Способ прогнозирования развития атопического дерматита у детей раннего возраста
Владельцы патента RU 2353927:
Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской генетике и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития атопического дерматита у детей раннего возраста. Сущность изобретения состоит в том, что в лимфоцитах периферической крови новорожденного определяют дозу активных рибосомных генов (10AgЯОР) и при ее значении менее 18 усл. ед. прогнозируют возникновение атопического дерматита. Использование изобретения позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие атопического дерматита задолго до появления клинических признаков, что дает возможность своевременно провести ребенку профилактические мероприятия и избежать тяжелые последствия при данной патологии. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской генетике и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития атопического дерматита у детей раннего возраста.
Актуальность разработки заявляемого способа определяется значительной распространенностью у детей аллергических заболеваний, среди которых у детей раннего возраста составляет 3-10% атопический дерматит (1, 2). Наименее изученными остаются вопросы участия генетических факторов в развитии этой патологии, влияния их на длительность ремиссии и прогноз.
Известен способ оценки риска развития аллергодерматозов путем определения диагностических коэффициентов по данным дерматоглифических показателей на I-V пальцах левой и правой кисти у мужчин и женщин (патент № 2265655 RU. Способ оценки риска развития аллерготерматозов. // БИ. - 2006. - № 3).
Недостатки способа:
1. Субъективность оценки дерматоглифических показателей.
2. Отсутствие данных о точности метода.
Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования развития сочетанных форм атопического дерматита у детей по выявлению клинических факторов (определение групп крови и сопутствующих заболеваний) и социальных факторов (наличие у родителей профессиональных вредностей, загрязненность окружающего воздуха, жилищные условия), представленных в виде прогностических коэффициентов (Патент № 2297796 Способ индивидуального прогнозирования развития сочетанных форм атопического дерматита у детей./ Шамов Б.А., Шамова А.Г., Газиев А.Р., Газиева Э.Г. (Россия) // БИ. - 2007. - № 12).
Недостатки способа:
1. Использование большого количества анамнестических показателей (34 фактора).
2. Субъективность оценки анамнестических факторов риска.
3. Отсутствие объективного маркера, свидетельствующего о высокой вероятности развития сочетанных форм атопического дерматита у ребенка.
4. Отсутствие данных о точности метода.
Указанные недостатки предполагается устранить в заявляемом способе.
Техническим решением заявляемого способа является прогнозирование атопического дерматита у ребенка раннего возраста путем определения дозы активных рибосомных генов (10AgЯОР) в лимфоцитах периферической крови новорожденного и при ее значении менее 18 усл. ед. прогнозируют развитие атопического дерматита с точностю прогноза 87%.
Новизна способа
Впервые предлагается прогнозировать развитие атопического дерматита у детей раннего возраста (с рождения до 3-х лет) по дозе активных рибосомных генов (10AgЯОР).
Ранее изучали связь дозы активных рибосомных генов: с весом новорожденных при рождении (3); с параметрами физического развития детей первого года жизни (4); у пациентов с синдромом Дауна (5); у пациентов с ревматоидным артритом (6).
По нашему мнению у детей с атопическим дерматитом, имеющих низкую дозу активных рибосомных генов (менее 18 усл. ед. (10AgЯОР)), происходит снижение интенсивности синтеза белка, что в свою очередь отражается в снижении адаптационных возможностей организма и способствует манифестации заболевания.
Отличительные признаки
Установлен прогностический параметр содержания 10AgЯОР в крови у новорожденного, при значениях которого менее 18 усл. ед. прогнозируют развитие атопического дерматита.
Способ осуществляется следующим образом
Новорожденному производят забор 1 мл периферической крови из пальца. Препараты метафазных хромосом культивируют в условиях in vitro в присутствии стимулятора митозов фитогемагглютинина (ФГА) при температуре 37°С в течение 72 часов, а затем в присутствии колхицина, гипотонического раствора готовят клеточную суспензию, раскапывая ее на охлажденные влажные стекла (7).
Изучение дозы активных рибосомных генов проводилось с помощью метода специфической окраски цитогенетических препаратов азотнокислым серебром (Ag-окраска) по Howell W.M. (1980) (8) в модификации (9): на стекло наносили 50 мкл деионизированной воды, 150 мкл 50%-ного раствора нитрата серебра и 100 мкл коллоидного раствора (2%-ный раствор желатина в 0,1%-ной муравьиной кислоте). Препарат накрывают покровным стеклом и инкубируют в термостате в течение 8-10 минут при 56°С. После завершения окраски смывают раствор серебра под проточной водой. Препараты помещают в нагретый до 56°С раствор 2xSSC 0,03М раствор Na3C6H507*5,5 Н2O и 0,3М раствор NaCl в соотношении 1:1 и выдерживают при 56°С в течение 8-10 минут. Обезвоживали последовательно в 70% и 96% этиловом спирте. Препараты высушивают и окрашивают 1%-ным раствором красителя Гимзы в 5 мл буфферного раствора. При этом использовалась пятибальная оценка интенсивности окрашивания ядрышкообразующих районов (ЯОР) акроцентрических хромосом (13-15,21-22) и определялся суммарный показатель всех десяти ЯОР (10AgЯОР). Для исключения из анализа клеток с неполноценной Ag-окраской ЯОР отбирали только метафазные пластинки с завершенной Ag-окраской, пользуясь критериями, предложенными О.А.Созанским (10). Для каждого ребенка анализировали 10AgЯОР в 20 клетках.
Сумма размеров 10AgЯОР может характеризовать количество активных рибосомных генов в клетке и служить основой для сравнения индивидуальных геномов по этому признаку (11).
Для объективизации способа прогнозирования параллельно с его применением проводилось клиническое наблюдение и обследование детей.
Существо способа поясняется примерами.
Пример 1
Ребенок А. родился от II беременности, протекавшей с гестозом второй половины (нефропатия I ст.), анемией I ст. на протяжении всей беременности. Роды I своевременные. Оценка новорожденного по шкале Апгар 8-9 баллов. На естественном вскармливании находился до 6 месяцев. В возрасте 5-ти суток жизни проведено цитогенетическое исследование показателя 10AgЯОР, он составил - 16.40 усл. ед. Дан прогноз развития атопического дерматита. На шестом месяце у ребенка появились первые симптомы заболевания: покраснение и зуд в области щек и крупных складок. При проведении профилактических прививок отмечались кожные реакции в виде обострения течения процесса. К возрасту 1 году и 2-х месяцев клинические проявления усилились: обильные кожные высыпания на лице, шее, верхних и нижних конечностях (преимущественно на разгибательных поверхностях), представленные папулами, местами сливающимися в бляшки, сопровождающиеся трещинами, мучительным зудом, общей сухостью кожных покровов. При контакте с домашней и библиотечной пылью возникало усиление кожной сыпи. Поставлен диагноз атопический дерматит, форма - нейродермит. Прогноз подтвердился.
Пример 2
Ребенок Б. родился от I беременности, протекавшей с осложнениями: в первой половине анемия II ст., ранний гестоз, во второй половине - поздний гестоз (водянка I ст.). Роды I в срок 38 недель. Оценка новорожденного по шкале Апгар 8-9 баллов. Естественное вскармливание до 4-х месяцев. На 3 сутки жизни проведено цитогенетическое исследование показателя 10AgЯОР, он составил 18.00 усл. ед. Прогнозировалось отсутствие атопического дерматита в раннем возрасте. При дальнейшем наблюдении за ребенком в течение трех лет проявлений атопического дерматита не было. Прогноз подтвердился.
Пример 3
Ребенок В. Мать ребенка страдает поллинозом и хроническим бронхитом с астматическим компонентом. В анамнезе у двоюродной сестры ребенка В. по материнской линии атопический дерматит, бронхиальная астма. Ребенок В. родился от I беременности, протекавшей на фоне угрозы прерывания в 1 триместре, сочетанного позднего гестоза (водянки I-ст. на фоне анемии I ст., артериальной гипертензии I ст.). В срок 20 недель гестации наблюдалось обострение хронического бронхита с астматическим компонентом. Роды в срок 39 недель. Оценка новорожденного по шкале Апгар 7-8 баллов. На 8-е сутки жизни определен показатель l0AgЯОР, он составил - 15.95 усл. ед. Дан прогноз развития атопического дерматита. Естественное вскармливание до 3-х месяцев. Прикорм введен в шесть месяцев. В возрасте 2 лет и 3 месяцев при применении антибиотиков отмечались кожные высыпания по всему телу, гиперемия в области щек. Затем патологический процесс усилился и носил островоспалительный характер и был представлен множественными папулами, сливающимися в очаги инфильтрации. Отмечалось поражение кожи лица (эритема щек, усиливающаяся вечером, гнейс, молочный струп), спины, эритема ягодиц, упорные опрелости. В области лица отмечалась крупнопластинчатое шелушение. Вне очагов поражения кожа очень сухая. Поставлен диагноз атопический дерматит, форма - конституциональный дерматит. Прогноз подтвердился.
Преимущества способа:
1. Возможность раннего прогнозирования развития атопического дерматита задолго до появления клинических признаков заболевания, что позволяет своевременно провести профилактические мероприятия.
2. Не требует дорогостоящих реактивов.
3. Высокая точность способа - 87%.
4. Отсутствие сложных математических формул при вычислении и для интерпретации результатов.
Указанным методом был обследован 61 ребенок. Результаты исследований приведены в таблице.
| Показатель | Количество детей |
| Всего детей | 61 |
| Истинно положительный результат | 28 |
| Ложноположительный результат | 5 |
| Истинно отрицательный результат | 25 |
| Ложноотрицательный результат | 3 |
| Точность заявляемого способа - 87% Чувствительность заявляемого способа - 90% Специфичность заявляемого способа - 83% |
ЛИТЕРАТУРА
1. Антоньев А.А, Суворова К.Н. Атопический дерматит-диффузный нейродермит. // Вестн. дерматол. - 1988, № 3. - С.21-25.
2. Атопический дерматит у детей: Руководство для врачей./ Под общей ред. Н.Г.Короткого. - М: «Триада»,2000. - 236 с.
3. Ляпунова Н.А., Еголина Н.А., Цветкова Т.Г. и др. Рибосомные гены в геноме человека: вклад в генетическую индивидуальность и фенотипическое проявление дозы гена. // Вестник РАМН, 2000, № 5. - С.19-23.
4. Воронина В.Н. Актуальность рибосомных генов и состояние физического развития детей на первом году жизни. // Здравоохранение Башкортостана, 2000. Спецвыпуск № 2. - С.207-208.
5. Ляпунова Н.А., Вейко Н.Н., Цветкова Т.Г. и др. Ядрышкообразующие районы хромосом и рибосомные гены: от научных поисков к практике. // Современные методы диагностики наследственных болезней. Сб. материалов. 2001. - С.12-22.
6. Вейко Н.Н., Шубаева Н.О., Цветкова Т.Г. и др. Особенности количественных характеристик комплекса рибосомных генов у пациентов с тяжелыми формами ревматоидного артрита. // Медицинская генетика, 2005, № 4. - С.166-167.
7. Кузнецова Т.В., Логинова Ю.А., Чиреева О.Г. Цитогенетические методы: Мед. лабораторные технологии и диагностика. - СПб.: «Интермедика», 1999, Т2. - С.550-578.
8. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver- staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a 1-step method // Experientia. - 1980. - V.36. - P.1014-1015.
9. Ляпунова H.A., Еголина H.A., Мхитарова E.B. и др. Межиндивидуальные и межклеточные различия суммарной активности рибосомных генов, выявляемые Ag-окраской ядрышкообразующих районов акроцентрических хромосом человека. // Генетика. - 1988. - Т.27. - № 7. - С.1282-1288.
10. Созанский О.В., Коновалова Т.В., Яворская О.М. и др. Структурная стабильность ЯОР хромосом человека. // Хромосомы человека в норме и патологии. - 1989. - С.26-33.
П.Вейко Н.Н., Ляпунова Н.А., Богуш А.И., Цветкова Т.Г., Громова Э.В. Определение количества рибосомных генов в индивидуальных геномах человека. Сравнение результатов молекулярного и цитогенетического анализа. // Молекулярная биология. - 1996. - Т.30. - вып. 5. - С.1076-1985.
Способ прогнозирования развития атопического дерматита у детей раннего возраста, включающий исследование периферической крови, отличающийся тем, что в крови новорожденного определяют дозу активных рибосомных генов (10AgЯОР) и при ее значении менее 18 усл. ед. прогнозируют развитие атопического дерматита.
