Новые замещенные n'-гидроксикарбамимидоил-1,2,5-оксадиазольные соединения в качестве ингибиторов индоламин-2,3-диоксигеназы (ido)

Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к соединению формулы (Ib) или его фармацевтически приемлемой соли. Где в формуле (Ib) m представляет собой 1 или 2; R выбран из группы, состоящей из: (a) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из: (i) водорода, (ii) -C_1-4алкила, необязательно замещенного одним-двумя -OH, (iii) -C_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -OH; (b) -S(O)₂-NH₂; и (c) -S(O)₂-C_1-4алкила; R¹ независимо выбран из (a) водорода и (b) галогена; и R² независимо выбран из (a) водорода и (b) –OH. Также изобретение относится к фармацевтической композиции и способу лечения на основе соединений формулы (Ib) и их применению. Технический результат – соединения формулы (Ib) в качестве ингибиторов фермента IDO. 6 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

(Ib)

 

Уровень техники настоящего изобретения

Триптофан (Trp) представляет собой незаменимую аминокислоту, требующуюся для биосинтеза белков, ниацина и нейромедиатора 5-гидрокситриптамина (серотонина). Фермент индоламин-2,3-диоксигеназа (IDO) катализирует первую и ограничивающую скорость стадию при расщеплении L-триптофана до N-формил-кинуренина. В человеческих клетках истощение Trp, являющееся результатом активности IDO, представляет собой значимый индуцируемый гамма-интерфероном (EFN-γ) антимикробный эффекторный механизм. Стимуляция IFN-γ индуцирует активацию IDO, которая ведет к истощению Trp, тем самым ограничивая рост Trp-зависимых внутриклеточных патогенов, таких как Toxoplasma gondii и Chlamydia trachomatis. Активность IDO также характеризуется антипролиферативным эффектом в отношении многих опухолевых клеток, и индукция IDO наблюдалась in vivo во время отторжения аллогенных опухолей, что указывает на возможную роль для этого фермента в процессе отторжения опухоли (Daubener, et al, 1999, Adv. Exp. Med. Biol, 467: 517-24; Taylor, et al, 1991, FASEB J., 5: 2516-22).

Наблюдали, что клетки HeLa, культивируемые совместно с лимфоцитами периферической крови (PBL), приобретают ингибирующий иммунные реакции фенотип вследствие повышающей регуляции активности IDO. Полагают, что снижение пролиферации PBL при обработке интерлейкином-2 (IL2) является результатом действия IDO, высвобождаемой опухолевыми клетками в ответ на секрецию IFN-γ PBL. Этот эффект менялся на обратный при обработке 1-метил-триптофаном (IMT), специфическим ингибитором IDO. Предполагали, что активность IDO в опухолевых клетках может служить для нарушения противоопухолевых ответов (Logan, et al, 2002, Immunology, 105: 478-87).

Несколько наборов научных данных говорят о том, что IDO вовлечена в индукцию иммунологической толерантности. Исследования беременности, опухолевой резистентности, хронических инфекций и аутоиммунных заболеваний у млекопитающих показали, что клетки, экспрессирующие IDO, могут подавлять Т-клеточные ответы и способствовать толерантности. Ускоренный катаболизм Trp наблюдался при заболеваниях и нарушениях, ассоциированных с клеточной иммунной активацией, таких как инфекция, злокачественное новообразование, аутоиммунные заболевания и СПИД, а также во время беременности. Например, повышенные уровни IFN и повышенные уровни метаболитов Trp в моче наблюдали при аутоиммунных заболеваниях; предполагалось, что системное или локальное истощение Trp, возникающее при аутоиммунных заболеваниях, может быть связано с дегенерацией и истощающими симптомами этих заболеваний. В подтверждение этой гипотезы высокие уровни IDO наблюдали в клетках, выделенных из синовиальной жидкости артритических суставов. Уровни IFN также являются повышенными у пациентов с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), и возрастающие уровни IFN ассоциируются с ухудшающимся прогнозом. Таким образом, предполагали, что IDO хронически индуцируется ВИЧ-инфекцией и дополнительно повышается оппортунистическими инфекциями, и что хроническая потеря Trp запускает механизмы, ответственные за кахексию, деменцию и диарею, а также, возможно, за иммуносупрессию у пациентов со СПИДом (Brown, et al., 1991, Adv. Exp. Med. Biol, 294: 425-35). В связи с этим, недавно было показано, что ингибирование IDO может повышать уровни вирус-специфических Т-клеток и одновременно снижать количество инфицированных вирусом макрофагов в мышиной модели ВИЧ (Portula et al., 2005, Blood, 106: 2382-90).

Полагают, что IDO играет роль в процессах иммуносупрессии, которые предотвращают отторжение плода в утробе. Более 40 лет назад наблюдали, что во время беременности генетически отличающееся оплодотворенное яйцо млекопитающего выживает вопреки прогнозу с учетом иммунологических реакций при трансплантации ткани (Medawar, 1953, Symp. Soc. Exp. Biol. 7: 320-38).

Анатомическое разделение матери и плода и антигенная незрелость плода не могут полностью объяснить выживание аллотрансплантата плода. Недавнее внимание сфокусировалось на иммунологической толерантности матери. Поскольку IDO экспрессируется клетками синцитиального трофобласта человека, и системная концентрация триптофана падает во время нормальной беременности, была выдвинута гипотеза, что экспрессия IDO в трансплацентарном барьере является необходимой для предотвращения иммунологического отторжения аллотрансплантатов плодов. Для проверки этой гипотезы беременных мышей (несущих сингенные или аллогенные плоды) подвергали воздействию IMT и наблюдали быстрое индуцируемое Т-клетками отторжение всех аллогенных оплодотворенных яиц. Таким образом, оказывается, что при катаболизме триптофана оплодотворенное яйцо млекопитающего подавляет активность Т-клеток и защищает себя от отторжения, и блокирование катаболизма триптофана во время беременности у мышей позволяет материнским Т-клеткам провоцировать отторжение аллотрансплантата плода (Moan, et al., 1998, Science, 281: 1191-3).

Дополнительное доказательство механизма опухолевой иммунорезистентности, основанного на расщеплении триптофана IDO, является результатом наблюдения, что большинство человеческих опухолей конститутивно экспрессируют IDO, и что экспрессия IDO иммуногенными мышиными опухолевыми клетками предотвращает их отторжение предварительно иммунизированными мышами. Этот эффект сопровождается отсутствием накопления специфических Т-клеток в области с опухолью, и он может частично меняться на обратный при системной обработке мышей ингибитором IDO при отсутствии заметной токсичности. Таким образом, предполагали, что эффективность терапевтической вакцинации пациентов с раком можно улучшить посредством одновременного введения ингибитора IDO (Uyttenhove et al., 2003, Nature Med., 9: 1269-74). Также было показано, что ингибитор IDO, 1-МТ, может проявлять синергизм с химиотерапевтическими средствами, снижая опухолевый рост у мышей, что говорит о том, что ингибирование IDO также может усиливать противоопухолевую активность традиционных методов цитотоксической терапии (Muller et al, 2005, Nature Med., 11: 312-9).

Одним механизмом, вносящим вклад в иммунологическую толерантность к опухолям, может являться презентирование опухолевых антигенов толерогенными АРС хозяина. Также была описана подгруппа экспрессирующих человеческую IDO антигенпрезентирующих клеток (АРС), которые коэкспрессировали CD 123 (IL3RA) и CCR6 и ингибировали пролиферацию Т-клеток. Как зрелые, так и незрелые CD 123-положительные дендритные клетки подавляли активность Т-клеток, и эта подавляющая активность IDO блокировалась 1МТ (Munn, et al, 2002, Science, 297: 1867-70). Также было продемонстрировано, что дренирующие опухоль лимфатические узлы (TDLN) мыши содержат субпопуляцию плазмоцитоидных дендритных клеток (pDC), которые конститутивно экспрессируют обеспечивающие иммуносупрессию уровни IDO. Несмотря на то, что они составляют только 0,5% клеток лимфатических узлов, in vitro эти pDC активно подавляли Т-клеточные ответы на антигены, презентируемые самими pDC, а также при доминантном характере наследования подавляли Т-клеточные ответы на сторонние антигены, презентируемые несупрессирующими АРС. В пределах популяции pDC большая часть опосредуемой IDO функциональной супрессорной активности разделена с новой субпопуляцией pDC, коэкспрессирующих маркер В-клеточной линии CD19. Таким образом, была выдвинута гипотеза, что опосредуемая IDO супрессия pDC в TDLN создает локальное микроокружение, которое сильно подавляет противоопухолевые Т-клеточные ответы хозяина (Munn, et al., 2004, J. Clin. Invest, 114(2): 280-90).

IDO расщепляет индольный фрагмент в триптофане, серотонине и мелатонине и запускает выработку нейроактивных и иммунорегулирующих метаболитов, в совокупности известных как кинуренины. Посредством локального истощения триптофана и повышения проапоптотических кинуренинов IDO, экспрессируемая дендритными клетками (DC), может в значительной степени воздействовать на пролиферацию и выживание Т-клеток. Индукция IDO в DC может являться общим механизмом делеционной толерантности, реализуемым регуляторными Т-клетками. Поскольку можно ожидать, что такие толерогенные ответы работают при ряде патофизиологических состояний, метаболизм триптофана и выработка кинуренина могут представлять собой критически важное взаимодействие между иммунной и нервной системами (Grohmann, et al, 2003, Trends Immunol, 24: 242-8). В состояниях перманентной иммунной активации доступность свободного сывороточного Trp уменьшается, и вследствие пониженной выработки серотонина также может оказывать воздействие на серотонинергические функции (Wirleitner, et al., 2003, Curr. Med. Chem., 10: 1581-91).

В свете экспериментальных данных, указывающих на роль IDO в иммуносупрессии, опухолевой резистентности и/или отторжении опухоли, хронических инфекциях, ВИЧ-инфекции, СПИДе (в том числе в его проявлениях, таких как кахексия, деменция и диарея), аутоиммунных заболеваниях или нарушениях (таких как ревматоидный артрит) и иммунологической толерантности, а также предупреждении отторжения плода в утробе, желательными являются терапевтические средства, направленные на подавление расщепления триптофана посредством ингибирования активности IDO. Ингибиторы IDO можно применять для активации Т-клеток и, следовательно, для усиления активации Т-клеток, когда Т-клетки подавляются при беременности, под действием злокачественного новообразования или вируса, такого как ВИЧ. Ингибирование IDO также может являться важной стратегией лечения для пациентов с неврологическими или психоневрологическими заболеваниями или нарушениями, такими как депрессия. Соединения, раскрытые в данном документе, являются пригодными в потенциальном лечении или предупреждении связанных с IDO заболеваний.

