Пролекарства, содержащие коньюгат гиалуроновой кислоты, линкера и двойного агониста glp-1/глюкагона

Авторы патента:

КАДЕРАЙТ Дитер (DE)

МИЛЛЕР Роберт (US)

МЕЙЕР Нино (DE)

КОНОВИЧ Пол (US)

ЭФЕРС Андреас (DE)

БЕСЕВ Магнус (US)

ДХАЛ Прадип (US)

ЛОРЕНЦ Катрин (DE)

БОССАРТ Мартин (DE)

ХААК Торстен (DE)

СТЕФАНО Джеймс (US)

ОЛЬПП Томас (DE)

ВАГНЕР Михаэль (DE)

A61P3/10 - для лечения гипергликемии, например антидиабетические средства

A61K47/61 - Лекарственные препараты, отличающиеся используемыми неактивными ингредиентами, например носителями, инертными добавками

A61K38/26 - глюкагоны

Владельцы патента RU 2719482:

САНОФИ (FR)

Изобретение относится к пролекарству или его фармацевтически приемлемой соли, содержащим конъюгат агониста GLP-1/глюкагона и линкера Z-L¹-L²-L-Y-R²⁰, где Y представляет собой фрагмент агониста GLP-1/глюкагона; и -L представляет собой линкерный фрагмент формулы (Ib) или фрагмент формулы (Ic), где пунктирная линия указывает на присоединение к одной из аминогрупп фрагмента агониста GLP-1/глюкагона за счет образования амидной связи, а Z представляет собой гидрогель на основе сшитой гиалуроновой кислоты, в котором от 0,05 до 20% мономерных дисахаридных звеньев сшиты посредством сшивателя; и от 0,2 до 8,5% мономерных дисахаридных звеньев содержат группы L¹-L²-L-Y-R²⁰. Настоящее изобретение дополнительно относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные пролекарства, а также к их применению в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения заболеваний или нарушений, которые можно вылечить посредством агониста GLP-1/глюкагона. 6 н. и 15 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 29 пр.

Настоящее изобретение относится к пролекарствам на основе двойного агониста GLP-1/глюкагона, фармацевтическим композициям, содержащим указанные пролекарства, а также к их применению в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения заболеваний или нарушений, которые можно вылечить посредством двойного агониста GLP-1/глюкагона, например, в лечении нарушений метаболического синдрома, в том числе диабета и ожирения, а также для снижения чрезмерного потребления пищи.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Агонисты GLP-1

Эксендин-4 представляет собой пептид из 39 аминокислот, выделенный из секрета слюнных желез аризонского ядозуба (Heloderma suspectum). Он обладает неким сходством последовательностей с некоторыми членами семейства глюкагоноподобных пептидов, при этом наиболее высокая гомология в 53% предполагается с амидом глюкагоноподобного пептида-1[7-36] (GLP-1). Эксендин-4 выступает в качестве агониста рецептора GLP-1 и обладает действием усиления секреции GLP-1-подобного инсулина в выделенных островковых клетках крысы. Эксендин-4 является высокоактивным агонистом, а амид усеченного агониста GLP-1-(9-39) представляет собой антагонист рецептора амида глюкагоноподобного пептида 1-(7-36) у секретирующих инсулин бета-клеток (см., например, J. Biol. Chem. 268(26):19650-19655). Эксендин-4 («эксенатид») недавно был утвержден в США и Европе для улучшения гликемического контроля у пациентов с диабетом 2 типа, принимающих метформин и/или сульфонилмочевину, но он не способен обеспечивать достаточный гликемический контроль.

Аминокислотная последовательность эксендина-4 представлена в виде SEQ ID NO: 1

HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂

Аминокислотная последовательность GLP-1(7-36)-амида представлена в виде SEQ ID NO: 2

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH₂

Глюкагон представляет собой пептид из 29 аминокислот, который высвобождается в кровоток при низком уровне циркулирующей в крови глюкозы. Аминокислотная последовательность глюкагона представлена в виде SEQ ID NO 3:

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

При гипогликемии, когда уровни глюкозы в крови опускаются ниже нормальных, глюкагон сигнализирует печени о необходимости расщепления гликогена и высвобождения глюкозы, в результате чего уровни глюкозы в крови повышаются, достигая нормального уровня. Гипогликемия является распространенным побочным эффектом у пациентов, получающих инсулин в связи с гипергликемией (повышенные уровни глюкозы в крови), вызванной диабетом. Таким образом, наиболее преобладающая роль глюкагона в регуляции глюкозы заключается в противодействии действию инсулина и поддержании уровней глюкозы в крови.

Holst (Holst, J. J. Physiol. Rev. 2007, 87, 1409) и Meier (Meier, J. J. Nat. Rev. Endocrinol. 2012, 8, 728) описывают, что агонисты рецепторов GLP-1, такие как GLP-1, лираглутид и эксендин-4, оказывают 3 основных вида фармакологического действия, позволяющего улучшить гликемический контроль у пациентов с T2DM за счет понижения уровня глюкозы натощак и после приема пищи (FPG и PPG): (i) повышение глюкозозависимой секреции инсулина (улучшенные первая и вторая фазы), (ii) действие, направленное на подавление глюкагона в условиях гипергликемии, (iii) снижение скорости опорожнения желудка, что приводит к замедленному всасыванию поступившей с пищей глюкозы.

