Способ получения гипериммунной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза и клебсиеллеза телят, поросят и ягнят
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии. Способ заключается в гипериммунизации быков-продуцентов поливалентным антигеном с последующим взятием крови, отделением сыворотки и последующим консервированием. При этом в качестве поливалентного антигена используют антиген, содержащий культуры возбудителей колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза и клебсиеллеза при следующем соотношении компонентов (на один литр физиологического раствора): культура возбудителей колибактериоза (КОЕ) - 5×1012-6×1012; культура возбудителей сальмонеллеза (КОЕ) - 5×1012-6×1012; культура возбудителей клебсиеллеза (КОЕ) - 5×1012-6×1012; формалин - 2,9-3,2 мл. Способ позволяет получить гипериммунную сыворотку с высокими лечебными и профилактическими свойствами. 2 з.п. ф-лы, 4 табл.
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения гипериммунной сыворотки.
В настоящее время для специфической профилактики и лечения колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза животных используют одноименные гипериммунные сыворотки, изготавливаемые предприятиями биологической промышленности.
Известны способы получения гипериммунных сывороток против колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных, сальмонеллеза телят, поросят, овец, птиц и пушных зверей, а также против эшерихиоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза и протейной инфекции телят, поросят и ягнят (1, 2, 3), включающие многократную (до 21 инъекции) иммунизацию волов - продуцентов сыворотки инактивированным формалином антигеном с интервалом между введениями четыре дня. Эти способы получения гипериммунных сывороток длительны во времени и трудоемки.
Задачей изобретения является получение высокоактивной поливалентной сыворотки против эшерихиоза, сальмонеллеза, клебсиеллеза.
Поставленная задача решается за счет того, что при гипериммунизации быков-продуцентов в качестве поливалентного антигена используют антиген, содержащий культуры возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и клебсиеллеза при следующем соотношении компонентов (на один литр физиологического раствора):
| культура возбудителей колибактериоза | - 5×1012-6×1012 |
| культура возбудителей сальмонеллеза | - 5×1012-6×1012 |
| культура возбудителей клебсиеллеза | - 5×1012-6×1012 |
| формалин | - 2,9-3,2 мл |
| физиологический раствор | - остальное |
Поставленная задача также решается за счет того, что антиген содержит в качестве возбудителя колибактериоза - патогенные штаммы Е. coli не менее пяти серогрупп, в качестве возбудителя сальмонеллеза - Sal Dublin, Sal. Typhimurium и Sal. Enteretidis, Sal. Cholerae Suis, в качестве возбудителя клебсиеллеза - klebsiela pneumonae ozaenae.
Поставленная задача решается за счет того, что при гипериммунизации быков-продуцентов осуществляют путем четырехкратного введения поливалентного антигена с интервалом в четыре дня, при этом в первый раз вводят 5 мл поливалентного антигена, во второй - 10 мл, в третий - 15 мл, в четвертый - 20 мл, а за день до первого введения поливалентного антигена волам-продуцентам вводят 5 мл тетравита.
Поливалентный антиген содержит бактериальные клетки энтеропатогенных эшерихий пяти серогрупп - 09, 026, 078, 0138 и 0141, содержащих полисахаридные капсульные антигены К35, К60, К80 и К81; белковые адгезивные антигены К88 и К99, производственные культуры, представленные в составе антигена, включают Е. coli 09: К36:К99, Е. coli 026: К60, Е. coli 078: К80, Е. coli 0138: K81:K88 и Е. coli 0141; Sal Dublin, Sal. Typhimurium и Sal. Enteretidis, Sal. Cholerae Suis, klebsiela pneumonae ozaenae.
Животным за один день до инъекции вводят 5 мл тетравита из расчета 0,02 г на кг живого веса. Введение антигена проводят четырехкратно с интервалом в четыре дня между инъекциями соответственно в возрастающих дозах - 5, 10, 15, 20 мл. Техническим результатом, полученным при реализации данного изобретения, является получение препарата с высокой лечебной и профилактической активностью.
