Способ получения средства, обладающего антидепрессантной активностью
Владельцы патента RU 2327481:
Дубищев Алексей Владимирович (RU)
Правдивцева Ольга Евгеньевна (RU)
Куркин Владимир Александрович (RU)
Кадацкая Дина Викторовна (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Проводят экстракцию травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.). В качестве экстрагента используют этиловый спирт в диапазоне концентраций 60...90% и при соотношении сырье-экстрагент в интервале значений 1:11÷1:13. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение и повысить выход флаваноидов. 1 ил., 2 табл.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности, к производству лекарственных средств из лекарственного растительного сырья, и касается способа получения настойки зверобоя из травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L., сем. Зверобойные - Hypericaceae), обладающей антидепрессантной активностью.
Известны способы получения лекарственных средств из травы зверобоя продырявленного (иманин, новоиманин, настой, настойка, мазь, зверобойное масло), однако недостатком известных способов является сложность технологического процесса и (или) низкий выход целевого продукта [1, 4, 7-10]. Среди отечественных препаратов на основе травы зверобоя продырявленного наиболее широко применяется настойка зверобоя на 40% спирте (1:5), причем в качестве антисептического и вяжущего средства [8]. Известен также ряд комбинированных препаратов, в частности, гепафит, бруснивер, бруснивер-Т, сибектан, простанорм, однако ассортимент антидепрессантных лекарственных средств представлен лишь дорогостоящими зарубежными препаратами (деприм, негрустин и гелариум гиперикум), что значительно ограничивает возможности широкого их применения в медицинской практике [3,5-7,12].
Исследования в плане совершенствования способа получения настойки могли бы, с одной стороны, повысить выход действующих веществ, а с другой, расширить спектр фармакологической активности препарата.
За прототип изобретения нами взят способ получения настойки из травы зверобоя продырявленного [8], который осуществляется с использованием 40% этилового спирта в качестве экстрагента. Недостатками данного способа являются низкий выход целевых веществ (флавоноидов) и отсутствие антидепрессивной активности.
Целью изобретения является увеличение выхода целевых веществ - флавоноидов из травы зверобоя продырявленного, а также расширение спектра фармакологической активности.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве экстрагента используют этиловый спирт в диапазоне концентраций 60...90% и при соотношении сырье-экстрагент в интервале значений 1:11÷1:13, что позволяет исчерпывающе извлекать целевые вещества - сумму флавоноидов из травы зверобоя продырявленного, среди которых доминируют гиперозид (1) и рутин (2) [4-6].
|  |
| Гиперозид (1) | Рутин (2) |
Проведенный заявителем поиск по научно-техническим и патентным источникам информации и выбранный из перечня аналогов прототип [9] позволили выявить отличительные признаки в заявленном техническом решении. Следовательно, заявляемый способ получения удовлетворяет критерию изобретения "новизна".
Проведенный заявителем дополнительный поиск известных технических решений [1, 3, 4, 6, 7, 10, 12] с целью обнаружения в них признаков, сходных с признаками заявляемого способа получения, показал, что эти признаки отсутствуют, следовательно, заявляемое техническое решение удовлетворяет критерий "изобретательский уровень".
Критерий изобретения - «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый способ получения настойки зверобоя позволяет получить в промышленном производстве с использованием простой, но эффективной технологической схемы препарат из травы зверобоя продырявленного, обладающий антидепрессантной активностью.
Сравнительное количественное определение суммы флавоноидов в образцах травы зверобоя продырявленного, а также в образцах настойки зверобоя проводили методом дифференциальной спектрофотометрии [2].
Фармакологические исследования образцов настойки зверобоя были проведены на белых беспородных крысах обоего пола. В работе использована стандартная методика по выявлению антидепрессантной активности - тест отчаяния [11].
В тесте отчаяния время иммобилизации животных после введения настойки зверобоя, полученной заявленным способом, сокращается на 9,6% (183,4±3,8 с на фоне 202,8±4,3 с в случае контрольной группы), что свидетельствуют об антидепрессивных свойствах настойки зверобоя. Что касается промышленного образца настойки, то данный препарат не только не проявлял активности, но и даже увеличивал время иммобилизации по сравнению с контролем на 30,8% (221,9±4,9 с на фоне 169,6±6,4 с в случае контрольной группы).
При отработке технологических параметров нами использован образец травы зверобоя продырявленного с содержанием суммы флавоноидов 3,80% (нижний предел содержания суммы флавоноидов в соответствии с Государственной фармакопеей СССР XI издания составляет 1,5%). Образцы полученных образцов настоек оценивали на содержание суммы флавоноидов в соответствии с Фармакопейной статьей 42-1889-95 «Настойка зверобоя» (нижний предел содержания суммы флавоноидов в препарате составляет 0,2%).
Заявляемый способ иллюстрируется следующими примерами и нижеприведенной схемой.
Пример 1. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1100 мл 60% этилового спирта (11 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов.