Агонисты GLP-1/глюкагона (Glc)

У Pocai с соавт. (Obesity. 2012;20:1566-1571; Diabetes 2009, 58, 2258) и Day с соавт. (Nat Chem Biol 2009;5:749) описано, что двойная активация рецепторов GLP-1 и глюкагона, например, путем объединения действий GLP-1 и глюкагона в одной молекуле, приводит к терапевтическому принципу с противодиабетическим действием и выраженным эффектом снижения веса.

Пептиды, которые связываются как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1 и стимулируют их (Hjort et al. Journal of Biological Chemistry, 269, 30121-30124,1994; Day J.W. et al, Nature Chem Biol, 5: 749-757, 2009), а также сдерживают прибавление в весе и уменьшают потребление пищи, описаны в заявках на патенты WO 2008/071972, WO 2008/101017, WO 2009/155258, WO 2010/096052, WO 2010/096142, WO 2011/075393, WO 2008/152403, WO 2010/070251, WO 2010/070252, WO 2010/070253, WO 2010/070255, WO 2011/160630, WO 2011/006497, WO 2011/152181, WO 2011/152182, WO 2011/117415, WO 2011/117416 и WO 2006/134340, содержания которых включены в данный документ с помощью ссылки.

Кроме того, тройные коагонисты-пептиды, которые не только активируют рецептор GLP-1 и рецептор глюкагона, но также и рецептор GIP (желудочный ингибиторный полипептид), описаны в WO 2012/088116 и VA Gault с соавт. (Biochem Pharmacol, 85, 16655-16662, 2013; Diabetologia, 56, 1417-1424, 2013).

Bloom с соавт. (WO 2006/134340) раскрывают, что пептиды, которые связываются как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1 и стимулируют их, можно создавать в виде гибридных молекул из глюкагона и эксендина-4, где N-концевая часть (например, остатки 1-14 или 1-24) происходит из глюкагона, а C-концевая часть (например, остатки 15-39 или 25-39) происходит из эксендина-4.

Otzen с соавт. (Biochemistry, 45, 14503-14512, 2006) раскрывают, что N- и C-концевые гидрофобные участки вовлечены в фибрилляцию глюкагона, что связано с гидрофобностью и/или высокой склонностью к образованию β-складчатой структуры нижележащих остатков.

В WO2014/056872 раскрываются пептиды, которые связываются как с рецептором глюкагона, так и с рецептором GLP-1 и стимулируют их, и которые получены из эксендина-4, где по меньшей мере аминокислота в положении 14 содержит боковую цепь для более длительного периода полураспада.

Пептиды, применяемые в настоящем изобретении, представляют собой аналоги пептида эксендина-4, содержащие лейцин в положении 10 и глютамин в положении 13, и описаны в WO2015/086731, WO2015/086732, WO2015/086733.

Пептиды, также применяемые в настоящем изобретении, представляют собой аналоги пептида эксендина-4, содержащие бета-аланин в положении 28, и описаны в EP15305899.5.

Дополнительно в настоящем изобретении применяют пептид, который представляет собой аналог пептида эксендина-4, содержащий глютамин в положении 3, бета-аланин в положении 28 и D-аланины в положении 29 и 34.

Пептиды, применяемые в данном изобретении, предпочтительно являются растворимыми не только при нейтральном рН, но и также при рН 4,5. Кроме того, химическая стабильность при значениях pH от 4,5 до 5 является важным критерием для продукта, являющегося пролекарством длительного действия. Пролекарство предпочтительно составляют в данном диапазоне pH, чтобы добиться срока годности по меньшей мере 6 месяцев при 4°C.

Агонисты GLP-1/глюкагона длительного действия

В идеальном варианте пептид составляют таким образом, чтобы обеспечить длительное поддержание уровня в плазме человека в течение по меньшей мере одной недели после применения к организму человека, что обеспечивает в результате частоту введения раз в неделю или реже.

Распространенным терапевтическим средством, содержащим агонисты GLP-1 длительного действия, является Bydureon®, которое представляет собой эксендин-4 в суспензии-депо на основе сополимера гликолевой и молочной кислот для введения с помощью инъекции раз в неделю с использованием иглы 23 калибра.

В WO2012/173422 описан агонист GLP-1/глюкагона, конъюгированный к Fc-области иммуноглобулина, для еженедельного введения, где пептид получен из оксинтомодулина.

Связанные с носителем пролекарства

Для усиления физико-химических или фармакокинетических свойств лекарственного средства in vivo, например, периода его полураспада, такое лекарственное средство может быть конъюгировано с носителем. Если лекарственное средство временно соединено с носителем и/или линкером, то такие системы обычно называют связанными с носителем пролекарствами. В соответствии с определениями, представленными IUPAC (как указано в http://www.chem.qmul.ac.uk/iupac.medchem, доступном от 22 июля 2009 г.), связанное с носителем пролекарство представляет собой пролекарство, которое содержит временную связь, образованную между данным активным веществом и переходной группой носителя, которая обеспечивает улучшенные физико-химические или фармакокинетические свойства, и которая может быть легко удалена in vivo, обычно посредством гидролитического расщепления.

Линкеры, использованные в таких связанных с носителем пролекарствах, могут быть временными, а это означает, что они являются неферментативно гидролитически разрушаемыми (расщепляемыми) в физиологических условиях (водный буфер при pH 7,4, 37°C) с периодами полураспада в диапазоне от, например, одного часа до трех месяцев. Подходящими носителями являются полимеры и они могут быть либо непосредственно конъюгированы с линкером, либо посредством нерасщепляемого спейсера.

Временная конъюгация полимера посредством бесследных линкеров пролекарства объединяет преимущества более длительного времени пребывания в связи с присоединением полимера и восстановления первоначальных фармакологических свойств исходного пептида после высвобождения из полимерного конъюгата.

При использовании конъюгатов полимера и линкерного пептида исходный неизмененный пептид медленно высвобождается после применения в отношении пациента, что регулируется только кинетическими характеристиками высвобождения линкера и фармакокинетическими свойствами полимерного носителя. В идеальном варианте кинетические характеристики высвобождения не будут зависеть от присутствия в биологических жидкостях ферментов, таких как протеазы или эстеразы, что гарантирует достоверную и одинаковую схему высвобождения.

WO2008/148839, WO2009/095479 и WO2012/035139 относятся к пролекарствам, содержащим конъюгаты лекарственного средства и линкера, где линкер ковалентно соединен посредством расщепляемой связи с биологически активным фрагментом, например, GLP 1-агонистом эксендином-4. Биологически активный фрагмент высвобождается из пролекарства при циклизации-активации посредством образования циклического амида. Кинетика высвобождения зависит от значения pH и является минимальной при хранении пролекарства при значениях pH от 4,5 до 5 и достигает ее предполагаемой скорости высвобождения при физиологическом pH около 7,4-7,5. Описано пролекарство на основе агониста GLP-1, в котором линкер основан на L-аланине, и полимерный носитель представляет собой гидрогель на основе PEG-лизина. Не описаны пролекарства на основе двойного агониста GLP-1/глюкагона.

Гиалуроновая кислота (HA)

Dhal с соавт. (Journal of Biomedical Nanotechnology, vol 9, 2013, 1-13) сообщают о гиалуроновой кислоте в качестве подходящего носителя для конъюгатов лекарственных средств. Kong с соавт. (Biomaterials 31 (2010), 4121-4128) сообщают о конъюгате эксендина-4 и гиалуроновой кислоты, который продемонстрировал эффект снижения уровня глюкозы у мышей за 3 дня. Применяемая HA представляла собой линейный полимер с загрузкой лекарственного средства в диапазоне от приблизительно 2,4 до 12%.

В настоящем изобретении гидрогели из сшитой гиалуроновой кислоты выбраны в связи с их более длительным временем пребывания в качестве местного депо в месте применения, чем у растворимой HA.

Важным критерием для применения гиалуроновой кислоты (HA) в качестве полимера-носителя является достижимая загрузка лекарственного средства в конечном лекарственном препарате, которую определяют по загрузке лекарственного средства на самом полимере и концентрации конечных раствора/суспензии. Следует учитывать тот факт, что объем инъекционного раствора для подкожных лекарственных депо практически ограничен до объема меньше/равного 1 мл, предпочтительно меньше/равного 0,6 мл.

Чем более концентрированные полимерные растворы/суспензии HA, тем более вязким является состав, что негативно сказывается на возможности введения через шприц состава пролекарства. Для вязких растворов требуются инъекционные иглы большего диаметра, чтобы ограничить силу, прикладываемую к поршню, и с которой нажимают на шприц. Кроме того, время инъекции является более длительным.

Целью настоящего изобретения является обеспечение пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона для введения в качестве подкожного депо, которое высвобождает агонист GLP-1/глюкагона в активной форме в течение периода времени между введениями по меньшей мере 6 дней и которое можно инъецировать через иглы 26 калибра или даже через иглы с меньшим внутренним диаметром для лучшего соблюдения пациентом схемы лечения.

Целью настоящего изобретения является пролекарство или его фармацевтически приемлемая соль, содержащие конъюгат лекарственного средства и линкера формулы (I)

Z - L¹ -L² - L - Y - R²⁰ (I),

где Y представляет собой пептидный фрагмент, характеризующийся формулой (II),

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (II),

причем X2 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser, D-Ser и Aib,

X3 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Gln и His,

X18 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Arg и Lys,

X20 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Lys, Gln и His,

X21 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Asp и Glu,

X28 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser и Ala,

X32 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser и Val,

или где Y представляет собой пептидный фрагмент, характеризующийся формулой (III),

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-X20-X21-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-X28-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (III),

