Биологически активная добавка из голотурии и способ её получения

Изобретения относятся к пищевой промышленности, а именно к способу получения биологически активной добавки (БАД) из дальневосточных промысловых голотурий, которая может быть использована для активации иммунной системы и умственной и физической работоспособности. Способ получения БАД из голотурии включает измельчение сырья и его двойное экстрагирование этиловым спиртом, отделение спиртового экстракта. При этом используют голотурии полностью, экстрагирование этиловым спиртом измельченного сырья ведут при соотношении 1:1-1:1,3 кг/л, при температуре 30°-45°С в течение 5-6 часов, остаток после экстрагирования этиловым спиртом отжимают и повторно экстрагируют этиловым спиртом при тех же условиях. Полученные водно-спиртовые фильтраты объединяют и фильтруют. Из объединенного фильтрата отгоняют этиловый спирт под вакуумом до его концентрации не более 10%. Далее полученный водно-спиртовой экстракт, содержащий тритерпеновые гликозиды, используют для приготовления желатиновой массы, из которой формируют оболочку капсул, а внутрь капсул вводят рыбный жир. БАД из голотурии, имеющая форму желатиновых капсул, содержит в составе желатиновой оболочки капсулы 0,015– 0,028 мг тритерпеновых гликозидов и внутри капсулы 0,3 г рыбного жира. Изобретение позволяет расширить ассортимент получаемых БАД за счет сочетания тритерпеновых гликозидов из голотурии и полиненасыщенных жирных кислот омега-3 из рыбного жира. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл.

 

Изобретения относятся к пищевой промышленности, а именно к способам получения биологически активным продуктам из дальневосточных промысловых голотурий, который может быть использован как общеукрепляющая, биологически активная добавка (БАД), предназначенная для активации иммунной системы и умственной и физической работоспособности.

Полученный препарат на основе омега-3 полиненасыщенных жирных кислот и тритерпеновых морских гликозидов представляет из себя новый важный шаг в разработке биологически активных природных комплексов с усиленным фармакологическим действием.

Главными действующими биологически активными веществами голотурий являются тритерпеновые гликозиды, которые обладают профилактическими и лечебными свойствами на организм человека, способствуют восстановлению работы жизненно важных органов, включая функции эндокринных желез, активизируют иммунную систему, создавая предпосылки угнетения роста злокачественных новообразований, способствуют восстановлению работы репродуктивной системы организма (Bordbar S., Anwar F., Saari N. High-Value Components and Bioactives from Sea Cucumbers for Functional Foods - A Review // Mar. Drugs. 2011. Vol. 9, P. 1761-1805; doi:10.3390/md9101761).

Полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК) омега-3 семейства давно известны как средства профилактики и снижения риска сердечно-сосудистых заболеваний и как средства, влияющие на общее снижение воспалительных процессов в организме. А при последних воззрениях на омега-3 кислоты, их относят к препаратам, существенно увеличивающим устойчивость организма при Covid-19 (Hathaway D. «Omega 3 Fatty Acids and COVID-19: A Comprehensive Review» // Infect Chemother. 2020. V.52(4): 478-495, (https://doi.org/10.3947/ic.2020.52.4.478).

Известен способ получения продукта [Патент РФ № 2562595, МПК A61K 35/56, A61P 37/02, опубл. 10.09.2015], обладающего биологически активными свойствами из голотурий, который заключается в освобождении голотурий от внутренних органов, промывании кожно-мускульного мешка, измельчении его до однородной массы, выделении из нее биологически активных компонентов, которое проводят в два этапа, на первом этапе измельченную кожно-мускульную массу смешивают с водой, далее проводят обработку ультразвуком, затем проводят щелочной гидролиз, далее нейтрализуют до pH=7,0, полученный гидролизат сушат, сухой продукт измельчают до порошкообразного состояния, а на втором этапе порошок смешивают с подсолнечным или рапсовым маслом и выдерживают при постоянном перемешивании, полученную жировую суспензию стабилизируют с помощью диспергатора. Вышеописанный способ позволяет получить биологически активный препарат, обладающий хондропротекторными и иммуномодулирующими свойствами.

Недостатки:

1. Способ обеспечивает получение из гидролизата голотурий комплексного препарата, содержащего множество биологических компонентов – полиненасыщенные жирные кислоты, белки, гексозамины, тритерпеновые гликозиды. Причем тритерпеновые гликозиды, в данном случае, не самый важный компонент по мнению авторов.