Сущность изобретения

В данном документе раскрыты новые соединения формулы (I), которые представляют собой ингибиторы фермента IDO. В данном документе также раскрыты применения этих соединений в потенциальном лечении или предупреждении ассоциированного с IDO заболевания или нарушения. В данном документе также раскрыты композиции, содержащие одно или несколько из соединений. В данном документе дополнительно раскрыты применения этих композиций в потенциальном предупреждении или лечении ассоциированного с IDO заболевания или нарушения.

Подробное описание настоящего изобретения

В настоящем изобретении представлено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли:

где: m представляет собой 0, 1, 2, 3 или 4; n представляет собой 1, 2 или 3; р представляет собой 0, 1, 2 или 3;

W выбран из (a) -CR^aR^b- и (b) -NR^a-; где каждый R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена и (с) C_1-6 алкила, необязательно замещенного -ОН или галогеном;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода;

(b) C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) -ОН, (ii) галогена и (iii) -NH₂;

(c) С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) -ОН и (ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного -OH;

(d) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) -ОН, (3) -О-метила, (4) -С_3-6циклоалкила, (5) -CN, (6) -S(O)₂-С_1-6алкила и (7) гетероциклила,

(iii) -O-C_1-6алкила,

(iv) -ОН,

(v) -С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН или -C_1-6алкилом, и

(vi) 4-, 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) C_1-6алкила и (3) -ОН;

(e) -S(O)₂-NR^dR^e; каждый из R^d и R^e независимо представляет собой водород или С_1-6алкил;

(f) -S(O)₂-С_1-6алкила;

(g) С_4-5циклоалкенила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) оксо, (ii) -C_1-6алкила и (iii) -NH-C_1-6алкила; и

(h) 4-, 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) галогена, (ii) C_1-6алкила, (iii) оксо и (iv) -С(O)-С_1-6алкила, необязательно замещенного -ОН;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена, (с) -CN, (d) С_1-6 алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами галогена, и (е) -O-C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя атомами галогена;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена, (с) ОН и (d) С_1-6алкила, необязательно замещенного -ОН;

или альтернативно две R² группы вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С_3-6 циклоалкил или 4-, 5- или 6-членный гетероцикл;

или альтернативно R² и R^a W вместе с атомами углерода и/или азота, к которым они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членный карбоцикл или гетероцикл;

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена, (с) C_1-6 алкила и (d) O-C_1-6 алкила; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6 алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли:

m представляет собой 1 или 2; n представляет собой 1 или 2; и р представляет собой 0, 1 или 2;

W выбран из (a) -CR^aR^b- и (b) -NR^a-; где каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) C_1-6 алкила, необязательно замещенного ОН;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода;

(b) С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) ОН и (ii) галогена;

(c) С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного ОН;

(d) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) -ОН, (3) -О-метила и (4) -С_3-6циклоалкила,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) С_1-6алкила и (3) -ОН;

(e) -S(O)₂-NH₂;

(f) -S(O)₂-С_1-6алкила; и

(g) 4-, 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) галогена, (ii) С_1-6алкила, (iii) оксо и (iv) -С(O)-С_1-6алкила, необязательно замещенного -ОН;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена и (с) -CN;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН;

или альтернативно две R² группы вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С_3-6 циклоалкил или 4-, 5- или 6-членный гетероцикл;

или альтернативно R² и R^a W вместе с атомами углерода и/или азота, к которым они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членный карбоцикл или гетероцикл;

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6 алкила; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6 алкила.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли:

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода;

(b) С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя -ОН;

(c) С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН;

(d) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) -ОН и (3) гетероциклила,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) С_1-6алкила и (3) -ОН;

(e) -S(O)₂-NH₂;

(f) -S(O)₂-С_1-4алкила; и

(g) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) галогена, (ii) C_1-6алкила и (iii) оксо; и

каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) C_1-4 алкила, необязательно замещенного -OH.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли R представляет собой 5- или 6-членный гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила; где 5- или 6-членный гетероциклил необязательно замещен одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) С_1-6алкила и (ii) оксо.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-4 алкила.

Согласно одному варианту осуществления описанного выше соединения или его фармацевтически приемлемой соли m представляет собой 1 или 2; n представляет собой 1; и р представляет собой 0, 1 или 2;

W выбран из (a) -CR^aR^b- и (b) NR^a-; где каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (i) водорода и (ii) С_1-4алкила;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода;

(b) С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя -ОН;

(c) С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН;

(d) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя -ОН,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из группы, состоящей из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила;

(e) -S(O)₂-NH₂;

(f) -S(O)₂-С_1-4алкила; и

(g) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из группы, состоящей из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН;

или альтернативно две R² группы вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С_3-6 циклоалкил или 4-, 5- или 6-членный гетероцикл;

или альтернативно R² и R^a W вместе с атомами углерода и/или азота, к которым они присоединены, образуют 4-, 5- или 6-членный карбоцикл или гетероцикл;

каждый случай R³ представляет собой водород; и

R⁴ выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-4 алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (Ia) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: m представляет собой 1, 2 или 3; n представляет собой 1 или 2; р представляет собой 0 или 1;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) -ОН и (ii) галогена,

(b) С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН,

(c) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) -ОН и (3) гетероциклила,

(iii) -O-C_1-6алкила,

(iv) -С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН, и

(v) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) С_1-6алкила и (3) -ОН;

(d) -S(O)₂-NR^dR^e; каждый из R^d и R^e независимо представляет собой водород или С_1-6алкил;

(e) -S(O)₂-С_1-6алкил; и

(f) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) галогена и (ii) С_1-6алкила;

R^a выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) C_1-6 алкила, необязательно замещенного -OH,

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена и (с) C_1-6алкила;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) -ОН и (с) С_1-6алкила, необязательно замещенного -ОН; и

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединения формулы (Ia) или его фармацевтически приемлемая соль:

m представляет собой 1 или 2; n представляет собой 1; р представляет собой 0 или 1;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (i) -ОН и (ii) галогена,

(b) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -ОН,

(iii) -С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН, и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) С_1-6алкила и (3) -ОН;

(c) -S(O)₂-NH₂;

(d) -S(O)₂-С_1-6алкила; и

(e) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила;

R^a выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-4 алкила, необязательно замещенного -ОН;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) галогена и (с) С_1-4 алкила;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) -ОН и (с) С_1-4алкила, необязательно замещенного ОН; и

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-4алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (Ib) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: m представляет собой 1 или 2;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-4алкила, необязательно замещенного одним-двумя -ОН,

(iii) -С_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -ОН; и

(b) -S(O)₂-NH₂; и

(c) -S(O)₂-С_1-4алкила;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена; и

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН.

Согласно одному варианту осуществления соединения формулы (Ib) или его фармацевтически приемлемая соль:

m представляет собой 2;

R выбран из группы, состоящей из: (a) -S(O)₂-NH₂, (b) -S(O)₂-CH₃, (с) -S(O)₂-СН₂СН₃ и (d) -S(O)₂-CH₂CH₂CH₃

R¹ выбран из группы, состоящей из (а) водорода, (b) -F и (с) -Cl; и

каждый случай R² представляет собой водород.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (Ic) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: n представляет собой 1 или 2; р представляет собой 0 или 1; q представляет собой 0, 1 или 2; r представляет собой 1 или 2; t представляет собой 0, 1 или 2;

W представляет собой N или CR^a; при условии, если W представляет собой N, р представляет собой 0;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода,

(b) -(C=O)-R^c, где R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -ОН,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) С_1-6алкила и (3) -ОН;

(c) -S(O)₂-NR^dR^e; каждый из R^d и R^e независимо представляет собой водород или С_1-6алкил; и

(d) -S(O)₂-С_1-6алкила;

каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6алкила, необязательно замещенного -ОН;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН; и

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединения формулы (Ic) или его фармацевтически приемлемая соль:

n представляет собой 1 или 2; р представляет собой 0 или 1; q представляет собой 0; r представляет собой 1 или 2; t представляет собой 0, 1 или 2;

W представляет собой N или CR^a; при условии, если W представляет собой N, р представляет собой 0;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода,

(b) -(C=O)-R^c, где R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -OH,

(iii) -О-С_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила;

(c) -S(O)₂-NH₂; и

(d) -S(O)₂-С_1-4алкила;

каждый случай R^a и R^b представляет собой водород;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН; и

каждый случай R³ представляет собой водород.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (Id) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: r представляет собой 1 или 2; t представляет собой 1 или 2;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода;

(b) -(C=O)-R^c, где R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -OH,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, триазолила и тиазолила;

(c) -S(O)₂-NH₂; и

(d) -S(O)₂-С_1-4алкила;

каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-4алкила;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена; и

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (Iе) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: n представляет собой 1 или 2; р представляет собой 0 или 1; r представляет собой 1 или 2; t представляет собой 0, 1 или 2;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода,

(b) -(C=O)-R^c, где R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -OH,

(iii) -O-C_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, необязательно замещенного одним-четырьмя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена, (2) О-балкила и (3) -ОН;

(c) -S(O)₂-NR^dR^e; каждый из R^d и R^e независимо представляет собой водород или С_1-6алкил; и

(d) -S(O)₂-С_1-6алкила;

каждый случай R^a и R^b независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) C_1-6 алкила, необязательно замещенного -ОН;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена;

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) -ОН; и

каждый случай R³ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) С_1-6алкила.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I) характеризуется формулой (If) или его фармацевтически приемлемая соль:

где: r представляет собой 1 или 2; t представляет собой 0, 1 или 2;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) водорода,

(b) -(C=O)-R^c, где R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -С_1-6алкила, необязательно замещенного одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из (1) галогена и (2) -OH,

(iii) -О-С_1-6алкила и

(iv) 5- или 6-членного гетероциклила, выбранного из пиридинила, пиримидинила, пиперидинила, пирролидинила, триазолила и тиазолила;

(c) -S(O)₂-NH₂; и

(d) -S(O)₂-С_1-6алкила;

каждый случай R^a и R^b представляет собой водород;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (а) водорода и (b) галогена; и

каждый случай R² представляет собой водород.

Согласно одному варианту осуществления раскрытое в настоящем изобретении соединение выбрано из группы, состоящей из соединений, представленных в примерах 1-67; или его фармацевтически приемлемая соль.

Также в настоящем изобретении раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I, (Ia) или (Ib) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

Также в настоящем изобретении раскрыт способ ингибирования активность индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), причем способ предусматривает приведение в контакт IDO с соединением формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемой солью.

Также в настоящем изобретении раскрыт способ ингибирования иммунодепрессии у пациента, причем способ предусматривает введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемой соли.

В данном документе также раскрыт способ лечения рака, вирусной инфекции, депрессии, нейродегенеративного нарушения, травмы, разновидности старческой катаракты, отторжения трансплантированных органов или аутоиммунного заболевания у пациента, предусматривающий введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемой соли.

В данном документе также раскрыт способ лечения меланомы у пациента, предусматривающий введение указанному пациенту эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Дополнительно в настоящем изобретении раскрыто соединение формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии. Согласно одному варианту осуществления раскрыто применение соединения формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для применения в терапии.

Используемый в настоящем описании «алкенил» относится к ненасыщенным алифатическим углеводородным группам как с разветвленной, так и не разветвленной цепью из 2 - 12 атомов углерода и содержащим по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод. Алкенильные группы могут быть необязательно замещенными одним или несколькими определенными выше заместителями. Примеры таких групп включают в себя без ограничения этенил, пропенил, н-бутенил, 3-метилбут-2-енил, н-пентенил, октенил и деценил. «С_2-6алкенил» относится к алкенильной группе, как определено в настоящем описании, содержащей от 2 до 6 атомов углерода.

«Алкил» относится к насыщенным алифатическим углеводородным группам как с разветвленной, так и не разветвленной цепью из 1-18 атомов углерода или более конкретно из 1-12 атомов углерода. Примеры таких групп включают в себя без ограничения метил (Me), этил (Et), н-пропил (Pr), н-бутил (Bu), н-пентил, н-гексил и их изомеры, такие как изопропил (i-Pr), изобутил (i-Bu), втор-бутил (s-Bu), трет-бутил (t-Bu), изопентил и изогексил. Алкильные группы могут быть необязательно замещенными одним или несколькими заместителями, как определено в настоящем описании. «С_1-6алкил» относится к алкильной группе, как определено в настоящем описании, содержащей от 1 до 6 атомов углерода.

«Арил» относится к ароматическому моноциклическому или полициклическому кольцевому фрагменту, содержащему от 6 до 14 кольцевых атомов углерода или более конкретно от 6 до 10 кольцевых атомов углерода. Моноциклические ар ильные кольца включают в себя без ограничения фенил. Полициклические кольца включают в себя без ограничения нафтильные и бициклические кольца, где фенил конденсирован с С_5-7циклоалкильным или С_5-7циклоалкенильным кольцом. Арильные группы могут быть необязательно замещенными одним или несколькими заместителями, как определено в настоящем изобретении. Связь может быть через любой из атомов углерода любого кольца.

«Гало» или «галоген» относится к фтору, хлору, брому или йоду, если не отмечено иное.

«Гетероцикл» или «гетер оциклил» относится к насыщенному, частично ненасыщенному или ароматическому кольцевому фрагменту, содержащему по меньшей мере один кольцевой гетероатом и по меньшей мере один кольцевой атом углерода. Согласно одному варианту осуществления гетероатомом является кислород, сера или азот. Гетероцикл, содержащий более одного гетероатома, может содержать различные гетероатомы. Гетероциклильные фрагменты включают в себя как моноциклические, так и полициклические (например, бициклические) кольцевые фрагменты. Бициклические кольцевые фрагменты включают в себя конденсированные, спироциклические и бициклические с мостиковыми связями кольца и могут содержать один или несколько гетероатомов в любом из колец. Кольцо, присоединенное к остатку молекулы, может содержать или не содержать гетероатом. Любое кольцо бициклического гетероцикла может быть насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим. Гетероцикл может быть присоединен к остатку молекулы через кольцевой атом углерода, кольцевой атом кислорода или кольцевой атом азота. Неограничивающие примеры гетероциклов описаны ниже.

Согласно одному варианту осуществления частично ненасыщенные и ароматические 4-7-членные моноциклические гетероциклильные фрагменты включают в себя без ограничения 2,3-дигидро-1,4-диоксинил, дигидропиранил, дигидропиразинил, дигидропиридазинил, дигидропиридинил, дигидропиримидинил, дигидротриазолил, фуранил, имидазолил, изотиазолил, изоксазолил, оксадиазолил, оксазолил, оксоимидазолидинил, пиранил, пиразинил, пиразолил, пиридазинил, пиридинил, пиримидинил, пирролил, тетрагидропиразинил, тетрагидропиридазинил, тетрагидропиридинил, тетрагидропиримидинил, тетразолил, тиадиазолил, тиазолил, тиенил, тиофенил и триазолил.

Согласно одному варианту осуществления насыщенные 4-7-членные моноциклические гетероциклилильные фрагменты включают в себя без ограничения азетидинил, 1,4-диоксанил, гексагидроазепинил, морфолинил, 1,4-оксазепанил, оксазолидинил, оксетанил, пиперазинил, пиперидинил, пиридин-2-онил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, тетрагидротиенил и тетрагидротиофенил. Согласно одному варианту осуществления насыщенный 4-7-членный моноциклический гетероциклил представляет собой азетидинил.

Гетероциклические группы могут быть необязательно замещенными одним или несколькими заместителями, как определено выше.

«Необязательно замещенный» относится к «незамещенному или замещенному» и, таким образом, описанные в настоящем изобретении общие структурные формулы охватывают соединения, содержащие конкретный(е) необязательный(е) заместитель(и), а также соединения, которые не содержат необязательный(е) заместитель(и). Каждый заместитель независимо определен каждый раз и встречается в пределах определений общей структурной формулы.

Полиморфизм

Соединение формулы (I), включая его соль или сольват, может существовать в кристаллической форме, не кристаллической форме или их смеси. Соединение или его соль или сольват также может проявлять полиморфизм, т.е. способность встречаться в различных кристаллических формах. Такие различные кристаллические формы типично известны как «полиморфы». Полиморфы обладают одинаковой химической композицией, но отличаются в упаковке, геометрическом расположении и другими иллюстративными свойствами кристаллического твердого состояния. Таким образом, полиморфы могут обладать различными физическими свойствами, такими как форма, плотность, твердость, способность к деформации, стойкость и свойства растворения. Полиморфы типично проявляют различные точки плавления, спектры IR и порошковые рентгеновские дифрактограммы, все из которых могут быть использованы для идентификации. Специалист настоящей области техники отметит, что могут быть получены различные полиморфы, например, изменением или регулированием условий, используемых при кристаллизации/перекристаллизации соединения формулы (I).

Оптические изомеры - Диастереомеры - Геометрические изомеры - Таутомеры

В настоящее изобретение включены различные изомеры соединений формулы (I). Термин «изомеры» относится к соединениям, которые обладают той же композицией и молекулярной массой, но отличаются по физическим и/или химическим свойствам. Структурное различие может быть в строении (геометрические изомеры) или в способности вращать плоскость поляризованного света (стереоизомеры).

Что касается стереоизомеров, соединение формулы (I) может содержать один или несколько асимметрических атомов углерода и может встречаться в виде смесей (таких как рацемическая смесь) или в виде отдельных энантиомеров или диастереомеров. Все такие изомерные формы включены в настоящее изобретение, включая их смеси. Если соединение формулы (I) содержит двойную связь, заместитель может быть в Е или Z конфигурации. Если соединение формулы (I) содержит дизамещенный циклоалкил, циклоалкильный заместитель может обладать цис- или транс-конфигурацией. Также предусмотрено, что все таутомерные формы включены.

Любой асимметрический атом (например, углерод) соединения формулы (I) может присутствовать в рацемической смеси или энантиомерно обогащенной, например, (R)-, (S)- или (R,S)-конфигурации. Согласно определенным вариантам осуществления каждый асимметрический атом обладает по меньшей мере 50% энантиомерным избытком, по меньшей мере 60% энантиомерным избытком, по меньшей мере 70% энантиомерным избытком, по меньшей мере 80% энантиомерным избытком, по меньшей мере 90% энантиомерным избытком, по меньшей мере 95% энантиомерным избытком или по меньшей мере 99% энантиомерным избытком в (R)- или (S)-конфигурации. Заместители при атомах с ненасыщенными двойными связями может, по возможности, присутствовать в цис- (Z)- или транс- (Е)-форме.

Соединение формулы (I) может быть в форме одного из возможных изомеров, ротамеров, атропоизомеров, таутомеров или их смесей, например, в виде в основном чистых геометрических (цис или транс) изомеров, диастереомеров, оптических изомеров (антиподов), рацематов или их смесей.

Любые полученные смеси изомеров могут быть разделены на основе физико-химических различий составляющих на чистые или в основном чистые геометрические или оптические изомеры, диастереомеры, рацематы, например, методом хроматографии и/или фракционной кристаллизацией.

Любые полученные рацематы конечных соединений примеров или промежуточных соединений могут быть расщеплены на оптические антиподы известными способами, например, разделением их диастереомерных солей, полученных с оптически активной кислотой или основанием, и освобождением оптически активного кислотного или основного соединения. В частности, основный фрагмент таким образом может быть использован для расщепления соединений по настоящему изобретению на их оптические антиподы, например, фракционной кристаллизацией, или соль, образованную с оптически активной кислотой, например, виннокаменной кислотой, дибензоилвиннокаменной кислотой, диацетилвиннокаменной кислотой, ди-O,O'-пара-толуоилвиннокаменной кислотой, миндальной кислотой, яблочной кислотой или камфор-10-сульфоновой кислотой. Рацемические соединения также могут быть расщеплены методой хиральной хроматографии, например, жидкостной хроматографией высокого давления (HPLC), с применением хирального адсорбента.

Некоторые описанные в настоящем изобретении соединения могут существовать с различными точками присоединения водорода, они рассматриваются как таутомеры. Например, соединения, включая карбонил-СН₂С(О)-группы (кето-формы), могут подвергаться таутомерии с образованием гидроксил-СН=С(ОН)-групп (енольных форм). Как кето-, так и енольные формы, отдельно, а также в виде их смесей, включены в объем настоящего изобретения.