причем X2 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser, D-Ser и Aib,

X3 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Gln и His,

X18 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Leu и His,

X20 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из His, Arg, Lys и Gln,

X21 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Asp и Glu,

X28 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Lys, Ser и Ala,

X32 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser и Val,

или

где Y представляет собой пептидный фрагмент, характеризующийся формулой (IV),

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Leu-Leu-Asp-Glu-Gln-X18-Ala-Lys-Asp-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Ala-Gly-Gly-Pro-X32-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (IV),

причем X2 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser, D-Ser и Aib,

X3 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Gln и His,

X18 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Arg и Leu,

X32 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser и Val,

или

где Y представляет собой пептидный фрагмент, характеризующийся формулой (IVa),

H₂N-His-Aib-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Leu-X15-Glu-Gln-Leu-Ala-Arg-Asp-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Bal-X29-Gly-X31-X32-Ser-X34-X35-Pro-Pro-Pro-X39-R²⁰ (IVa),

причем X15 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Asp и Glu (предпочт. Asp),

X29 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Gly, D-Ala и Pro (предпочт. Gly, D-Ala),

X31 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Pro, His и Trp (предпочт. Pro),

X32 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ser, His, Pro и Arg (предпочт. Ser, His, Pro),

X34 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Gly и D-Ala,

X35 представляет собой аминокислотный остаток, выбранный из Ala, Pro и Lys (предпочт. Ala, Pro),

X39 представляет собой Ser или Pro-Pro-Pro,

или

где Y представляет собой пептидный фрагмент, характеризующийся формулой (IVb),

H₂N-His-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Leu-Leu-Glu-Glu-Gln-Arg-Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Ile-Bal-D-Ala-Gly-Pro-Pro-Ser-D-Ala-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-R²⁰;

или его соль или сольват;

R²⁰ представляет собой ОН или NH₂;

L представляет собой линкер формулы (Ia),

Ia,

где пунктирная линия указывает на присоединение к N-концу Y посредством образования амидной связи;

X представляет собой C(R⁴R^4a), N(R⁴);

R¹, R^1a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4алкила;

R², R^2a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4алкила;

R⁴, R^4a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4алкила;

где R², R^2a, R⁴ или R^4a замещен одной группой L²-L¹-Z; где

L² представляет собой одинарную химическую связь или представляет собой C_1-20алкильную цепь, которая необязательно прервана одной или несколькими группами, независимо выбранными из -O- и C(O)N(R^3aa), и необязательно замещена одной или несколькими группами, независимо выбранными из OH и C(O)N(R^3aaR^3aaa), где R^3aa и R^3aaa независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4алкила; и

L² прикреплен к L¹ посредством концевой группы, выбранной из группы, состоящей из

,,, , , , , , , , , , и ;

где L² прикреплен в одном положении, отмеченном пунктирной линией, и L¹ прикреплен в положении, отмеченном другой пунктирной линией; и

L¹ представляет собой C_1-20алкильную цепь, которая необязательно прервана одной или несколькими группами, независимо выбранными из -O- и C(O)N(R^5aa), и необязательно замещена одной или несколькими группами, независимо выбранными из OH и C(O)N(R^5aaR^5aaa), где R^5aa и R^5aaa независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4алкила; и

L¹ прикреплен к Z посредством концевой аминогруппы, образующей амидную связь с карбоксильной группой бета-1,3-D-глюкуроновой кислоты гиалуроновой кислоты из Z;

Z представляет собой гидрогель на основе сшитой гиалуроновой кислоты, в котором

от 0,05 до 20% мономерных дисахаридных звеньев сшиты посредством сшивателя; и от 0,2 до 8,5% мономерных дисахаридных звеньев содержат группы L¹-L²-L-Y-R²⁰.

Настоящее изобретение относится к пролекарству, которое обеспечивает высвобождение агониста GLP-1/глюкагона из подкожного депо в активной форме в течение периода времени по меньшей мере 6 дней между введениями.

Это помогает сократить частоту введения инъекционного раствора пациентам, при этом поддерживая оптимальный контроль уровней агониста GLP-1/глюкагона в плазме и, следовательно, уровней глюкозы в крови.

Дополнительные преимущества носителя сшитой гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению заключаются в хорошей способности к введению посредством инъекции через иглу 26 калибра или даже иглу с меньшим внутренним диаметром.

ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фигуре 1a, фигуре 1a/2, фигуре 1b, фигуре 1b/2, фигуре 1c, фигуре 1c/2, фигуре 1c/3, фигуре 1c/4 показаны различные сшивающие химические структуры для синтеза гидрогелей на основе гиалуроновой кислоты.

Фигура 2a. Магнитно-резонансные (MR) томограммы гидрогеля на основе HA в месте инъекции, полученные в разные моменты времени.

Фигура 2b. Магнитно-резонансные (MR) томограммы полимерной суспензии, содержащей смесь 1:1 (вес/вес) гидрогеля на основе HA и растворимой HA, 800 кДа, в месте инъекции, полученные в разные моменты времени.

Фигура 3. Кинетические характеристики высвобождения in vitro двойного агониста эксендина-4 под Seq ID No. 26 с линкером из гидрогеля на основе HA в течение недели (пример 18). Период полураспада составляет 5 дней.

Фигура 4. Эффект конъюгата гидрогеля на основе HA и двойного агониста (Seq ID No. 26) in vivo на уровень глюкозы в крови мышей db/db не натощак: показано различие уровней глюкозы в крови в ммоль/л в зависимости от продолжительности лечения животных различными дозами.

Фигура 4b. Эффект конъюгата гидрогеля на основе HA и двойного агониста (Seq ID No. 26) in vivo на уровень глюкозы в крови мышей db/db не натощак: показано различие уровней глюкозы в крови в ммоль/л в зависимости от продолжительности лечения животных с помощью различных конструкций гидрогеля: на основе растворимой и сшитой гиалуроновой кислоты.

Фигура 4с. Эффект конъюгатов гидрогеля на основе HA и двойных агонистов (Seq ID No. 45, 46 и 48) in vivo на уровень глюкозы в крови мышей db/db не натощак: показан уровень глюкозы в крови в ммоль/л в зависимости от продолжительности лечения животных.

Фигура 4d. Эффект конъюгата гидрогеля на основе HA и двойного агониста (Seq ID No. 49) in vivo на уровень глюкозы в крови мышей db/db не натощак: показан уровень глюкозы в крови в ммоль/л в зависимости от продолжительности лечения животных.

Фигура 5. Исследование способности к введению посредством инъекции: сила выталкивания, прикладываемая к поршню шприца, для гидрогелей на основе HA с различной загрузкой пептида.

Результаты силы выталкивания: Эффект загрузки пептида

Подробное описание

Аминокислотные последовательности по настоящему изобретению содержат обычные однобуквенные и трехбуквенные коды для встречающихся в природе аминокислот, а также общепринятые трехбуквенные коды для других аминокислот, таких как Aib (α-аминоизомасляная кислота).

Более того, следующий код, который использовали для аминокислоты, представлен в нижеприведенной таблице.

Название	Структура	Код
Бета-аланин		Bal
D-аланин		D-Ala

Агонист GLP-1/глюкагона, связанный с линкером, называется «фрагмент агониста GLP-1/глюкагона».

"Защитные группы" относятся к фрагменту, который временно защищает химическую функциональную группу молекулы в ходе синтеза с обеспечением хемоселективности в последующих химических реакциях. Защитными группами для спиртов являются, например, бензил и тритил, защитными группами для аминов являются, например, трет-бутилоксикарбонил, 9-фторенилметилоксикарбонил и бензил, а для тиолов примерами защитных групп являются 2,4,6-триметоксибензил, фенилтиометил, ацетамидометил, п-метоксибензилоксикарбонил, трет-бутилтио, трифенилметил, 3-нитро-2-пиридилтио, 4-метилтритил.

"Защищенные функциональные группы" означают химическую функциональную группу, защищенную защитной группой.

"Ацилирующее средство" означает фрагмент структуры R-(C=O)-, обеспечивающий ацильную группу в реакции ацилирования, необязательно соединенную с уходящей группой, например, хлорангидрид, N-гидроксисукцинимид, пентафторфенол и пара-нитрофенол.

"Алкил" означает прямую или разветвленную углеродную цепь. Каждый атом водорода при алкильном атоме углерода может быть заменен заместителем.

"Арил" относится к любому заместителю, полученному из моноциклического, или полициклического, или конденсированного ароматического кольца, в том числе гетероциклических колец, например, фенила, тиофена, индолила, нафтила, пиридила, которые могут необязательно быть дополнительно замещены.

"Ацил" означает химическую функциональную группу структуры R-(C=O)-, где R представляет собой алкил или арил.

"C_1-4алкил" означает алкильную цепь, содержащую 1-4 атома углерода, например, если присутствует в конце молекулы: метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, или, например -CH₂-, -CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(C₂H₅)-, -C(CH₃)₂-, если два фрагмента молекулы соединены алкильной группой. Каждый атом водорода при атоме углерода C_1-4алкила может быть заменен заместителем.

"C_1-6алкил" означает алкильную цепь, содержащую 1-6 атомов углерода, например, если присутствует в конце молекулы: C_1-4алкил, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил; трет-бутил, н-пентил, н-гексил, или, например, -CH₂-, -CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(C₂H₅)-, -C(CH₃)₂-, если два фрагмента молекулы соединены алкильной группой. Каждый атом водорода при атоме углерода C_1-6алкила может быть заменен заместителем.

Соответственно, "C_1-18алкил" означает алкильную цепь, содержащую 1-18 атомов углерода, а "C_8-18алкил" означает алкильную цепь, содержащую 8-18 атомов углерода. Соответственно, "C_1-50алкил" означает алкильную цепь, содержащую 1-50 атомов углерода.

"Галоген" означает фтор, хлор, бром или йод. В целом, предпочтительно, чтобы галоген представлял собой фтор или хлор.

