Способ оценки изменения размеров агрегатов эритроцитов

Авторы патента:

Поповичева Александра Николаевна (RU)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2691388:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования, и раскрывает способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов. Способ характеризуется тем, что эритроциты выделяют из крови, помещают в кювету для изучения агрегации клеток, добавляют индуктор агрегации, после достижения максимальной степени агрегации прекращают перемешивание агрегатов эритроцитов, проводят запись оседания их агрегатов и регистрируют максимальную амплитуду агрегации эритроцитов и скорость оседания агрегатов эритроцитов, с помощью которых выносят суждение об агрегационной способности и изменении размеров агрегатов эритроцитов. 1 ил., 2 пр.

Способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.

Известны способы оценки агрегационной способности эритроцитов при использовании в качестве индукторов агрегации хлористого лантана (Шереметьев Ю.А., Суслов Ф.Ю. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. Пат. 2082968 РФ, 1997), пикриновой кислоты (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В., Успенский А.Н. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. 2238556 РФ, 2004), катионного красителя акридинового оранжевого (Шереметьев Ю.А., Шереметьева А.В. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2390778 РФ, 2010), хлористого цинка (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат.2452958 РФ, 2012) и трихлорида железа (Шереметьев Ю.А., Поповичева А.Н., Успенский А.Н., Левин Г.Я. Способ оценки агрегационной способности эритроцитов. Пат. 2667009 РФ, 2018).

Для изучения агрегации эритроцитов в кювету агрегометра с суспензией клеток добавляют индуктор агрегации и при постоянном перемешивании регистрируют максимальную степень агрегации эритроцитов (максимальная амплитуда агрегатограммы).

В то же время важным показателем агрегации является оценка размеров агрегатов эритроцитов. При этом определение размеров агрегатов проводят путем подсчета количества эритроцитов, вовлеченных в их агрегаты. Это относится к агрегации эритроцитов в виде «монетных столбиков» в аутологичной плазме крови.

Однако в агрегатах эритроцитов, полученных после добавления индукторов агрегации, очень трудно подсчитать количество клеток, так как агрегаты представляют собой глыбчатые структуры.

Поэтому задача создания способов одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов является актуальной.

За прототип взят "Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов" (патент RU 2082968, 1997), включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегации, с использованием хлористого лантана в качестве индуктора агрегации эритроцитов. Перемешивание суспензии осуществляют с помощью электромеханической мешалки. Процесс агрегации регистрируется фотоколориметрически с записью на самописец в виде агрегатограммы. Об изменении состояния мембран эритроцитов судят по степени их агрегации в сравнении с контролем.

Однако этот способ не позволяет провести одновременную оценку агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов.

Задачей предлагаемого изобретения является одновременное определение агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов. При этом агрегация эритроцитов стимулируется различными индукторами.

Поставленная задача достигается тем, что предлагаемый способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов включает выделение эритроцитов из крови, регистрацию максимальной степени их агрегации, стимулированной индукторами, прекращение перемешивания агрегатов эритроцитов после достижения максимальной амплитуды их агрегации, проведение записи оседания агрегатов эритроцитов и оценка скорости их оседания. По максимальной амплитуде агрегации и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности и размерах их агрегатов.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещают в кювету для изучения агрегации и добавляют 0.1 мл индуктора агрегации. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводят запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращают перемешивание суспензии эритроцитов и записывают оседание агрегатов. По максимальной амплитуде агрегатограммы и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности клеток и размерах их агрегатов.

Пример 1. Отмытые эритроциты здорового донора ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы эритроцитов составила 50%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) здорового донора составила 20 секунд.

Пример 2. Отмытые эритроциты больного неспецифическим язвенным колитом ресуспендировали в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4), после чего 0.9 мл суспензии клеток помещали в кювету для изучения агрегации и добавляли 0.1 мл раствора хлористого лантана в финальной концентрации 160 мкМ. Затем при постоянном перемешивании суспензии эритроцитов проводили запись агрегации эритроцитов. После достижения максимальной амплитуды агрегатограммы прекращали перемешивание суспензии эритроцитов и записывали оседание их агрегатов. Максимальная амплитуда агрегатограммы составила 35%. Скорость оседания агрегатов эритроцитов (v) больного неспецифическим язвенным колитом составило 90 секунд.

Таким образом, степень агрегационной способности эритроцитов и размеры их агрегатов эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом значительно меньше, чем у здорового донора.

Регистрацию агрегации эритроцитов и скорости оседания агрегатов эритроцитов осуществляли фотометрическим методом на лазерном агрегометре ЛА 230-2 НПФ «Биола».

На фигуре представлена агрегатограмма записи агрегации эритроцитов и оседания их агрегатов после добавления хлористого лантана.

Способ одновременной оценки агрегационной способности эритроцитов и размеров их агрегатов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию степени их агрегации, индуцируемой различными индукторами, отличающийся тем, что после достижения максимальной степени агрегации прекращают перемешивание агрегатов эритроцитов, проводят запись оседания агрегатов эритроцитов и определение скорости их оседания, по максимальной амплитуде агрегации и скорости оседания агрегатов эритроцитов судят об агрегационной способности и размерах их агрегатов.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования риска формирования Т-хелперного иммунодефицита у плавсостава.