Пример 1. Быкам в возрасте 20-24 месяца, находящимся на откорме и прошедших карантин и тщательное клиническое и лабораторное обследование согласно действующей инструкции о порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов, вводили внутримышечно тетравит в дозе 5 мл, на следующий день животным инъецировали подкожно поливалентный антиген из эшерихий, сальмонелл и клебсиелл, Е. coli 09: К36:К99, Е. coli 026: К60, Е. coli 078: К80, Е. coli 0138: К81:К88 и Е. coli 0141; Sal Dublin, Sal. Typhimurium и Sal. Enteretidis, Sal. Cholerae Suis, klebsiela pneumonae ozaenae в дозе 5 мл. Через три дня после введения быкам антигена вновь вводили тетравит в той же дозе, а на следующий день - 10 мл антигена.
Третью инъекцию повторяли внутримышечным введением 5 мл тетравита и на вторые сутки - подкожным введением 15 мл антигена. Четвертую инъекцию антигена проводили по той же схеме в дозе 20 мл. Весь цикл гипериммунизации животных составил 16 дней.
Через 12 дней после последнего введения антигена проводили пробное крововзятие у быков-продуцентов для контроля в реакции агглюцинации уровня антител в сыворотке крови к антигенам эшерихий, сальмонелл и клебсиелл. Средний титр к эшерихиям составил 1:1600, сальмонеллам - 1:3200, к клебсиелам - 1:1600.
Более четырехкратного введения антигена не целесообразно, ибо подавляются иммунобиологические реакции животных.
После тотального обескровливания животных, проведенного через 10 дней после пробного крововзятия, кровь проверяли на стерильность, отстаивали, получали сыворотку, которую сливали в стерильные бутыли, затем добавляли 0,5 фенола к исходному объему сыворотки в виде 5% раствора с целью ее консервирования.
Пример 2. Полученную сыворотку согласно описанному способу проверяли на наличие специфических антител к соматическим и адгезивным антигенам в сравнении с сывороткой-прототипом.
| Таблица 1 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ СОМАТИЧЕСКИХ И АДГЕЗИВНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ | ||||
| Наименование антигена | Гипериммуная сыворотка против сальмонеллеза, эшерихиоза и клебсиеллеза телят, поросят, ягнят | Сыворотка против сальмонеллеза, колибактериоза и протейной инъекции телят, поросят, ягнят (прототип) | ||
| Титр антител в РА | Средний титр | Титр антител в РА | Средний титр | |
| 1. E. coli 09 | 1:1600 | 1:3200 | 1:3200 | 1:1540 |
| 2. Е. coli 078 | 1:3200 | 1:1600 | ||
| 3. Е. coli 026 | 1:1600 | 1:400 | ||
| 4. Е. coli 0138 | 1:6400 | 1:1600 | ||
| 5. Е. coli 0141 | 1:3200 | 1:800 | ||
| 6. Sal Dublin | 1:1600 | 1:1600 | 1:400 | 1:466 |
| 7. Sal. Typhimurium | 1:1600 | 1:800 | ||
| 8. Sal. Enteretidis | 1:1600 | 1:200 | ||
| 9. Sal. Cholerae Suis | 1:1600 | 1:1600 | ||
| 10. klebsiela pneumonae | 1:1600 | 1:1600 | 1:1600 | 1:1600 |
| 11. К88 | 1:640 | 1:480 | 1:160 | 1:120 |
| 12. К99 | 1:320 | 1:80 |
Как видно из материалов таблицы, предлагаемая сыворотка содержит соматических эшерихиозных и сальмонеллезных антител в два, адгезивных - в четыре раза больше, чем сыворотка-прототип.