"Гиалуроновая кислота" означает полимер дисахарида, состоящий из бета-1,3-D-глюкуроновой кислоты, и бета-1,4-N-ацетил-D-глюкозамина, и их соответствующих натриевых солей. Данные полимеры являются линейными

"Дисахаридное звено" означает дисахарид, состоящий из бета-1,3-D-глюкуроновой кислоты, и бета-1,4-N-ацетил-D-глюкозамина, и их соответствующих натриевых солей, и представляет собой мономерную структурную единицу для HA.

"Сшитая гиалуроновая кислота" означает полимер гиалуроновой кислоты, где разные цепи HA ковалентно связаны сшивателем, образуя 3-мерную полимерную сетку. Степень сшивания зависит от молярного отношения дисахаридных звеньев к звеньям сшивателя в полимерной сетке.

Сшитая гиалуроновая кислота может быть получена разными способами. Реакция HA со сшивателем, реакция модифицированной (активированной) HA со сшивателем, реакция двух разных модифицированных HA со сшивателем. Примеры могут быть описаны в Oh et al, Journal of Controlled Release 141 (2010), 2-12. В примере 11 описано сшивание немодифицированной HA с дивинилсульфоном. Дополнительные способы получения сшитой HA также изображены на фигуре 1a, фигуре 1b и фигуре 1c: восстановительное аминирование альдегида (окисление диола) и последующего амина, опосредованное гидроксилом алкилирование, реакция образования амида, сопряженное присоединение по Михаэлю (тиол - малеимид), диол-эпоксидная химия и другие.

"Сшиватель" может представлять собой линейную или разветвленную молекулу или химическую группу, предпочтительно представляет собой линейную молекулу с по меньшей мере химическими функциональными группами на каждом из дистальных концов.

"Функционализированная гиалуроновая кислота" означает полимер гиалуроновой кислоты, где HA химически модифицирована с помощью группы L¹, которая содержит химическую функциональную группу на ее дистальном конце. Степень функционализации зависит от молярного отношения дисахаридных звеньев к звеньям L¹ в полимере.

Термин "химическая функциональная группа" относится без ограничения к карбоновой кислоте и активированным производным, амино, малеимиду, тиолу и производным, сульфоновой кислоте и производным, карбонату и производным, карбамату и производным, гидроксилу, альдегиду, кетону, гидразину, изоцианату, изотиоцианату, фосфорной кислоте и производным, фосфоновой кислоте и производным, галогенацетилу, алкилгалогенидам, акрилоилу и другим альфа-бета-ненасыщенным акцепторам Михаэля, арилирующим средствам, подобным арилфторидам, гидроксиламину, дисульфидам, подобным пиридилдисульфиду, винилсульфону, винилкетону, диазоалканам, диазоацетиловым соединениям, оксирану и азиридину.

Если химическая функциональная группа соединена с другой химической функциональной группой, то образованная в результате химическая структура называется "связь". Например, реакция аминогруппы с карбоксильной группой обеспечивает в результате амидную связь.

"Реакционноспособные функциональные группы" представляют собой химические функциональные группы фрагмента каркаса, которые соединены со сверхразветвленным фрагментом.

"Функциональная группа" является общим термином, применяемым в отношении "реакционноспособной функциональной группы", "разрушаемой связанной функциональной группы" или "сопряженной функциональной группы".

Термины "блокирующая группа" или "кэпирующая группа" применяются синонимично и относятся к фрагментам, которые необратимо связываются с реакционноспособными функциональными группами, делая невозможной их дальнейшую реакцию с, например, химическими функциональными группами.

Термины "защищающая группа" или "защитная группа" относятся к фрагменту, который обратимо связывается с реакционноспособными функциональными группами, делая невозможной их дальнейшую реакцию с, например, другими химическими функциональными группами при конкретных условиях.

Термин "производные" относится к химическим функциональным группам, соответствующим образом замещенным защитными и/или активирующими группами, или к активированным формам соответствующей химической функциональной группы, которые известны квалифицированному специалисту в данной области. Например, активированные формы карбоксильных групп включают без ограничения активные сложные эфиры, например, сложный эфир сукцинимидила, сложный эфир бензотриазила, сложный эфир нитрофенила, сложный эфир пентафторфенила, сложный эфир азабензотриазила, ацилгалогениды, смешанные или симметричные ангидриды, ацилимидазол.

Термин "неферментативно расщепляемый линкер" относится к линкерам, которые гидролитически разрушаются в физиологических условиях без ферментативной активности.

Термины "спейсер", "спейсерная группа", "спейсерная молекула" и "спейсерный фрагмент" применяются взаимозаменяемо, и если применяются для описания фрагмента, присутствующего в гидрогеле-носителе по настоящему изобретению, то относятся к любому фрагменту, пригодному для соединения двух фрагментов, такому как C_1-50алкил, участок которого необязательно прерван одной или несколькими группами, независимо выбранными из -NH-, -N(C_1-4алкила)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)NH-, -C(O)N(C_1-4алкила)-, -O-C(O)-, -S(O)-, -S(O)₂-.

Термины "концевой", "конец" или "дистальный конец" относятся к положению функциональной группы или связи в молекуле или фрагменте, в силу чего такая функциональная группа может быть химической функциональной группой, а связь может быть разрушаемой или стабильной связью, и характеризоваться расположением вблизи или в пределах связи между двумя фрагментами или в конце олигомерной или полимерной цепи.