Способ определения митохондриальной дисфункции у больных неалкогольной жировой болезнью печени // 2691108

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения митохондриальной дисфункции у больных неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП), заключающийся в клинико-лабораторном исследовании, отличающийся тем, что выделяют ДНК из лейкоцитов венозной крови больного НАЖБП с последующим проведением полимеразной цепной реакции с применением при этом стандартных пар праймеров с последующим определением длины концевых участков хромосом лейкоцитов периферической крови, и при полученных значениях данного показателя выше референсных определяют митохондриальную дисфункции у больных НАЖБП, в частности к гепатологии и клинической лабораторной диагностике.

Способ определения индивидуальной чувствительности человека к общему охлаждению // 2691074

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения индивидуальной чувствительности человека к общему охлаждению. Способ определения индивидуальной чувствительности человека к общему охлаждению, включающий определение до и после холодовой пробы у обследуемых лиц уровня АТФ лимфоцитов периферической крови, и при увеличении содержания АТФ не менее чем на 25% от исходного значения обследуемого человека относят к чувствительным к общему охлаждению, что ассоциируется со снижением содержания циркулирующих в крови лимфоцитов не менее чем на 20% от исходного значения.

Способ скринингового определения высокой вероятности наличия хронического характера воспаления, ассоциированного с бронхообструктивным синдромом, при бронхолегочных заболеваниях у детей // 2690500

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, пульмонологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для скринингового определения высокой вероятности наличия хронического характера воспаления при бронхообструктивном синдроме у детей старше 2 лет.

Способ прогнозирования развития раннего тромбоза артериовенозной фистулы для проведения гемодиализа у больных терминальной хронической почечной недостаточностью // 2690194

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования развития раннего тромбоза артериовенозной фистулы для проведения гемодиализа у больных терминальной хронической почечной недостаточностью по уровню фибриногена и креатинина венозной крови, отличающийся тем, что у пациентов с уровнем фибриногена не ниже 4,8 г/л, а также при уровне фибриногена ниже 4,8 г/л, но не ниже 4,0 г/л в сочетании с уровнем креатинина 730 мкмоль/л и выше, определенных перед операцией по формированию артериовенозной фистулы, прогнозируется развитие раннего послеоперационного тромбоза сосудистого доступа для гемодиализа.

Способ определения стадий экссудативного среднего отита // 2690171

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения стадий экссудативного среднего отита (ЭСО), включающий обследование больного и забор отделяемого барабанной полости, отличающийся тем, что проводят тезиографическое исследование отделяемого и в полученной кристаллограмме определяют концентрацию центров кристаллизации (ЦК), 1/см2; при концентрации ЦК менее 0,46 определяют серозную стадию ЭСО, при концентрации ЦК от 0,46 до 0,92 - секреторную стадию ЭСО, при концентрации ЦК от 0,92 и более определяют фиброзную стадию экссудативного среднего отита.

Способ прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний нервной системы у детей // 2689797

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний нервной системы у детей путем определения уровней нейроспецифических белков, отличающийся тем, что в остром периоде заболевания определяют уровень метаболита витамина D – 25(OH)D и нейроспецифических белков: глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) и белка S100 в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) и полученные значения вносят в формулы расчета линейной дискриминантной функции – ЛДФ 1 (осложненное течение) и ЛДФ 2 (неосложненное течение):ЛДФ1=-318,25+(-13,69×Х1)+0,065×Х2+17,06×Х3,ЛДФ2=-276,22+(-12,15×Х1)+0,054×Х2+15,99×Х3;где X1 – концентрация GFAP, нг/мл; Х2 – концентрация белка S100, нг/л; Х3 – концентрация 25(OH)D, нг/мл; и при значении ЛДФ1 больше ЛДФ2 прогнозируют осложненное течение заболевания, а при значении ЛДФ2 больше ЛДФ1 – неосложненное.

Способ прогнозирования нефросклероза у детей с хроническим пиелонефритом // 2689790

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии, нефрологии, и может быть использовано для прогнозирования нефросклероза при хроническом пиелонефрите у детей.

Способ определения количества коллагена в ткани // 2689337

Изобретение относится к биотехнологии, гистологии и может быть использовано для количественного определения коллагена в ткани. Способ определения количества коллагена в ткани заключается в многократной гомогенизации материала, полученного путем замораживания, лиофильного высушивания, измельчения предварительно взвешенного кусочка ткани, с последующим ресуспендированием материала с помощью дозатора и центрифугированием, далее подготовленный материал замораживают при -80°С и лиофильно высушивают, полученный безводный материал взвешивают, определяют массу материала m1, разводят материал в 900 мкл буферного раствора с рН 7,0 и добавляют 100 мкл раствора коллализина, который заранее приготовляют путем растворения содержимого одной ампулы коллализина, содержащей коллагеназу в виде лиофилизата в количестве 1000 КЕ, в 2 мл буферного раствора с рН 7,0, пробирку с содержимым перемешивают в течение 2 часов, три раза проводят цикл гомогенизации, центрифугирования при 13400 оборотов в минуту и ресуспендирования материала, материал замораживают при -80°С, лиофильно высушивают и взвешивают, определяют массу материала m2, по разнице масс m1-m2 определяют массу коллагена..

Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе консервированной крови // 2689334

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови заключается в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф.