутиловый эфир 4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразино-карбонил)пиперидин-1-карбоновой кислоты

К раствору 1-трет-бутилового эфира 4-бензилпиперидин-1,4-дикарбоновой кислоты (0,75 г, 2,35 ммоль) (полученного как описано Gilligan et al., J. Med. Chem., 1994, 364-370) в метиленхлориде (10 мл) добавляли 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,32 мг, 2,35 ммоль) и солянокислую соль 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (0,45 г, 2,35 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем добавляли N’,N’-диметилгидразин (0,27 мл, 3,53 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,52 мл, 3,06 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 дней. Добавляли метиленхлорид (100 мл), смесь промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл), водой (20 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученное масло хроматографировали на двуокиси кремния (40 г) с помощью гептана/этилацетата (1:2) с получением 0,76 г трет-бутилового эфира 4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде бесцветного масла.

ВЭЖХ: R_t = 9,66 мин (Н8)

ЖХ-МС: R_t = 9,29 мин, m/z: 362,0 (m+1).

N,N -Диметилгидразид 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

К раствору трет-бутилового эфира 4-бензил-4-(N’,N’-диме-тилгидразинокарбонил)пиперидин-1-карбоновой кислоты (0,76 г, 2,02 ммоль) в метиленхлориде (2 мл) прл 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл) и смесь перемешивали в течение 60 мин. Реакцию останавливали этанолом (20 мл), смесь концентрировали в вакууме и трижды очищали метиленхлоридом с получением N,N -диметилгидразида 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты с количественным выходом.

ЖХ-МС: R_t = 5,64 мин, m/z = 262,0 (m+1).

трет-Бутиловый эфир (2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидрази-нокарбонил)пиперидин-1-ил)-1-(lH-индол-3-илметил)-2-оксоэтил)карбаминовой кислоты

К раствору 2-трет-бутоксикарбониламино-3-(lH-индол-3-ил)-пропионовой кислоты (0,37 г, 1,2 ммоль) в метиленхлориде (15 мл) и диметилформамиде (5 мл) добавляли 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,16 мг, 1,20 ммоль) и солянокислую соль 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (0,23 г, 1,20 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем добавляли N’,N’-диметилгидразид 4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты (0,26 г, 1,0 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,69 мл, 4,0 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли метиленхлорид (100 мл), смесь промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл), водой (20 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученное масло хроматографировали на двуокиси кремния (40 г) с помощью метиленхлорида/(10% аммония в метаноле) (9:1) с получением 0,43 г трет-бутилового эфира (2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразино-карбонил)пиперидин-1-ил)-1-(lH-индол-3-илметил)-2-оксоэтил)карбаминовой кислоты в виде бесцветного масла.

ВЭЖХ: R_t = 10,45 мин (Н8)

ЖХ-МС: R_t = 9,92 мин, m/z: 548,2 (m+1).

N’,N’-диметилгидразид 1-(2-амино-3-((lH-индол-3-ил)пропионил)-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

К раствору трет-бутилового эфира (2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил)-1-(lH-индол-3-илметил)-2-оксоэтил)карбаминовой кислоты (0,40 г, 0,73 ммоль) в метиленхлориде (3 мл) при 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Реакцию останавливали этанолом (20 мл), смесь концентрировали в вакууме и трижды очищали метиленхлоридом с получением 0,63 г N’,N’-диметилгидразида 1-(2-амино-3-((1H-индол-3-ил)пропионил)-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты в виде бесцветного масла.

ВЭЖХ: R_t = 7,52 мин (Н8)

ЖХ-МС: R_t = 7,61 мин, m/z = 448,4 (m+l).

трет-Бутиловый эфир (1-(2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил)-1-(lH-индол-3-илметил)-2-оксо-этилкарбамоил)-1-метилэтил)карбаминовой кислоты

К раствору трет-бутилоксикарбониламино-2-метилпропионовой кислоты (0,18 г, 0,88 ммоль) в метиленхлориде (10 мл) добавляли 1-гидрокси-7-азабензотриазол (0,12 мг, 0,88 ммоль) и солянокислую соль 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (0,12 г, 0,88 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем добавляли N’,N’-диметилгидразид 1-(2-амино-3-((1Н-индол-3-ил)пропионил)-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты (0,46 г, 0,73 ммоль) и диизопропилэтиламин (0,50 мл, 2,92 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли метиленхлорид (100 мл), смесь промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (20 мл), водой (20 мл), сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Полученное масло хроматографировали на двуокиси кремния (40 г) с помощью метиленхлорида/(10% аммония в метаноле) (9:1) с получением 0,31 г трет-бутилового эфира (1-(2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидра-зинокарбонил)пиперидин-1-ил)-1-(1H-индол-3-илметил)-2-оксо-этилкарбамоил)-1-метилэтил)карбаминовой кислоты в виде бесцветного масла.

