Способ определения уровня неспецифической резистентности организма

 

Изобретение относится к области медицины, но может быть использовано и в ветеринарии для определения уровня неспецифической резистентности организма (УНРО) как человека, так и животного. Определяют содержание тиоловых (-SH) и дисульфидных (-SS-) групп в исследуемом субстрате крови и их тиол-дисульфидное соотношение (ТДС). В качестве исследуемого субстрата используют одновременно цельную кровь и клеточный концентрат крови. Определяют ТДС в цельной крови и ТДС в клеточном концентрате крови многократно в течение не менее 24 часов культивации с интервалом 30-180 минут. Строят графики зависимостей показателей ТДС от времени культивации. УНРО определяют по отношению площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в цельной крови к площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в клеточном концентрате крови. Способ позволяет повысить точность определения уровня неспецифической резистентности организма.

Изобретение относится к медицине (но может быть использовано и в ветеринарии) для системной оценки уровня неспецифической резистентности живого организма как человека, так и животного с различными заболеваниями (инфекционно-воспалительными, неинфекционными, онкологическими, эндокринными и др.).

Известен способ интегральной оценки здоровья человека (см. Патент РФ №2119768, МПК 6 А 61 В 10/00, опубликованный 10.10.98 г., Бюллетень №28) путем обследования человека по каждому элементу системы “здоровье”, причем в число элементов этой системы, кроме показателей здоровья, отражающих жизнедеятельность человека, включают факторы среды и общества, воздействующие на человека (факторы здоровья), оценку каждого элемента системы “здоровье”, в том числе и неспецифической резистентности организма (НРО), производят на основе конкретных количественных критериев в фактических или условных (балльных) единицах измерения, систему “здоровье” количественно дифференцируют по шести уровням здоровья, далее определяют суммарный уровень здоровья, затем прогностически оценивают динамику всей системы “здоровье” и отдельных ее элементов; для оценки уровня неспецифической резистентности и иммунной защиты осуществляют количественную оценку содержания в крови различных популяций лимфоцитов (Т-, В-, О-лимфоциты) и иммуноглобулинов (класса G, M, A).

Известен также количественный способ комплексной оценки физической работоспособности человека (И.В. Аулик. Определение физической работоспособности человека в клинике и спорте. 2-е изд. - М.: Медицина, 1990, с.17), который основан на оценке количественных характеристик основных физиологических систем организма без рассмотрения факторов среды и общества.

Недостатками описанных способов является многочисленность проводимых качественно-количественных оценок не только психофизиологической функции организма человека, но и факторов окружающей среды, практической сложностью их применения в условиях клинической медицины, недостаточная оценка факторов, относящихся к неспецифической резистентности и иммунной защите организма.

Наиболее близким по медицинской сути к заявляемому является способ оценки НРО (В.В. Соколовский. Тиол-дисульфидное соотношение крови как показатель состояния неспецифической резистентности организма. Учебное пособие. СПб, 1996, 30 с.), согласно которому определяют содержание тиоловых и дисульфидных групп в исследуемом субстрате крови и высчитывают показатель их количественного соотношения (тиол-дисульфидное соотношение - ТДС).

Основными недостатками этого способа являются значительные флуктуации ТДС в течение небольшого промежутка времени, большой разброс в показателях ТДС при использовании различных лабораторных методов исследования, что зависит от вида применяющихся селективных электродов (платиновый, серебряный, ртутный и др.) при использовании метода амперометрического титрования или при других методах (спектрофотометрия, хроматография и др.), а также отсутствие разработанных критериев корреляции между степенью изменения ТДС и тяжестью патологического состояния организма. Кроме того, не установлено, какая составляющая крови (клеточные элементы, сыворотка, плазма; белковая, безбелковая части субстрата и т.п.) или цельная кровь являются наиболее подходящим субстратом для адекватной оценки ТДС в качестве критерия уровня НРО (УНРО).