Фразы "в связанной форме" или "фрагмент" относятся к подструктурам, которые являются частью большей молекулы. Фраза "в связанной форме" применяется для упрощения обозначения фрагментов путем присвоения названия или перечисления реагентов, исходных материалов или предполагаемых исходных материалов, хорошо известных в данной области техники, и в силу чего "в связанной форме" означает, что, например, один или несколько водородных радикалов (-H), или одна или несколько активирующих или защитных групп, присутствующих в реагентах или исходных материалах, отсутствуют во фрагменте.

Понятно, что все реагенты и фрагменты, содержащие полимерные фрагменты, относятся к макромолекулярным структурам, которые, как известно, демонстрируют вариабельность в отношении молекулярного веса, длины цепей, или степени полимеризации, или числа функциональных групп. Структуры, приведенные для сшивающих реагентов и сшивающих фрагментов, таким образом, являются лишь иллюстративными примерами.

Реагент или фрагмент могут быть линейными или разветвленными. Если реагент или фрагмент имеет две концевые группы, то его называют линейным реагентом или фрагментом. Если реагент или фрагмент имеет больше двух концевых групп, то его считают разветвленным или многофункциональным реагентом или фрагментом.

Линкеры, использованные в таких связанных с носителем пролекарствах, являются временными, а это означает, что они являются неферментативно гидролитически разрушаемыми (расщепляемыми) в физиологических условиях (водный буфер с pH 7,4, 37°C), при этом их периоды полураспада находятся в диапазоне от, например, одного часа до трех месяцев.

Термин "пролекарство на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля" относится к связанным с носителем пролекарствам из агониста GLP-1/глюкагона, где носитель представляет собой гидрогель. Термины "пролекарство на основе гидрогеля" и "связанное с гидрогелем пролекарство" относятся к пролекарствам из биологически активных средств, временно связанным с гидрогелем, и применяются взаимозаменяемо.

"Гидрогель" может быть определен как трехмерная гидрофильная или амфифильная полимерная сетка, способная поглощать большие количества воды. Такие сетки состоят из гомополимеров или сополимеров и являются нерастворимыми в связи с наличием ковалентных химических или физических (ионные, гидрофобные взаимодействия, переплетения) поперечных связей. Поперечные связи обеспечивают структуру сетки и физическую целостность. Гидрогели демонстрируют термодинамическую совместимость с водой, которая позволяет им набухать в водных средах. Цепи в сетке соединены таким образом, что имеются поры, и при этом значительная доля данных пор имеет размеры от 1 нм до 1000 нм.

"Свободная форма" лекарственного средства относится к лекарственному средству, в частности, к агонисту GLP-1/глюкагона, в его немодифицированной, фармакологически активной форме, например, после высвобождения из полимерного конъюгата.

Термины "лекарственное средство", "биологически активная молекула", "биологически активный фрагмент", "биологически активное средство", "активное средство" применяют синонимично, и они относятся к агонисту GLP-1/глюкагона, либо в связанной, либо в свободной форме.

"Терапевтически эффективное количество" агониста GLP-1/глюкагона, применяемое в данном документе, означает количество, достаточное для лечения, ослабления или частичного прекращения клинических проявлений данного заболевания и его осложнений. Количество, достаточное для осуществления этого, определяется как "терапевтически эффективное количество". Эффективные количества для каждой цели будут зависеть от тяжести заболевания или травмы, а также веса и общего состояния субъекта. Следует понимать, что определение соответствующей дозировки может быть достигнуто с использованием обычных экспериментов, посредством построения матрицы значений и тестирования различных точек в матрице, все из которых находятся в пределах обычных навыков квалифицированного специалиста.

"Стабильный" и "стабильность" означают, что в течение указанного времени хранения конъюгаты гидрогеля остаются конъюгированными и не гидролизуются в значительной степени, при этом демонстрируют приемлемый профиль примесей относительно агониста GLP-1/глюкагона. Композицию считают стабильной, если она содержит менее 5% лекарственного средства в свободной форме.

Термин "фармацевтически приемлемый" означает одобренный регуляторным органом, например, EMEA (Европа), и/или FDA (США), и/или любым другим национальным регуляторным органом для применения в отношения животных, предпочтительно, людей.

"Фармацевтическая композиция" или "композиция" означает один или несколько активных ингредиентов и один или несколько инертных ингредиентов, а также любой продукт, который образуется, прямо или косвенно, в результате объединения, образования комплекса или агрегации двух или более ингредиентов, или в результате диссоциации одного или нескольких ингредиентов, или в результате других типов реакций или взаимодействий одного или нескольких ингредиентов. Соответственно, фармацевтические композиции по настоящему изобретению охватывают любую композицию, полученную посредством смешивания соединения по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества (фармацевтически приемлемого носителя).