ВЭЖХ: R_t = 10,25 мин (Н8)

ЖХ-МС: R_t = 9,66 мин, m/z = 663,2 (m+1).

2-Амино-N-[(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((lH-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамид

К раствору трет-бутилового эфира (1-(2-(4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил)-1-(lH-индол-3-илметил)-2-оксоэтилкарбамоил)-1-метилэтил)карбаминовой кислоты (0,29 г, 0,46 ммоль) в метиленхлориде (3 мл) при 0°С добавляли трифторуксусную кислоту (3 мл) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Реакцию останавливали этанолом (20 мл), смесь концентрировали в вакууме и трижды очищали метиленхлоридом с получением 0,25 г 2-амино-N-[(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамида в виде белого аморфного порошка.

ВЭЖХ: R_t = 24,56 мин (А1), R_t = 24,95 мин (В1), R_t = 7,73 мин (Н8).

ЖХ-МС: R_t = 7,74 мин, m/z = 533,4 (m+1).

Пример 7

2-Aмино-N-[(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-бензилоксиметил-2-оксо-этил)-2-метил-пропионамид

Это соединение получали, используя методику примера 6.

ESMS: m/z: 524,4 (М+Н)⁺

Пример 8

2-Амино-N-[(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((lH-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамид

Это соединение получали, используя методику примера 6.

ESMS: m/z: 533,4 (М+Н)⁺

ВЭЖХ: R_t : 27,60 мин (А1)

ВЭЖХ: R_t: 26,84 мин (В1)

Пример 9

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 12,11 мин, m/z: 610,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 42,075 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 44,383 мин (В1)

Пример 10

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 12,36 мин, m/z: 624,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 42,785 мин (А1)

ВЭЖХ: R_t = 45,148 мин (В1)

Пример 11

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 11,92 мин, m/z: 584,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 39,893 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 42,046 мин (В1)

Пример 12

Этиловый эфир 1-{(2R)-2-[N-((2E)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 12,21 мин, m/z: 598,2 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 40,541 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 42,780 мин (В1)

Пример 13

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-((2E)-5-амино-5-метилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 10,07 мин, m/z: 559,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 35,585 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 37,441 мин (В1)

Пример 14

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 10,42 мин, m/z: 573,2 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 36,680 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 38,563 мин (В1)

Пример 15

Этиловый эфир (3S)-1-[(2R)-2-(3-(аминометил)бензоиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 10,24 мин, m/z: 567,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 36,118 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 38,052 мин (В1)

Пример 16

N-{(1R)-2-[4-Бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил]-N-метиламид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 8,82 мин, m/z: 598,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 30,858 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 31,198 мин (В1)

Пример 17

N-[(1R)-2-[3-Бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]амид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

ESMS: m/z: 573,2 (М+Н)⁺

Пример 18

N-{(1R)-2-[3-Бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-N-метил-амид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

ESMS: m/z: 598,4 (М+Н)⁺

Пример 19

{(1R)-2-[3-Бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}амид (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

ЖХ-МС: R_t = 8,77 мин, m/z: 564,2 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 29,829 мин (A1)

ВЭЖХ: R_t = 29,250 мин (В1)

Пример 20

2-Амино-N-{2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-((2-нафтил)метил)-2-оксо-этил}-2-метил-пропионамид

ЖХ-МС: R_t = 4,77 мин, m/z: 544,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 30,900/31,586 мин (A1)

ВЭЖХ: R _t = 30,188/30,727 мин (В1)

Пример 21

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-((бифенил-4-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

ЖХ-МС: R_t = 4,98 мин, m/z: 570,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 33,839/34,313 мин (А1)

ВЭЖХ: R _t = 33,297/33,640 мин (B1)

Пример 22

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

ЖХ-МС: R_t = 4,32 мин, m/z: 533,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 25,946/27,231 мин (А1)

ВЭЖХ: R _t = 25,822/26,685 мин (B1)

Пример 23

2-Амино-N-{2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}-2-метил-пропионамид

ЖХ-МС: R_t = 4,33/4,75 мин; m/z: 510,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 30,737/30,945 (A1)