Изотопные вариации

Соединения формулы (I) включают в себя немеченые формы, а также изотопно меченые формы. Изотопно меченые соединения обладают структурами, изображенными формулами, представленными в настоящем изобретении, за исключением того, что один или несколько атомов заменены атомом с выбранной атомной массой или массовым числом. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения, раскрытые в настоящем описании, включают в себя изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора, йода и хлора, такие как ²Н (т.е., дейтерий или «D»), ³Н, ¹¹С, ¹³С, ¹⁴С, ¹³N, ¹⁵N, ¹⁵О, ¹⁷О, ¹⁸О, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F, ¹²³I, ¹²⁵I и ³⁶Cl. Настоящее изобретение включает в себя различные изотопно меченые соединения, как определено в настоящем описании, например, такие, в которых присутствуют радиоактивные изотопы, такие как ³Н и ¹⁴С, или такие, в которых присутствуют не радиоактивные изотопы, такие как ²Н и ¹³С. Такие изотопно меченые соединения применимы в изучениях метаболизма (с ¹⁴С), изучениях кинетической реакции (с, например ²Н или ³Н), методиках определения или получения изображения, таких как позитронно-эмиссионная томография (PET) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (SPECT), включая анализы распределения в тканях лекарственного средства или субстрата, или в радиоактивном лечении пациентов. В частности, замещение позитронно-активными изотопами, такими как ¹¹С, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, может быть особым образом желательным для PET или SPECT изучений.

Изотопно меченые соединения формулы (I) обычно могут быть получены традиционными методиками, известными специалистам настоящей области техники. Более того, замещение более тяжелыми изотопами, в частности дейтерием (т.е., ²Н или D), может приводить к определенным терапевтическим преимуществам, возникающих в результате большей устойчивости в процессе метаболизма, например, повышенный in vivo период полураспада или требования пониженной дозировки или улучшение терапевтического индекса.

Фармацевтически приемлемые соли

Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли, полученной из фармацевтически приемлемого не токсичного основания или кислоты, включая неорганические или органическое основание и неорганическую или органическую кислоту. Соли, полученные из неорганических оснований, включают в себя алюминий, аммоний, кальций, медь, трехвалентное железо, двухвалентное железо, литий, магний, марганцевые соли, двухвалентный марганец, калий, натрий, цинк и т.п. Конкретные варианты осуществления включают в себя аммонийные, кальциевые, магниевые, калиевые и натриевые соли. Соли в твердой форме могут существовать в более чем одной кристаллической структуре и также могут быть в форме гидратов. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований включают в себя соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая замещенные амины природного происхождения, циклические амины и основные ионообменные смолы, такие как аргинин, бетаин, кофеин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п.

Если соединение формулы (I) является основным, соль может быть получена из фармацевтически приемлемой нетоксичной кислоты, включая неорганическую и органическую кислоту. Такие кислоты включают в себя уксусную, бензолсульфоновую, бензойную, камфорсульфоновую, лимонную, этансульфоновую, фумаровую, глюконовую, глутаминовую, бромистоводородную, хлористоводородную, изэтиновую, молочную, малеиновую, яблочную, миндальную, метансульфоновую, муциновую, азотную, памовую, пантотеновую, фосфорную, янтарную, серную, виннокаменную, пара-толуолсульфоновую кислоту, трифторуксусную кислоту (TFA) и т.п. Конкретные варианты осуществления включают в себя лимонную, бромистоводородную, хлористоводородную, малеиновую, фосфорную, серную, фумаровую, виннокаменную и трифторуксусную кислоты. Будет понятно, что подразумевается, что используемые в настоящем описании ссылки на раскрытые в настоящем изобретении соединения также включают в себя их фармацевтически приемлемые соли.

Способы применения

Соединения согласно настоящему изобретению могут ингибировать активность фермента индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO). Например, соединения, раскрытые в данном документе, можно потенциально применять для ингибирования активности IDO в клетке или у индивида, нуждающегося в модуляции фермента посредством введения эффективного количества соединения. В данном документе дополнительно раскрыты способы ингибирования расщепления триптофана в системе, содержащей клетки, которые экспрессируют IDO, такой как ткань, живой организм или клеточная культура. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее изобретение относится к способам изменения (например, повышения) уровней внеклеточного триптофана у млекопитающего посредством введения эффективного количества соединения или композиции, представленных в данном документе. Способы измерения уровней триптофана и расщепления триптофана являются стандартными в уровне техники.

В данном документе также раскрыты способы ингибирования иммуносупрессии, такой как опосредованная IDO иммуносупрессия, у пациента посредством введения пациенту эффективного количества соединения или композиции, изложенных в данном документе. Опосредованная IDO иммуносупрессия была ассоциирована, например, с разновидностями рака, опухолевым ростом, метастазированием, вирусной инфекцией, репликацией вируса и т.д.

В данном документе также раскрыты способы лечения заболеваний, ассоциированных с активностью или экспрессией, в том числе аномальной активностью и/или сверхэкспрессией, IDO у индивида (например, пациента), посредством введения индивиду, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества или дозы соединения, раскрытого в данном документе, или его фармацевтической композиции. Иллюстративные заболевания могут включать в себя любое заболевание, нарушение или состояние, которое может быть непосредственно или опосредованно связано с экспрессией или активностью фермента IDO, как например, со сверхэкспрессией или аномальной активностью. Ассоциированное с IDO заболевание также может включать в себя любое заболевание, нарушение или состояние, предупреждение, ослабление или излечение которых могут быть обеспечены посредством модуляции активности фермента. Примеры ассоциированных с IDO заболеваний включают в себя рак, вирусную инфекцию, такую как ВИЧ и HCV (вирус гепатита С), депрессию, нейродегенеративные нарушения, такие как болезнь Альцгеймера и болезнь Хантингтона, травму, разновидности старческой катаракты, трансплантацию органов (например, отторжение трансплантированных органов) и аутоиммунные заболевания, в том числе астму, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, аллергическое воспаление, воспалительное заболевание кишечника, псориаз и системную красную волчанку. Примеры разновидностей рака, которые можно потенциально лечить с помощью способов в данном документе, включают в себя рак ободочной кишки, поджелудочной железы, молочной железы, предстательной железы, легкого, головного мозга, яичника, шейки матки, яичек, почки, головы и шеи, лимфому, лейкоз, меланому и т.п.Соединения согласно настоящему изобретению также могут быть пригодными в лечении ожирения и ишемии. Предполагается, что в контексте данного документа термин «клетка» относится к клетке, которая находится in vitro, ex vivo или in vivo. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка ex vivo может представлять собой часть образца ткани, вырезанного из организма, такого как млекопитающее. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка in vitro может представлять собой клетку в клеточной культуре. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления клетка in vivo представляет собой клетку, живущую в организме, таком как млекопитающее.