В основу изобретения поставлена задача такого усовершенствования способа оценки НРО, при котором за счет использования в качестве исследуемого субстрата одновременно цельной крови и ее клеточного концентрата, а также многократного динамического мониторинга ТДС обеспечивается возможность наиболее точного и качественного определения конкретного УНРО и оценки степени его изменения при различных патологических состояниях.

Задача достигается тем, что в способе оценки уровня неспецифической резистентности организма, включающем определение содержания тиоловых и дисульфидных групп в исследуемом субстрате крови и их количественного соотношения (ТДС), после чего определяют состояние НРО, согласно изобретению в качестве исследуемого субстрата используют одновременно цельную кровь и клеточный концентрат крови, определяют ТДС в цельной крови и ТДС в клеточном концентрате крови многократно в течение не менее 24 часов культивации с интервалом 30-180 минут, затем строят графики зависимостей показателей ТДС от времени культивации, а УНРО определяют по отношению площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в цельной крови к площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в клеточном концентрате крови.

Причинно-следственная связь между предлагаемой совокупностью признаков и достигаемыми медицинскими результатами состоит в следующем.

Многочисленными экспериментальными и клиническими исследованиями показано, что обратимая тиол-дисульфидная система имеет важнейшее значение в регуляции окислительно-восстановительного равновесия в клетках и тканях организма человека; с нею связаны биохимические механизмы практически всех физиологических процессов, в том числе клеточного деления и роста, интенсивности метаболизма и ферментативной активности, регуляции проницаемости биологических мембран, мышечного сокращения, функционирования гормональных и нейрорецепторов, а также функционирования различных звеньев иммунной системы и неспецифической защиты организма. В клинико-экспериментальных исследованиях у людей и животных флуктуации ТДС имели четкую связь как с развитием физиологической адаптации к повреждающим факторам (шум, вибрация, лазерное и электромагнитное излучение, токсические вещества, стресс), так и в динамике патологических процессов (черепно-мозговая травма и стволовые вагоинсулярные пароксизмы, ишемическая болезнь сердца и инфаркт миокарда, токсикозы беременности и септические состояния). Установлено, что определение ТДС в крови людей и животных может применяться для выявления предпатологических состояний, ранней диагностики заболеваний, а также мониторинга in vivo состояния неспецифической резистентности макроорганизма и прогноза течения заболевания.

Лабораторные методы определения содержания тиоловых и дисульфидных групп включают амперометрическое титрование с нитратом серебра, спектрофотометрический метод с реактивом Эллмана, хроматографию и др. Субстратом для исследования могут служить кровь и иные биологические жидкости и ткани, но наиболее часто ТДС определяется в крови или ее компонентах (клеточная фракция, плазма). Однако из-за очень высокой неустойчивости (флуктуации) и чувствительности показателя ТДС к влияниям собственных биоритмов организма и факторов окружающей среды (температура, естественный фон солнечного излучения, электромагнитные колебания, радиоактивное излучение и др.) и вследствие этого плохой воспроизводимости показателя ТДС возникает потребность в разработке более стабильного и информативного показателя при оценке состояния НРО. Им может служить, по нашему мнению, показатель соотношения ТДС, определяемый одновременно в цельной крови и клеточном концентрате крови, повторно на протяжении определенного промежутка времени (т.е. в динамике). Известно, что клетки крови в значительной степени отражают состояние основных биохимических процессов и неспецифической резистентности на уровне макроорганизма. Внеклеточная часть крови заключает в себе систему морфофункциональных гуморальных факторов неспецифической резистентности. Предлагаемое соотношение динамики ТДС в цельной крови по отношению к ТДС в клеточном концентрате крови способно, по нашему мнению, более полно и качественно отражать адаптационные возможности, уровень гомеостаза и неспецифической резистентности макроорганизма с учетом этой структурной двухкомпонентности системы крови, следствием чего и является повышение информативности оценки состояния НРО.

Применение предлагаемого способа включает следующую последовательность действий, реализованную в приведенных ниже конкретных примерах реализации предлагаемого способа.