Через 12 ч извлечение из 1-го экстрактора (около 900 мл) сливают в сборник 1, переносят его во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 12 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 60% этилового спирта или пятикратное количество по отношению к массе сырья) и оставляют для настаивания на 12 ч. По истечении 12 ч извлечение из 2-го экстрактора (700 мл) сливают в сборник 2, переносят его в 3-й экстрактор и настаивание проводят в течение 12 часов.
Второй день. По истечении 12 ч извлечение из 3-го экстрактора (500 мл или 1/3 готового продукта) сливают в сборник 3 и переносят в емкость, в которую собирают готовый продукт. По истечении 12 ч извлечение из 1-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 1, переносят во 2-й экстрактор и оставляют для настаивания в течение 12 ч. По истечении указанного времени извлечение из 2-го экстрактора (500 мл) сливают в сборник 2, переносят в 3-й экстрактор и настаивают в течение 8 ч. В 1-й экстрактор заливают свежий экстрагент (500 мл 60% этилового спирта) и затем осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин. Данное извлечение (около 500 мл) сливают в сборник 1 и переносят во 2-й экстрактор. Затем во 2-м экстракторе осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин и полученное извлечение (500 мл) сливают в сборник 2.
Третий день. Из 3-го экстрактора сливают около 500 мл извлечения (1/3 готового продукта) в сборник 3 и переливают в емкость с готовым продуктом. Извлечение из сборника 2 переносят в 3-й экстрактор и осуществляют термическую экстракцию при температуре 90°С в течение 30 мин. Полученное извлечение (500 мл или 1/3 готового продукта) сливают в сборник 3 и переносят в емкость с готовым продуктом.
Сливы с готовым продуктом перемешивают и отстаивают в течение двух суток при температуре не выше 8°С. Затем настойку зверобоя фильтруют и получают 1500 мл готового продукта.
Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,57%. Выход целевого продукта составляет 75,0% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1, схема).
Пример 2. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1300 мл 60% этилового спирта (13 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,59%. Выход целевых веществ составляет 77,6% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 3. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1100 мл 70% этилового спирта (11 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,72%.
Выход целевого продукта составляет 94,7% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 4. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1300 мл 70% этилового спирта (13 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,73%. Выход целевых веществ составляет 96,0% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в измельченной травы зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 5. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1100 мл 80% этилового спирта (11 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [9], составляет в настойке 0,69%. Выход целевых веществ составляет 90,8% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 6. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1300 мл 80% этилового спирта (13 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 12 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [9], составляет в настойке 0,70%. Выход целевых веществ составляет 92,1% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 7. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1100 мл 90% этилового спирта (11 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,53%. Выход целевых веществ составляет 70,0% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Пример 8. Первый день. В три экстрактора емкостью 2 л помещают 300 г измельченной травы зверобоя продырявленного по 100 г в каждый экстрактор. В 1-й экстрактор заливают 1300 мл 90% этилового спирта (13 объемов по отношению к сырью) и оставляют для настаивания в течение 8 часов. Далее технологический процесс осуществляют в соответствии с примером 1.
Полученную настойку зверобоя в объеме около 1500 мл отстаивают в течение 2 суток при температуре не выше 8°С, передают на фильтрацию и получают 1500 мл готового продукта. Содержание суммы флавоноидов (целевые вещества), определенное с использованием спектрофотометрического метода [2], составляет в настойке 0,54%. Выход целевых веществ составляет 71,0% от теоретического содержания (содержание суммы флавоноидов в траве зверобоя продырявленного составляет 3,80%) (табл.1).
Исследование запредельных параметров технологического процесса дает следующие результаты. Использование концентрации спирта ниже 60%, в частности, 50% этилового спирта (пример 9), на стадии экстракции приводит к существенному снижению выхода целевых веществ (60,0% от теоретического содержания суммы флавоноидов в сырье) и, следовательно, к снижению содержания флавоноидов в настойке зверобоя (0,45%).
| Таблица 1 | |||||||
| Сравнительная характеристика эффективности процессов экстракции травы зверобоя продырявленного | |||||||
| № примера | Исходное сырье (масса, в граммах) | Содержание суммы флавоноидов в сырье | Наименование препарата (объем) | Содержание суммы флавоноидов в препарате | Выход суммы флавоноидов, % | ||
| в % | в граммах | в % | в граммах | ||||
| Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 40% спирте (1500 мл) - Прототип | 0,33 | 4,95 | 43,4% | |
| 1. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 60% спирте (1500 мл) | 0,57 | 8,55 | 75,0% |
| 2. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 60% спирте (1500 мл) | 0,59 | 8,85 | 77,6% |
| 3. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 70% спирте (1500 мл) | 0,72 | 10,80 | 94,7% |
| 4. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 70% спирте (1500 мл) | 0,73 | 10,95 | 96,0% |
| 5. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 80% спирте (1500 мл) | 0,69 | 10,35 | 90,8% |
| 6. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 80% спирте (1500 мл) | 0,70 | 10,50 | 92,1% |
| 7. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 90% спирте (1500 мл) | 0,53 | 7,95 | 70,0% |
| 8. | Трава зверобоя продырявленного (300 г) | 3,80% | 11,40 | Настойка на 90% спирте (1500 мл) | 0,54 | 8,10 | 71,0% |
Использование концентрации 95% этилового спирта (пример 10) также приводит еще к большему снижению выхода целевых веществ (51,3% от теоретического содержания суммы флавоноидов в сырье) и, соответственно, к снижению содержания флавоноидов в настойке зверобоя (0,39%).