2. Осуществление способа многостадийно, включает использование растворов щелочи и кислоты, что для пищевых производств нежелательно.

3. Авторы при изготовлении препарата используют кожно-мускульный мешок, пренебрегая внутренностями.

4. Лучший способ количественного извлечения тритерпеновых гликозидов из клеточной матрицы заключается в обработке ткани органическим растворителем, например, этанолом. Другие способы извлечения этих веществ не столь эффективны.

5. Авторы предлагают эмульсию непрозрачную с особенностями цветовой характеристики. Использование данного препарата невозможно для получения качественных мягких желатиновых капсул, поскольку присутствующие примеси не обеспечат прозрачность желатиновой капсулы и сделают ее непривлекательной для потребителя.

6. Конечная форма БАД представлена в виде эмульсии в растительном масле (подсолнечном). Рассуждения о том, что ПНЖК подсолнечного масла очень важны, не оправданы.

7. Авторы изобретения даже не рассматривают возможность синергического эффекта возможности применения рыбного жира, как источника омега-3 полиненасыщенных жирных кислот, и морских тритерпеновых гликозидов.

Известен способ комплексной переработки голотурий [Патент РФ № 2236155, МПК A23L 1/30, A23L 1/305, A23L 1/333, Опубл. 20.09.2004], при котором сырье (трепанг или кукумария) разделывают, удаляют внутренности, венчики и внутрибрюшную пленку и варят в морской, пресной или подсоленной воде. Сушку термически обработанной кукумарии производят при температуре от 10 до 65°C до содержания воды в продукте, равного 5-12%, минеральных веществ 4-8% с получением полуфабриката для производства пищевого продукта. Внутренности голотурии подвергают стечке, легкой подпрессовке, подмораживанию, измельчению и сушке. Полученную кормовую биологически активную добавку используют как средство, повышающее устойчивость животных к инфекционным заболеваниям, в виде добавки к корму. Варочные среды собирают и высушивают до содержания воды 5-12% с получением биологически активной добавки к пище «Акмар». Полученный продукт используют как адаптогенное средство в виде порошка, таблеток, а также в капсулированной форме. Биологически активная добавка «Акмар» представляет собой порошок серого с различными оттенками коричневого цвета, полученный из высушенных вод при комплексной переработке голотурии, и состоит из белка - 32,0-42,0%, воды-5,0-12,0%, минеральных веществ-50,0-55,0% (преобладающими элементами являются кальций, калий, натрий, магний), липидов - 0,05-0,2%, сумма тритерпеновых гликозидов находится в пределах 5000-7000 мкг/г, аминосахаров - 0,5-2,0%.

Недостатки:

1. Осуществление способа не обеспечивает полного извлечения тритерпеновых гликозидов из тканей.

2. Применение остатков (концентратов) от переработки голотурий в интересах питания животных, конечно, приемлемо, но является всего лишь попыткой скрыть невозможность получения настоящих концентратов тритерпеновых гликозидов для потребления человеком.

3. Технология переработки не является глубокой и только предполагает использование голотурий в различных направлениях – и для человека (желательно), и для животных.

4. Содержание липидов в препарате (БАД) – 0,1% - не может являться основой для рекомендации препарата, как источника полиненасыщенных жирных кислот омега-3 серии.

Известен способ получения сухого гидролизата из голотурий [Патент РФ № 2538393, МКП A23L 1/30, A23L 1/305, A23L 1/33, A23J 1/04, опубл. 10.01.2015, бюл. № 1], включающий этапы гидролиза подготовленного сырья с ферментным препаратом не менее 2 ч, сушки гидролизата и измельчения сухого гидролизата в порошок. Новым является то, что в качестве подготовленного сырья используют очищенные от внутренностей и измельченные тушки голотурий; на этапе гидролиза в качестве ферментного препарата используют протеолитический ферментный препарат, выделенный из морских гидробионтов и имеющий протеолитическую активность 3,5-15 ПЕ/г, при соотношении ферментного препарата к подготовленному сырью по массе 1:50-1:200, при этом гидролиз осуществляют в течение 2-8 ч при температуре 18-35ºС; и на этапе сушки используют лиофильную сушку до достижения влажности сухого гидролизата на более 12% мас. Сухой гидролизат в количестве 0,14-0,50 г упаковывают в желатиновые капсулы.