ВЭЖХ: R _t = 26,809/27,307 (B1)

Пример 24

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокар-бонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

ЖХ-МС: R_t = 4,25/5,27 мин; m/z: 519,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R_t = 24,994 мин (A1)

ВЭЖХ: R _t = 25,742 мин (B1)

Пример 25

(Пирролидин-1-ил)амид 1-[(2R)-2-(2-амино-2-метилпропиониламино)-3-(1-Н-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

Смесь диастереомеров

Диастереомер I:

ЖХ-МС: R_t = 4,40 мин; m/z: 559,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R _t = 26,04 мин (А1)

ВЭЖХ: R_t = 25,79 мин (В1)

Диастереомер II:

ВЭЖХ: R_t = 27,38 мин (А1)

Пример 26

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N,N’,N’-триметилгидразино-карбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамид

Смесь диастереомеров

Диастереомер I:

ЖХ-МС: R_t = 5,07 мин; m/z: 547,4 (М+Н)

ВЭЖХ: R _t = 32,16 мин (А1)

Диастереомер II:

ЖХ-МС: R_t = 5,24 мин; m/z: 547,4 (М+Н) ВЭЖХ: R_t = 33,60 мин (Al) Соединения примеров 9-26 получали, используя методики примеров 1-6.

Пример 27

Данные in vitro по стимулирующей секрецию гормона роста активности соединений Примеров 1-26.

Данные представлены в виде величин EC ₅₀ и E_max и получены по методикам, описанным ранее в настоящем описании изобретения, в сравнении с известным пептидным стимулятором секреции гормона роста GHRP-6. Полученные данные представлены в таблице.

Данные, представленные в таблице, с очевидностью доказывают, что все соединения настоящего изобретения обладают значительной активностью в отношении стимуляции секреции гормона роста и что эффективность ряда соединений (включая соединения примеров 3, 5, 22 и 25), по меньшей мере, приблизительно равна или даже больше, чем активность GHRP-6.

Формула изобретения

1. Производное пиперидинкарбоновой кислоты, выбранное из следующих соединений:

Метиламида 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламида 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламида 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламида 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Метиламида 1-((2R)-2-{N-[(2E)-4-(1-аминоциклобутил)бут-2-еноил]-N-метиламино}-3-(бифенил-4-ил)пропионил)-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

2-Амино-N-[(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]-2-метилпропионамида

2-Амино-N-{(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-бензилоксиметил-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

2-Амино-N-[(1R)-2-[(3R)-3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксо-этил]-2-метилпропионамида

Этилового эфира 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этилового эфира 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(бифенил-4-ил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этилового эфира 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этилового эфира 1-{(2R)-2-[N-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноил)-N-метиламино]-3-(2-нафтил)пропионил}-4-бензилпиперидин-4-карбоновой кислоты

Этилового эфира (3S)-1-[(2R)-2-((2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

Этилового эфира (3S)-1-[(2R)-2-((2Е)-5-амино-3,5-диметилгекс-2-еноиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

Этилового эфира (3S)-1-[(2R)-2-(3-(аминометил)бензоиламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

N-{(1R)-2-[4-бензил-4-(N’,n’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-N-метиламида (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

N-[(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил]амида (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)-пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-N-метиламида (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}амида (2Е)-5-амино-5-метилгекс-2-еновой кислоты

2-Амино-N-{2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((2-нафтил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((бифенил-4-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

2-Aмино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’,N’-диметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

2-Aмино-N-{2-[3-бензил-3-(N’-метилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-(бензилоксиметил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

2-Aмино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N’-метилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

(Пирролидин-1-ил)амида 1-[(2R)-2-(2-амино-2-метилпропиониламино)-3-(1H-индол-3-ил)пропионил]-3-бензилпиперидин-3-карбоновой кислоты

2-Амино-N-{(1R)-2-[3-бензил-3-(N,N’,N’-триметилгидразинокарбонил)пиперидин-1-ил]-1-((1H-индол-3-ил)метил)-2-оксоэтил}-2-метилпропионамида

и их фармацевтически приемлемых солей.

2. Фармацевтическая композиция, стимулирующая секрецию гормона роста, включающая в качестве активного ингредиента соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль совместно с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

3. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающие стимулирующей секрецию гормона роста гипофизом млекопитающего активностью.

4. Способ стимуляции секреции гипофизом млекопитающего гормона роста, включающий введение указанному млекопитающему эффективного количества соединения по п.1, или его фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции по п.2.