У пациента утром натощак производили забор крови из локтевой вены в объеме 3,0 мл, смешивали ее с антикоагулянтом 5% раствором цитрата натрия (в объеме 0,3 мл). Затем нитратную кровь разделяли в 2 пробирки на равные части, после чего пробирки с кровью ставили в термостат (при 37°С) на 1 час для оседания клеточной массы. После оседания клеток крови в одной из них осторожно убирали надосадочную жидкую часть и оставшийся клеточный концентрат использовали для дальнейшего исследования (контрольная проба). Одновременно использовали цельную кровь из другой пробирки, которая служила основной пробой для исследования. Методом амперометрического титрования с нитратом серебра определяли одновременно исходное ТДС в лизате цельной крови и в лизате клеточного концентрата крови. Затем обе пробирки культивировали в термостате, а через 30 минут, 1 час, 3 часа и 24 часа культивации повторно определяли ТДС в основной и контрольной пробах. После этого строили 2 графика зависимости ТДС от времени культивации (основной и контрольный) и проводили вычисление показателя соотношения площадей под графиками в качестве коэффициента ТДС (КТДС):

КТДС=“ТДС×время культивации” в К/″ТДС×время культивации” в кк,

где К - кровь, КК - клеточный концентрат крови.

Данный показатель обладает высокой воспроизводимостью и не зависит от метода его определения (амперометрическое титрование с нитратом серебра, в том числе на различных селективных электродах, или при спектрофотометрическом определении).

Такое исследование проведено у 352 пациентов. Полученные результаты показали, что показатель КТДС имеет высокую корреляцию (r=0,91) с оценкой клинического состояния пациента или динамикой течения заболевания. Так, у группы практически здоровых людей (доноров крови) показатели КТДС колебались в пределах 1,0-0,9 (условных единиц), что отражает нормальный УНРО. У большинства пациентов с различной степенью нарушения состояния здоровья показатели КТДС варьировали в пределах от 0,89 до 0,30 (у.е.). Общепринятое разделение тяжести состояния больного на 3 степени (общее состояние “удовлетворительное”, “средней тяжести”, “тяжелое”) коррелировало с градациями уменьшения КТДС I степени (КТДС в пределах 0,89-0,70 у.е.), II степени (КТДС в пределах 0,69-0,50 у.е.) и III степени (КТДС в пределах 0,40-0,30 у.е.) соответственно. Для более детальной оценки УНРО использовано выделение 2 подгрупп (А и Б) при каждой степени изменения данного показателя, что позволило выделить 6 уровней НРО, соответствовавших следующим диапазонам показателя КТДС: 0,89-0,80 соответствовало снижению УНРО легкой (I А) степени, 0,79-0,70 - умеренному (I Б степени) снижению, 0,69-0,60 - значительному (II А степени) снижению, 0,59-0,50 - выраженному (II Б степени) снижению, 0,49-0,40 - резко выраженному (III А степени) снижению и 0,39-0,3 - критическому (III Б степени) снижению.

Таким образом, нами предлагается модификация общепризнанного показателя состояния неспецифической резистентности организма (ТДС) как в качественном (определение КТДС), так и в количественном аспекте (градация по степеням изменений как основа для определения УНРО).

Пример 1.