Недостатки:

1. Сырье голотурии, используют, не фракционируя в дальнейшем по классам биологических веществ, тем самым определенно суживая области применения.

2. Использование тушек голотурий, без внутренностей, при получении препарата.

3. Протеолитический фермент «Крусэнзим», как известно, получают из гепатопанкреаса камчатского краба. Это очень устойчивый к температурному воздействию фермент – до +70°С и выше. Инактивация фермента, проводимая по данному способу – 60-65°С – не гарантирует окончание процесса гидролиза в конечном продукте.

4. Использование в процессе лиофильной сушки однозначно увеличивает стоимость продукции, ибо это затратный энергетический и временной процесс.

5. Конечный продукт заведомо содержит незначительное количество тритерпеновых гликозидов, а также не может являться полноценным источником полиненасыщенных жирных кислот омега-3 серии.

Известен способ получения биологически активного продукта из промысловой голотурии Cucumaria japonica [Патент РФ № 2426453, МПК A23L 1/30, A23L 1/325, A61K 35/56, A61P 1/16, опубл. 20.08.2011], заключающийся в освобождении голотурии от внутренних органов, измельчении кожно-мышечного мешка и экстракции гомогената 96%-м этиловым спиртом при соотношении 1: 2 и нагреве в течение 5-6 часов. Экстракт отделяют декантацией, остаток повторно экстрагируют такой же порцией спирта в тех же условиях. Объединенный водно-спиртовой экстракт используют для получения средства «Кумазид», как описано в патенте РФ № 2271820. Оставшийся после экстракции биологический материал высушивают на воздухе при комнатной температуре до отсутствия запаха спирта, а затем вакуумируют до предельно допустимых в пищевых продуктах концентраций спирта, но не выше 0,5% от веса полученного продукта (по данным ГЖХ). Получают твердый материала серого цвета, который подвергают механическому измельчению на дробилке шарового типа в течение 3-5 часов и просеивают через сито до размера частиц готового продукта не более 0,08 мм. Полученный продукт имеет наименование «Кукумариовит».

Недостатки полученного продукта:

1. Препарат представляет собой концентрат белка (70-75%), углеводы (4,5-4,9%), минералы и др.

2. Несмотря на то, что препарат приготовлен из голотурии, Авторы не указывают даже остаточных количеств тритерпеновых гликозидов, хотя их наличие, даже остаточное, должно быть указано.

3. По технохимическому составу в препарате отсутствуют липиды. Таким образом, данный препарат не является источником морских омега-3 жирных кислот.

Наиболее близким техническим решением [Патент РФ № 2271820, МПК A61K 35/56, A61P 37/02, опубл. 20.03.2006, бюл. № 8] к заявляемому техническому решению по количеству существенных признаков является способ получения биологически активной добавки, при котором сырье - потрошеную кукумарию Cucumaria japonica измельчают (пример 1) и экстрагируют этиловым спиртом (соотношение 1 : 2, кг/л) при нагревании в течение 4-х часов, экстракт отделяют, остаток повторно экстрагируют спиртом в тех же условиях, объединенный экстракт центрифугируют, супернатант отделяют, экстрагируют бутанолом, к верхней фазе добавляют раствор холестерина в водно-насыщенном бутаноле, раствор концентрируют, центрифугируют, осадок трижды промывают органическими растворителями (спирт, эфир и др.), центрифугируют, промывают диэтиловым эфиром, высушивают.

Недостатки:

1. Способ позволяет эффективно концентрировать тритерпеновые гликозиды из голотурий, однако технология получения многостадийна, трудоемка и не может являться основой для широкого производства препарата.

2. К сожалению, авторы не могут отказаться от применения в процессе диэтилового эфира. Это резко ограничивает возможности размещения технологии в фармацевтическом производстве, не говоря уже о пищевом.

3. Подход к концентрированию тритерпеновых гликозидов в виде их комплекса с холестерином (молярное соотношение 1 : 2) - не удачная формула для пищевого применения, так как холестерин до сих пор рассматривают, как фактор риска для сердечно-сосудистой системы

4. Продукт по способу практически индивидуальная субстанция, не содержащая липидов, в том числе полиненасыщенных жирных кислот омега-3.