При выборе оптимального соотношения сырье-экстрагент в случае использования значения 1:14 в первом перколяторе (пример 11) в качестве целевого продукта получен препарат в объеме 1600 мл. Следовательно, с одной стороны, в данном примере нарушено предъявляемое к настойкам соотношение (1:5), а с другой, - это приводит к снижению содержания целевых веществ в препарате с 0,73 до 0,68%. В случае использования значения 1:10 в первом перколяторе (пример 12) в качестве целевого продукта получен препарат в объеме 1400 мл, с одной стороны, также нарушено предъявляемое к настойкам соотношение (1:5), а с другой, - снижена эффективность экстракции с 96,0% (пример 4) до 90,0%.
Следовательно, оптимальными параметрами способа получения является экстракция 60%...90% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент в интервале 1:11-1:13. Данные параметры позволяют получать целевой продукт (примеры 1-8) на основе ресурсосберегающих технологий, обеспечивающих исчерпывающую экстракцию и, как результат, повышение содержания суммы флавоноидов в настойке зверобоя.
Сравнительная характеристика заявляемого способа и способа прототипа (табл.2) свидетельствуют о том, что заявляемый способ обеспечивает более высокий выход флавоноидов (в 2,2 раза) из травы зверобоя продырявленного, а получаемый при этом препарат с высоким содержанием флавоноидов приобретает антидепрессивные свойства.
| Таблица 2 | ||||
| Сравнительная характеристика заявляемого способа и способа прототипа | ||||
| №№ п/п | Параметры способа | Заявляемый способ | Прототип | Преимущества заявляемого способа |
| 1. | Экстрагент | Этиловый спирт (60%...90%) | Этиловый спирт (40%) | Шире диапазон концентрации спирта |
| 2. | Выход действующих веществ, в % | 96,0% | 43,4% | Более высокий выход флавоноидов (в 2,2 раза) |
| 3. | Содержание флавоноидов в настойке зверобоя, в % | 0,73% (пример 4) | 0,33% | Более высокое содержание флавоноидов |
| в целевом продукте (в 2,2 раза) | ||||
| 4. | Фармакологические свойства | Антидепрессантная активность | Вяжущее и антисептическое средство. Антидепрессантная активность отсутствуют | Более широкий спектр фармакологической активности |
Таким образом, использование заявляемого способа дает следующие преимущества:
1. Использование в заявляемом способе 60%...90% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент в интервале значений 1:11÷1:13 позволяет повысить выход действующих веществ (флавоноиды) из травы зверобоя продырявленного до 96,0% по сравнению с 43,4% в случае прототипа.
2. Заявляемый способ позволяет повысить содержание флавоноидов в целевом продукте с 0,33% до 0,73%, то есть в 2,2 раза.
3. Заявляемый способ позволяет получать настойку зверобоя, обладающую антидепрессантными свойствами, что расширяет спектр фармакологической активности целевого продукта и создает условия для замены дорогостоящих зарубежных аналогов.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Айзенман Б.Е., Дербенцева Н.А. Антимикробные препараты из зверобоя. - Киев:
Издательство «Наукова думка», 1976. - 173 с.
2. Государственная Фармакопея СССР. - Одиннадцатое издание. - Вып.2. - М.: Медицина, 1990. - С.323-325.
3. Государственный реестр лекарственных средств. - Т.1. Официальное издание. - М., 2004. - 1404 с.
4. Китанов Г.М., Блинова К.Ф. Современное состояние химического изучения видов рода Hypericum // Химия природных соединений. - 1987. - №2. - С.185-203.
5. Куркин В.А., Новодранова В.Ф., Куркина Т.В. Иллюстрированный словарь терминов и понятий в фармакогнозии. - Москва; Самара: ГП «Перспектива», СамГМУ, 2002. - С.50.
6. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУВПО «СамГМУ», 2004. - 1180 с.
7. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Т.1 и 2. - М.: Новая Волна, 2000.
8. Муравьев И.А. Технология лекарств. - Изд. 3-е, перераб. и доп.Том I, М.: Медицина, 1980. - С.180-183.
9. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация. / Под ред. проф. В.Л.Багировой, проф. В.А.Северцева. - Санкт-Петербург: Спецлит. - 223 с.
10. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Paeoniaceae-Thymelaceae. Л.: Наука, 1985. - С.16-18.
11. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. / Под ред. В.П.Фисенко, Е.В.Арзамасцева, Э.А.Бабаяна и др. - М.: ИММ «Ремедиум», 2000. - 380 с.
12. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник. - М.: АстраФармСервис, 2005. - 1536 с.
Способ получения средства из травы зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.), включающий экстракцию сырья водным этиловым спиртом, отличающийся тем, что способ осуществляют с использованием 60...90%-ного этилового спирта и при соотношении сырье-экстрагент 1:11÷1:13.