Больная С., 67 лет. В октябре 2002 г. в КБ №17 г.Киева установлен диагноз: аденокарцинома верхней и средней долей правого легкого с метастазами в лимфоузлы средостения и верхнюю долю левого легкого, метастатический экссудативный плеврит справа (с наличием злокачественных клеток в экссудате); IV стадия, IV клиническая группа. Общее состояние пациентки оценивалось как среднетяжелое, КТДС=0,78 (снижение I Б степени, т.е. снижение умеренное). Затем больная получала химиоиммунотерапию (цикл полихимиотерапии чередовался с последующей иммунотерапией) ежемесячно 4 курса, эффект лечения оценен как “стабилизация болезни”; при этом показатели КТДС (ежемесячно) колебались примерно на одном уровне: 0,72 (снижение I Б степени) - в ноябре 2002 г., 0,70 - в декабре 2002 г., 0,76 - в январе 2003 г. Затем наступило ухудшение состояния с клинико-рентгенологическими признаками прогрессирования опухолевого процесса, КТДС=0,42 (февраль 2003 г., снижение III А степени, т.е. снижение резко выраженное). Однако с помощью очередного курса химиоиммунотерапии, проведенной с индивидуальным выбором лекарственных препаратов (по методике предварительного скрининга с кровью in vitro) удалось достичь частичной регрессии опухоли и метастазов, показатель КТДС вновь повысился до 0,71 (март 2003 г., снижение I Б степени), а затем в апреле 2003 г. КТДС=0,77 (наблюдается дальнейшая регрессия опухоли). В мае 2003 г. после 6-го курса химиоиммунотерапии состояние пациентки было среднетяжелым, наблюдалась стабилизация опухолевой болезни, КТДС=0,61 (снижение II А степени, т.е. снижение значительное на фоне умеренной анемии, Нb=98 г/л). После гемостимулирующей терапии (препараты железа, рекомбинантный эритропоэтин, витамин С, группы В, фолиевая кислота) общее состояние и показатели кроветворения улучшились (Нb=122 г/л), показатель КТДС (июнь 2003 г.) составил 0,73 (снижение I Б степени, т.е. умеренное снижение). У пациентки достигнута ремиссия опухолевой болезни с частичной регрессией аденокарциномы в обоих легких и лимфоузлах средостения, полной ликвидацией метастатического плеврита; общее состояние больной оценивается как удовлетворительное, качество жизни хорошее.

Пример 2. Пациентка Т., 70 лет. В октябре 2002 г. в КБ №17 г.Киева диагностирован рак средней доли правого легкого с метастазами в левое легкое, IV стадия, IV клиническая группа. Общее состояние больной оценивалось как средней тяжести, КТДС=0,75 (снижение I Б степени, т.е. снижение умеренное). Затем в октябре-декабре 2002 г. пациентка ежемесячно получала по курсу (1-й, 2-й, 3-й курсы) индивидуализированной (на основе скрининга лекарственных препаратов по крови in vitro) химиоиммунотерапии, состояние было стабильным, относительно удовлетворительным, наблюдалась частичная регрессия опухоли в легких. Показатели КТДС также находились на одном уровне: 0,87 (снижение I А степени, т.е. легкое снижение) - в ноябре, 0,85 (снижение I А степени) - в декабре 2002 г. В январе-марте 2003 г. больная продолжала получать индивидуализированную химиоиммунотерапию (4-й, 5-й, 6-й курсы), под влиянием которой опухолевая болезнь стабилизировалась, общее состояние пациентки было относительно удовлетворительным. Показатели КТДС за это время также находились на стабильном уровне: 0,87 (снижение I А степени, январь 2003 г.), 0,81 (снижение I А степени, февраль 2003 г.), 0,86 (снижение I А степени, март 2003 г.). В апреле 2003 г. у пациентки наблюдалось обострение ишемической болезни сердца с экстрасистолической аритмией. Общее состояние больной страдало незначительно, оставалось относительно удовлетворительным, КТДС=0,78 (снижение I Б степени, снижение умеренное, апрель 2003 г.). Пациентка получала кардиологическое лечение с положительной клинической и ЭКГ-динамикой. В настоящее время больная находится в удовлетворительном состоянии дома, опухолевая болезнь стабилизировалась, качество жизни - хорошее.

Формула изобретения

Способ определения уровня неспецифической резистентности организма (УНРО), включающий определение содержания тиоловых (-SH) и дисульфидных (-SS-) групп в исследуемом субстрате крови и их тиолдисульфидное соотношение (ТДС), отличающийся тем, что в качестве исследуемого субстрата используют одновременно цельную кровь и клеточный концентрат крови, определяют ТДС в цельной крови и ТДС в клеточном концентрате крови многократно в течение не менее 24 ч культивации с интервалом 30-180 мин, затем строят графики зависимостей показателей ТДС от времени культивации, а УНРО определяют по отношению площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в цельной крови к площади под графиком зависимости “ТДС - время культивации” в клеточном концентрате крови.