5. Использование данного продукта для получения БАД с омега-3 жирными кислотами невозможно, так как данный комплекс полностью не растворим ни в жире, ни в водной среде и будет вызывать только негативное отношение потребителя к своим внешним не привлекательным данным.

Технической проблемой, решаемой изобретением, является расширение ассортимента БАД (биологически активной добавки) с высокими потребительскими характеристиками, за счет получения препарата, сочетающего в себе присутствие морских тритерпеновых гликозидов в виде оболочки из мягких желатиновых капсул с содержанием внутри неё рыбного жира, как источника полиненасыщенных жирных кислот омега-3 серии (ПНЖК).

Поставленная техническая проблема решается тем, что в известном способе получения биологически активной добавки из голотурии, включающим измельчение сырья, его двойное экстрагирование этиловым спиртом, отделение спиртового экстракта, согласно изобретению, в качестве сырья используют как мышечный мешок, так и внутренности голотурии, экстрагирование этиловым спиртом измельченного сырья ведут при соотношении 1:1-1:1,3 кг/л, при температуре 30°-45°С в течение 5-6 часов. Остаток после экстрагирования этиловым спиртом отжимают и повторно экстрагируют этиловым спиртом при тех же условиях, полученные водно-спиртовые экстракты объединяют и фильтруют, из полученного объединенного фильтрата отгоняют этиловый спирт под вакуумом до его остаточной концентрации в продукте не более 10%; далее полученный водно-спиртовый экстракт, содержащий тритерпеновые гликозиды, используют для приготовления желатиновой массы с дальнейшим капсулированием в нее рыбного жира.

Измельчение голотурии обязательно, поскольку это облегчает процесс экстракции гликозидов, главным образом, экономя время. Измельчение можно проводить как на промышленном волчке, так и на используемой в быту мясорубке. Этого достаточно, чтобы процесс шел интенсивно.

Соотношение компонентов при экстракции голотурия-спирт находится в пределах 1/1 –1/1,3 кг/л. Такая пропорция позволяет извлекать максимальное количество гликозидов, не расходуя при этом излишние количества спирта. Уменьшение объема спирта меньше заявленной нормы не обеспечивает нужную эффективность экстракции, а его увеличение незначительно отражается на извлечении гликозидов.

Проведение повторной экстракции отжатого осадка спиртом (после первой экстракции) позволяет извлечь остаточные количества тритерпеновых гликозидов из тканей голотурии, что, в конечном результате, позволяет получить БАД с высокими потребительскими свойствами.

Процесс экстракции измельченной голотурии спиртом необходимо проводить при температурном режиме от 30°С до 45°С. Повышенная (выше комнатной) температура экстракции ускоряет извлечение тритерпеновых гликозидов из клеточной матрицы и сужает тем самым длительность процесса экстракции (до 5-6 час).

Если снижать температуру менее 30°С, то процесс экстракции может увеличится даже не на часы, а на сутки и, наоборот, повышение температуры свыше 45°С не дает преимуществ для реализации процесса – температура вызывает негативные химические реакции в биологической среде, а главное, не способствует увеличению накопления гликозидов в экстракте и сокращению времени выдерживания смеси.

В комплексе с температурой экстракции, экспериментальным путем было найдено оптимальное время процесса – 5-6 часов, обеспечивающее получение БАД с хорошими потребительскими свойствами. Отклонение от полученных параметров не обеспечивало эффективность процесса. Проведение процесса экстракции менее 5 часов проводило к снижению извлечения гликозидов из сырья, а проведение процесса более 6 часов, не приводило к увеличению насыщения экстракта гликозидами, а только к излишне потраченному времени.

Отгонка спирта до остаточной концентрации не более 10% обеспечивает в дальнейшем его полное удаление и не содержится в конечном продукте, что положительно сказывается на его потребительских характеристиках.

Использование полученного водно-спиртового экстракта голотурии, содержащего тритерпеновые гликозиды, для приготовления желатиновой массы обеспечивает включение тритерпеновых гликозидов в состав оболочки капсул, что не только повышает пищевую ценность целевого продукта, но и обеспечивает ей хорошие органолептические качества, позволяя получить конечный продукт исключительно прозрачной консистенции и содержащий два различных вида биологически активных веществ – тритерпеновые гликозиды и полиненасыщенные жирные кислоты омега-3-серии.

Целесообразно приготовление желатиновой массы для изготовления капсул вести смешением полученного экстракта, содержащего тритерпеновые гликозиды, с желатином, глицерином, сорбиновой кислотой и водой, при температуре 60°С и перемешивании в течение 4-х часов, при следующем соотношении компонентов:

водно-спиртовой экстракт голотурии	300 – 800 г
желатин	850 – 1650 г
глицерин	300 – 550 г
сорбиновая кислота	5,0 г
вода	до 5000 л

Введение в желатиновую массу сорбиновой кислоты позволяет не только удлинить срок хранения получаемой БАД, но и препятствует росту и активности грибов и дрожжей. Использование компонентов в заявленных интервалах обеспечивает в дальнейшем получение желатиновых капсул товарного вида, прозрачных и прочных.

Сырьем могут быть различные виды трепанга, в частности, Apostichopus japonicus, Apostichopus parvimensis, Apostichopus californicus, а также кукумарии, в частности, Cucumaria japonica, Cucumaria glacialis, Cucumaria fraudatrix, Cucumaria calcigera.

Целесообразно в качестве сырья использовать наиболее распространенные, промысловые голотурии, обитающие в дальневосточных морях – трепанг Apostichopus japonicus или кукумарию Cucumaria japonica.

Заявленный технический результат достигается также получением биологически активной добавки из голотурии, характеризующейся тем, что она выполнена в форме желатиновых капсул, полученных способом по любому из пп.1 - 3, при этом внутрь желатиновой оболочки капсулы, содержащей 0,015 – 0,028 мг тритерпеновых гликозидов, вводят 0,3 г рыбного жира, который является источником полиненасыщенных жирных кислот.

Медико-биологические эксперименты показали, что применение в качестве биологически активной добавки, содержащей одновременно ПНЖК и тритерпеновые гликозиды, не только положительно сказывается и на умственной и физической работоспособности человека, но и отмечается улучшение внимательности, памяти, психомоторной координации; регулируется сосудистый тонус капилляров, нормализуя артериальное давление (гипотензивное действие); улучшается функциональное состояние ногтей, кожи, волос. Более того, известно, что морские тритерпеновые гликозиды являются очень мощными природными стимуляторами потенции, которые омолаживают и восстанавливают мужской организм, за счет повышения уровень тестостерона, улучшения кровоснабжения органов малого таза, уменьшения воспаления в простате, увеличения количества и подвижности сперматозоидов.

Экспериментально установлено, что введение в состав оболочки одной капсулы 0,015 – 0,028 мг тритерпеновых гликозидов, и помещение внутрь капсулы 0,3 г рыбного жира, при приеме 6 капсул в день, обеспечивает суточную норму приема этих биологически активных веществ. Это тот уровень, который поможет поддержать здоровье организма.

Изобретение осуществляют следующим образом.

Свежевыловленную или замороженную голотурию (трепанг или кукумарию) 1,0 кг измельчают на волчке целиком с внутренностями и заливают 96%-м этиловым спиртом 1,0-1,3 литра (соотношение 1/1-1/1,3, кг/л).

Процесс экстракции этиловым спиртом обеспечивают при нагревании измельченной массы от 30°С до 45°С в течение 5-6 ч в герметичной емкости.

Полученный спиртовой экстракт фильтруют, осадок заливают таким же количеством спирта и повторяют процедуру заново.

Из объединенного экстракта, содержащего тритерпеновые гликозиды, удаляют спирт отгонкой в вакууме (100 мм рт. ст.) до концентрации спирта 10% (по данным ГЖХ).

Полученный после вакуумирования раствор объемом подвергают декантации с последующей фильтрацией.

После фильтрации водно-спиртовой раствор,содержащий тритерпеновые гликозиды, используют вместо дистиллированной воды при приготовлении желатинового раствора (для капсулирования рыбного жира). при температуре 60^оС, перемешивании в течение 4-х часов, при этом, спиртовой остаток полностью испаряется.

Изготовление мягких желатиновых капсул с введением в них рыбного жира проводят на Капсуляторе - Б3 (Белоруссия). Полученный продукт является БАД (источник морских тритерпеновых гликозидов и омега-3 ПНЖК).