Пример 3. Оценка лечебной эффективности предлагаемой сыворотки для телят проведена в сравнении сывороткой-прототипом и сывороткой крови животных, переболевших желудочно-кишечными заболеваниями в АО «Ключевское» Беляевского района Оренбургской области.
Терапевтическую эффективность определяли на 250 больных желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями телятах в возрасте от 3 до 12 дней. Все животные были разбиты на 5 групп.
Телят первой группы лечили предлагаемой сывороткой из расчета 1 мл сыворотки на кг живого веса, второй - сывороткой-прототипом согласно наставления, третьей - сывороткой Армавирской биофабрики и четвертой группы - сывороткой реконвалесцентов. Пятая группа была контрольной и получала только симптоматическое лечение. Результаты представлены в таблице 2.
| Таблица 2 ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕДЛАГАЕМОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ТЕЛЯТ | |||||||||||
| № п/п | Кол-во животных | Наименование сыворотки | Выздоровело по дням | Пало | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | Кол-во | % | |||
| 1. | 50 | Предлагаемая | 12 | 16 | 21 | 1 | - | - | - | 0 | 0 |
| 2. | 50 | Сыворотка-прототип против сальмонеллеза, эшерихиоза, клебсиеллеза и протейной инъекции | 6 | 20 | 18 | 6 | - | - | - | 0 | 0 |
| 3. | 50 | Сыворотка Армавирской б-ки против эшерихиоза с/х животных | 15 | 30 | 5 | - | - | - | - | 0 | 0 |
| 4. | 50 | Сыворотка реконвалесцентов | 2 | 15 | 15 | 8 | 8 | - | - | 2 | 4 |
| Контроль | - | 2 | 7 | 13 | 10 | 6 | 2 | 10 | 20 |
Данные таблицы свидетельствуют о более высокой лечебной эффективности сыворотки против эшерихиоза Армавирской биофабрики и предлагаемой - против сальмонеллеза, колибактериоза и клебсиеллеза.
Пример 4. Лечебная эффективность сыворотки изучена на 200 подсосных поросятах с желудочно-кишечными заболеваниями.
Поросята были разбиты на 4 группы. Первую группу животных лечили предлагаемой гипериммунной сывороткой в дозе 1 мл на кг живого веса, вторую - сывороткой-прототипом против сальмонеллеза, колибактериоза и клебсиеллеза, третью - сывороткой Армавирской биофабрики и четвертая группа являлась контрольной и получала только симптоматическое лечение.
| Таблица 3 ЛЕЧЕБНАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕДЛАГАЕМОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ПОРОСЯТ | |||||||||||
| № п/п | Кол-во животных | Наименование сыворотки | Выздоровело по дням | Пало | |||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | Кол-во | % | |||
| 1. | 50 | Предлагаемая | 3 | 27 | 20 | - | - | - | - | 0 | 0 |
| 2. | 50 | Сыворотка-прототип против сальмонеллеза, эшерихиоза, клебсиеллеза и протейной инъекции | 1 | 19 | 18 | 12 | 0 | 0 | |||
| 3. | 50 | Сыворотка Армавирской 6-ки против эшерихиоза с/х животных | 26 | 17 | 7 | - | - | - | - | 0 | 0 |
| 4. | 50 | Контроль | - | - | 6 | 8 | 10 | 9 | - | 17 | 34 |
Результаты таблицы указывают на довольно высокую терапевтическую активность предлагаемой сыворотки (животные группы 1), не уступающей сыворотке-прототипу (животные группы 2).
Пример 5. Профилактическая активность предлагаемой сыворотки изучена на телятах в АО «Ключевское» Беляевского р-на Оренбургской области, где на протяжении ряда лет регистрируются острые кишечные заболевания и клебсиеллез телят, подверженные клиническими, патолого-анатомическими и бактериологическими исследованиями.