"Сухая композиция" означает, что композиция пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля представлена в сухой форме в контейнере. Подходящими способами для высушивания являются, например, сушка распылением и лиофилизация (сублимационная сушка). Такая сухая композиция пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля характеризуется остаточным содержанием воды максимум 10%, предпочтительно менее 5% и более предпочтительно менее 2% (определено в соответствии с методом Карла Фишера). Предпочтительным способом высушивания является лиофилизация. "Лиофилизированная композиция" означает, что композицию полимерного пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля вначале замораживали, а затем подвергали уменьшению содержания воды посредством пониженного давления. Данная терминология не исключает дополнительные стадии высушивания, которые осуществляют в способе производства перед заполнением конечного контейнера композицией.

"Лиофилизация" (сублимационная сушка) представляет собой процесс обезвоживания, характеризующийся замораживанием композиции, а затем снижением давления окружающей среды и, необязательно, добавлением нагрева, что позволяет замороженной воде в композиции сублимироваться непосредственно из твердой фазы в газ. Как правило, сублимированную воду собирают посредством десублимации.

"Восстановление" означает добавление жидкости к сухой композиции для приведения ее в форму жидкой или суспендированной композиции. Следует понимать, что термин "восстановление" не ограничено добавлением воды, а относится к добавлению любой жидкости, в том числе, например, буферов или других водных растворов.

"Раствор для восстановления" относится к жидкости, применяемой для восстановления сухой композиции пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля перед введением пациенту, который в этом нуждается.

"Контейнер" означает любой контейнер, в котором содержится композиция пролекарства на основе агониста GLP-1/глюкагона и гидрогеля и может храниться до восстановления.

"Буфер" или "буферное средство" относится к химическим соединениям, которые поддерживают pH в необходимом диапазоне. Физиологически допустимыми буферами являются, например, фосфат, сукцинат натрия, гистидин, бикарбонат, цитрат и ацетат, пируват натрия. Также можно применять антациды, например, Mg(OH)₂ или ZnCO₃. Буферную способность можно регулировать для соответствия условиям, наиболее чувствительным к стабильности pH.

"Вспомогательные вещества" относятся к соединениям, которые вводят совместно с терапевтическим средством, например, буферные средства, модификаторы изотоничности, консерванты, стабилизаторы, антиадсорбционные средства, средства защиты от окисления или другие вспомогательные средства. Тем не менее, в некоторых случаях, одно вспомогательное вещество может выполнять двойные или тройные функции.

"Лиопротектор" представляет собой молекулу, которая при соединении с белком, представляющим интерес, в значительной степени предупреждает или снижает химическую и/или физическую нестабильность белка при высушивании в целом и, в частности, в ходе лиофилизации и последующего хранения. Иллюстративные лиопротекторы включают сахара, например, сахарозу или трегалозу; аминокислоты, например, аргинин, глицин, глютамат или гистидин; метиламины, например, бетаин; лиотропные соли, например, сульфат магния; полиолы, например, трехатомные или более высокого порядка сахарные спирты, например, глицерин, эритрит, глицерол, арабит, ксилит, сорбит и маннит; этиленгликоль; пропиленгликоль; полиэтиленгликоль; плюроники; гидроксиалкильные крахмалы, например, гидроксиэтиловый крахмал (HES), и их комбинации.

"Поверхностно-активное вещество" относится к смачивающим средствам, которые снижают поверхностное натяжение жидкости.

"Модификаторы изотоничности" относятся к соединениям, которые сводят к минимуму боль, которая возникает в результате повреждения клеток в связи с разностью осмотического давления в инъекционном депо.

Термин "стабилизаторы" относится к соединениям, применяемым для стабилизации полимерного пролекарства. Стабилизация достигается посредством усиления стабилизирующих белок сил, дестабилизации денатурированного состояния или прямого связывания вспомогательных веществ с белком.

"Антиадсорбционные средства" относятся в основном к ионным или неионным поверхностно-активным веществам, или другим белкам, или растворимым полимерам, применяемым для покрытия внутренней поверхности контейнера с композицией или адсорбции к ней по принципу первенства. Выбранная концентрация и тип вспомогательного вещества зависят от эффекта, которого следует избежать, но, как правило, монослой поверхностно-активного вещества образуется на границе раздела при концентрации чуть выше значения CMC.

"Средства защиты от окисления" относятся к антиоксидантам, таким как аскорбиновая кислота, эктоин, глутатион, метионин, монотиоглицерин, морин, полиэтиленимин (PEI), пропилгаллат, витамин E, хелатирующие средства, такие как лимонная кислота, EDTA, гексафосфат, тиогликолевая кислота.

"Противомикробный" относится к химическому веществу, которое уничтожает микроорганизмы или ингибирует их развитие, например, бактерий, грибов, дрожжей, простейших, и/или обезвреживает вирусы.

"Закупоривание контейнера" означает, что контейнер закрывают таким образом, чтобы он был герметичным, тем самым обеспечивая отсутствие газообмена между наружной частью и внутренней частью и сохранение стерильности содержимого.

Термин "реагент" или "вещество-предшественник" относится к промежуточному соединению или исходному материалу, применяемому в процессе сборки, который обеспечивает пролекарство по настоящему изобретению.