Состав БАД (конечный препарат):

- содержание тритерпеновых гликозидов
(1 капсула, 0,3 г жира, нетто)	0,015-0,028 мг;
- содержание Омега-3 полиненасыщенных жирных кислот
(1 капсула, 0,3 г рыбного жира)	80-85 мг

Полученные капсулы представляют собой мягкую прозрачную желатиновую оболочку с содержанием морских тритерпеновых гликозидов и с внутренним содержанием в капсуле морского жира. Срок хранения капсул (по рекомендации Роспотребнадзора – 2 года).

Изобретение иллюстрируется следующими фигурами и таблицами.

В таблице 1 - приведен количественный выход гликозидов из голотурии Apostichopus japonicus.

Как следует из представленных результатов, использование содержания внутренностей для извлечения гликозидов, значительно повышает выход тритерпеновых гликозидов (по заявляемому методу) из массовых голотурий Apostichopus japonicus.

Количество тритерпеновых гликозидов вели в расчете на голотоксин А1.

Анализы полученных экстрактов на содержание голотоксина А1 проводили в «Национальном научном центре морской биологии им. А.В. Жирмунского» Дальневосточного отделения Российской академии наук (г. Владивосток).

Стандарт голотоксина А1 предоставлен Тихоокеанским институтом биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН (г. Владивосток).

Используемый прибор – жидкостный хроматограф «Shimadzu LC-30Nexera X2» (Япония).

Условия анализа: колонка «Shodex C18P» (2 мм диаметр, 150 мм длина, 5мкм зернение), температура 40С; элюенты: A-метанол, В-вода (оба с добавкой +25 мМ муравьиной кислоты и +22 мМ аммиака), градиент: 0 мин- 50% А+50% В, линейный подъем к 15 минутам до 100% А, детектор – низкотемпературный светорассеивающий детектор ELSD-LT II («Shimadzu», Япония), температура 35°С, давление азота 350kPa.

Расчет голотоксина А1 в пробе проводили, используя калибровочные кривые растворов стандарта.

В таблице 2 – приведены гематологические показатели пациентов.

На фиг. 1 приведена формула голотоксина А1.

На фиг. 2 представлена хроматограмма анализа стандарта голотоксина А1, 100 мкг/мл, объем закола 5 мкл.

На фиг.3 представлена хроматограмма анализа образца экстракта. Образец, объем закола 10 мкл.

На фиг. 4 приведено их совмещение в одном и том же масштабе для дальнейшего расчета количества тритерпеновых гликозидов (Пример 1).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Свежевыловленный трепанг, Apostichopus japonicus, 1,0 кг, измельчают на волчке целиком с внутренностями и заливают 96%-м этиловым спиртом 1,0 л (соотношение 1/1, кг/л).

Процесс экстракции этиловым спиртом проводят при нагревании измельченной массы при 30°С в течение 6 ч в герметичной емкости.

Полученный спиртовой экстракт фильтруют, а осадок заливают таким же количеством спирта (1,0 л) и повторяют процедуру заново.

Из объединенного экстракта удаляют спирт отгонкой в вакууме (100 мм рт. ст.) до концентрации спирта 10% (по данным ГЖХ).

Полученный после вакуумирования раствор, содержащий тритерпеновые гликозиды, объемом 1,1 л подвергают декантации с последующей фильтрацией.

После фильтрации водно-спиртовой раствор, содержащий тритерпеновые гликозиды, используют при приготовлении желатиновой массы (для капсулирования рыбного жира). В мерную емкость наливают 800,0 г полученного водно-спиртового экстракта голотурии л, добавляют 850,0 г желатина, 300,0 г глицерина и 5,0 г сорбиновой кислоты, и доводят до общего объема 5,0 л водой, раствор тщательно перемешивают в течение 4-х часов, при температуре 60°С, при этом спиртовой остаток полностью испаряется. Изготовление мягких желатиновых капсул с содержанием рыбного жира проводят на Капсуляторе-Б3 (Белоруссия). Полученный продукт является БАД (источник морских тритерпеновых гликозидов и омега-3 ПНЖК).

Состав БАД (конечный препарат):

- содержание тритерпеновых гликозидов (голотоксина А1) -

0,015 мг/ 1 капсула;

- содержание в 1 капсуле 0,3 г рыбного жира, нетто, которое включает в пересчете на омега-3 полиненасыщенных жирных кислот - 0,82 мг.