В опыте использовано 400 новорожденных телят и 200 поросят, которых разбили на четыре группы. Результаты представлены в таблице 4.
| Таблица 4 ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕДЛАГАЕМОЙ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ | ||||
| № п/п | Кол-во животных | Наименование сыворотки | Заболело | |
| Голов | % | |||
| телята | ||||
| 1. | 50 | Предлагаемая | 20 | 20 |
| 2. | 50 | Сыворотка-прототип против сальмонеллеза, эшерихиоза, клебсиеллеза и протейной инъекции | 23 | 23 |
| 3. | 50 | Сыворотка Армавирской б-ки против эшерихиоза с/х животных | 37 | 37 |
| 4. | 50 | Контроль | 73 | 73 |
| поросята | ||||
| 1. | 50 | Предлагаемая | 12 | 24 |
| 2. | 50 | Сыворотка-прототип против сальмонеллеза, эшерихиоза, клебсиеллеза и протейной инъекции | 13 | 26 |
| 3. | 50 | Сыворотка Армавирской б-ки против эшерихиоза с/х животных | 40 | 80 |
| 4. | 50 | Контроль | 48 | 96 |
Результаты испытания профилактической эффективности гипериммунной сыворотки против сальмонеллеза, колибактериоза и клебсиеллеза для телят и поросят свидетельствуют о том, что получен препарат с высокой лечебной эффективностью против сальмонеллеза, колибактериоза и клебсиеллеза.
Таким образом, предлагаемая гипериммунная сыворотка против сальмонеллеза, колибактериоза и клебсиеллеза телят, поросят, ягнят обладает высокими лечебными и профилактическими свойствами упомянутых заболеваний сельскохозяйственных животных.
Литература
1. Девришов Д.А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезней молодняка сельскохозяйственных животных. /Диссертация на соискание уч. степени доктора биологических наук. М., 2006 г./.
2. Малахов Ю.А., Тугаринов О.А., Пирожков М.К., Солодков B.C. Способ получения сыворотки антиадгезивной и антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных. /Патент №2043772, приоритет от 25.02.1993 г., зарегистрирован 20.09.1995 г./.
3. Малявин А.Г. Сыворотка против коли-паратифозных инфекций. / В кн. «Биологические и терапевтические ветеринарные препараты», М., Сельхозиздат, 1963 г., с.274-283.
1. Способ получения гипериммунной сыворотки против колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза и клебсиеллеза телят, поросят и ягнят, заключающийся в гипериммуннизации быков-продуцентов поливалентным антигеном с последующим взятием крови, отделением сыворотки и последующим консервированием, при этом в качестве поливалентного антигена используют антиген, содержащий культуры возбудителей колибактериоза (эшерихиоза), сальмонеллеза и клебсиеллеза при следующем соотношении компонентов (на один литр физиологического раствора):
| культура возбудителей колибактериоза (КОЕ) | 5×1012-6×1012 |
| культура возбудителей сальмонеллеза (КОЕ) | 5×1012-6×1012 |
| культура возбудителей клебсиеллеза (КОЕ) | 5×1012-6×1012 |
| формалин | 2,9-3,2 мл |
2. Способ получение гипериммунной сыворотки по п.1, отличающийся тем, что антиген содержит в качестве возбудителя колибактериоза - патогенные штаммы Е.Coli не менее пяти серогрупп, в качестве возбудителя сальмонеллеза -Salmonella dublin. Salmonella typhimurium. Salmonella enteretidis Salmonella cholerae suis, в качестве возбудителя клебсиеллеза - Klebsiela pneumonae ozaenae.
3. Способ получение гипериммунной сыворотки по п.1, отличающийся тем, что гипериммуннизацию быков-продуцентов осуществляют путем четырехкратного введения поливалентного антигена с интервалом в четыре дня, при этом в первый раз вводят 5 мл поливалентного антигена, во второй - 10 мл, в третий - 15 мл, в четвертый - 20 мл, а за день до первого введения поливалентного антигена волам-продуцентам вводят 5 мл тетравита.