Полученные капсулы представляют собой мягкую желатиновую оболочку, содержащую морские тритерпеновые гликозиды, а внутри в капсулы находится морской жир, являющийся источником ПНЖК.

Внешний вид: мягкая желатиновая капсула с прозрачной оболочкой и светло-желтым рыбным жиром.

Срок хранения капсул (по рекомендации Роспотребнадзора – 2 года).

Пример 2.

Свежевыловленный трепанг, Apostichopus japonicus 1,0 кг, измельчают на волчке целиком с внутренностями и заливают 96%-м этиловым спиртом 1,3 литра (соотношение 1/1,3 кг/л).

Процесс экстракции этиловым спиртом проводят при нагревании измельченной массы при 45°С в течение 5 ч в герметичной емкости.

Полученный водно-спиртовой экстракт фильтруют, а осадок заливают таким же количеством спирта (1,3л) и повторяют процедуру заново.

Далее процесс продолжают как в примере 1. Однако для приготовления желатиновой массы в мерную емкость помещают 300 г полученного водно-спиртового экстракта, добавляют 1650 г желатина, 550 г глицерина, 5,0 г сорбиновой кислоты и добавляют воду до общего объема 5 л. Раствор тщательно перемешивают в течение 4-х часов, при температуре 60⁰С. Капсулирование ведут, как описано в примере 1.

Состав БАД (конечный препарат):

- содержание тритерпеновых гликозидов (голотоксина А1)	0,022 мг/ 1 капсула;
- содержание омега-3 полиненасыщенных жирных кислот
(1 капсула по 0,3 г рыбного жира, нетто)	0,82 мг

Полученные капсулы представляют собой мягкую желатиновую оболочку с содержанием морских тритерпеновых гликозидов и с внутренним содержанием в капсуле морского жира.

Внешний вид: мягкая желатиновая капсула с прозрачной оболочкой и светло-желтым рыбным жиром.

Пример 3.

Свежедобытую кукумарию, Cucumaria japonica, 1,0 кг, измельчают на волчке целиком с внутренностями и заливают 96%-м этиловым спиртом 1,0 литра (соотношение 1/1, кг/л).

Все остальные манипуляции проделывают как в примере 1.

В составе тритерпеновых гликозидов кукумарии главными являются другие гликозиды, чем голотоксин А1, поэтому они были измерены суммарно другим методом (Аминин Д.Л. и др. «Спектрофотометрическое определение стихопозида А из голотурии Stichopus japonicus S. // Антибиотики. 1981. Т 26, № 8, С. 585-588).

Состав БАД (конечный препарат):

- содержание суммарных тритерпеновых гликозидов	0,028 мг/ 1 капсула;
- содержание омега-3 полиненасыщенных жирных кислот
(1 капсула по 0,3 г рыбного жира, нетто)	0,84 мг.

Полученные капсулы представляют собой мягкую желатиновую оболочку, содержащую морские тритерпеновые гликозиды, внутри которой помещен морской жир.

Внешний вид: мягкая желатиновая капсула с прозрачной оболочкой и светло-желтым рыбным жиром.

Пример 4.

Желатиновые капсулы с рыбным жиром, полученные, как в примере 1 были назначены 11-ти пациентам без хронических заболеваний и патологий в острой форме. Состав группы составляли мужчины-добровольцы от 18 до 57 лет. Ежедневный прием составлял шесть желатиновых капсул по 0,3 г рыбного жира и с содержанием тритерпеновых гликозидов 0,15 мг. Продолжительность курса 21 день.

Программа эксперимента была согласована с Этическим комитетом «Национального научного центра морской биологии им. А.В. Жирмунского» Дальневосточного отделения РАН (г. Владивосток).

В таблице 2 приведены результаты эффективности приема биологически активной добавки к пище для коррекции липидного обмена и повышения иммунного статуса. У участников эксперимента перед его началом и после окончания, проводилось исследование липидного спектра крови, а именно – оценивалось содержание в плазме крови уровня общего холестерина (ОХС), холестерина липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), холестерина липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), холестерина липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), триглицеридов (ТГ), а также исследовался уровень тестостерона в крови и определяли спермограмму. Ежедневно контролировалось общее состояние испытуемых (настроение, сон, работоспособность, либидо и др.).

У добровольцев после получения ежедневного приема БАД в составе диеты, удовлетворяющей 25% суточной потребности организма человека в ПНЖК семейства омега-3 и с содержанием не менее 0,15 мг тритерпеновых гликозидов, отмечена тенденция к коррекции показателей липидного обмена и зафиксировано повышение половой активности, физической и умственной работоспособности. Установлено, что на фоне снижения уровня общего холестерина, происходит достоверное снижения холестерина ЛПНП, а также повышение холестерина ЛПВП, достоверность различий этих значения составила 95% (t>2). Это указывает на снижение риска развития атеросклероза.

У испытуемых повышалось количество сперматозоидов в 1 мл спермы на 20,1%, подвижность сперматозоидов увеличивалась на 19,3%, уровень тестостерона в крови повышался на 11,6%. Таким образом, разработанная биологически активная добавка стимулирует сперматогенез и повышает половую активность. Все испытуемые отмечали бодрость в течение суток на фоне повышения у них общей умственной и физической работоспособности и сексуального влечения.

Полученные результаты выявили очевидное благоприятное воздействие включения в рацион питания пациентов с нарушенным липидным обменом БАД с повышенным содержанием ПНЖК семейства омега-3 и тритерпеновых гликозидов.

Таким образом, разработана технология получения двухкомпонентной биологически активной добавки, сочетающей в себе высокое присутствие тритерпеновых гликозидов из дальневосточных голотурий, ценные полиненасыщенные кислоты омега-3 серии и привлекательную для потребителя подачу конечного препарата – исключительно прозрачные мягкие желатиновые капсулы с распределением гликозидов в желатине, а омега-3 кислот в самой капсуле, что невозможно при других подходах. БАД, содержащая одновременно несколько биологически активных веществ, может способствовать существенному продвижению подобных препаратов на рынке. Способ позволяет также расширить ассортимент получаемых БАД за счет введения внутрь капсул различных видов морского жира или ценного растительного масла, или растительного экстракта лекарственного растения.

На основании данного изобретения была окончательно усовершенствована технология получения биологически активной добавки к пище (Омега-3 с Экстрактом трепанга). БАД получила одобрение ФИЦ питания и Роспотребнадзора и зарегистрирована в России, как дополнительный источник тритерпеновых гликозидов и полиненасыщенных жирных кислот омега-3-серии (Свидетельство о государственной регистрации СГР № АМ.01.07.01.003.R.000154.07.20 от 14.07.2020).

1. Способ получения биологически активной добавки из голотурии, включающий измельчение сырья и его двойное экстрагирование этиловым спиртом, отделение спиртового экстракта, отличающийся тем, что в качестве сырья используют голотурии полностью, экстрагирование этиловым спиртом измельченного сырья ведут при соотношении 1:1-1:1,3 кг/л, при температуре 30°-45°С в течение 5-6 часов, остаток после экстрагирования этиловым спиртом отжимают и повторно экстрагируют этиловым спиртом при тех же условиях, полученные водно-спиртовые фильтраты объединяют и фильтруют, из полученного объединенного фильтрата отгоняют этиловый спирт под вакуумом до его концентрации не более 10%; далее полученный водно-спиртовый экстракт, содержащий тритерпеновые гликозиды, используют для приготовления желатиновой массы, из которой формируют оболочку капсул, а внутрь капсул вводят рыбный жир.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что приготовление желатиновой массы ведут смешением водно-спиртового экстракта, содержащего тритерпеновые гликозиды, с желатином, глицерином, бензоатом натрия, сорбиновой кислотой и водой, при температуре 60°С и перемешивании в течение 4-х часов, при следующем соотношении компонентов:

водно-спиртового экстракта голотурии	300–800 г
желатин	850–1650 г
глицерин	300–550 г
сорбиновая кислота	5,0 г
вода	до 5,0 л

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве сырья используют голотурии – трепанг Apostichopus japonicus или кукумарию Cucumaria japonica.

4. Биологически активная добавка из голотурии, характеризующаяся тем, что она имеет форму желатиновых капсул, полученных способом по любому из пп.1-3, при этом внутрь желатиновой оболочки капсулы, содержащей 0,015– 0,028 мг тритерпеновых гликозидов, вводят 0,3 г рыбного жира.