В контексте данного документа термин «контакт» относится к объединению указанных фрагментов в in vitro системе или in vivo системе. Например, «контакт» фермента IDO с соединением, раскрытым в данном документе, включает в себя введение соединения согласно настоящему изобретению индивиду или пациенту, такому как человек, а также, например, введение соединения согласно настоящему изобретению в образец, содержащий клеточный или очищенный препарат, содержащий фермент IDO.

Субъект, которому вводят соединение, раскрытое в данном документе, или его фармацевтически приемлемую соль, обычно представляет собой млекопитающее, такое как человек, мужчина или женщина. Субъект также относится к коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мышам, рыбам и птицам. В соответствии с одним вариантом осуществления субъект представляет собой человека.

В контексте данного документа термины «лечение» и «осуществление лечения» относятся ко всем процессам, при которых может присутствовать замедление, прерывание, задержка, контроль или прекращение развития заболевания или нарушения, которые могут быть ассоциированы с активностью фермента IDO. Термины не обязательно указывают на полное устранение всех симптомов заболевания или нарушения. Термины также включают в себя потенциальную профилактическую терапию упомянутых состояний, в особенности, у субъекта, который предрасположен к такому заболеванию или нарушению.

Следует понимать, что термины «введение» и/или «осуществление введения» соединения включают в себя обеспечение субъекта соединением, описанным в данном документе, или его фармацевтически приемлемой солью и композицией с вышеуказанным.

Количество соединения, вводимого субъекту, представляет собой количество, достаточное для ингибирования активности фермента IDO у субъекта. В соответствии с вариантом осуществления количество соединения может составлять «эффективное количество», при этом заявленное соединение вводят в количестве, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ в ткани, системе, у животного или человека, которого добивается исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист. Эффективное количество не обязательно учитывает вопросы токсичности и безопасности, связанные с введением соединения. Считают, что специалист в данной области техники может оказывать воздействие на физиологические нарушения, ассоциированные с активностью фермента IDO, посредством лечения субъекта, в настоящее время пораженного нарушениями, или посредством профилактического лечения субъекта, который, вероятно, поражен нарушениями, с использованием эффективного количества соединения, раскрытого в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли.

Эффективное количество соединения будет варьировать в зависимости от конкретного выбранного соединения (например, с учетом активности, эффективности и/или периода полувыведения соединения); выбранного пути введения; состояния, лечение которого осуществляют; тяжести состояния, лечение которого осуществляют; возраста, роста, массы и физического состояния субъекта, получающего лечение; анамнеза субъекта, получающего лечение; продолжительности лечения; природы одновременно осуществляемой терапии; желаемого терапевтического эффекта и подобных факторов, и его может стандартным способом определить квалифицированный специалист.

Соединения, раскрытые в данном документе, можно вводить посредством любого подходящего пути, в том числе посредством перорального и парентерального введения. Парентеральное введение, как правило, осуществляют посредством инъекции или инфузии, и оно включает в себя внутривенную, внутримышечную и подкожную инъекцию или инфузию.

Соединения, раскрытые в данном документе, можно вводить однократно или в соответствии со схемой дозирования, при которой ряд доз вводят с переменными интервалами времени в течение заданного периода времени. Например, дозы можно вводить один, два, три или четыре раза в сутки. Дозы можно вводить до тех пор, пока не будет достигнут терапевтический эффект, или в течение неопределенного периода времени для поддержания желаемого терапевтического эффекта. Подходящие схемы дозирования для соединения, раскрытого в данном документе, зависят от фармакокинетических свойств этого соединения, таких как абсорбция, распределение и период полувыведения, которые могут быть определены квалифицированным специалистом. Кроме того, для соединения, раскрытого в данном документе, подходящие схемы дозирования, в том числе продолжительность таких схем, назначают в зависимости от заболевания или состояния, лечение которых осуществляют, тяжести заболевания или состояния, возраста и физического состояния субъекта, получающего лечение, анамнеза субъекта, получающего лечения, природы одновременно осуществляемой терапии, желаемого терапевтического эффекта и подобных факторов в рамках знаний и опыта квалифицированного специалиста. Кроме того, таким квалифицированным специалистам будет понятно, что подходящие схемы дозирования могут требовать коррекции с учетом ответа отдельного субъекта на схему дозирования или со временем, если отдельный субъект нуждается в изменении. Типичные суточные дозы могут варьировать в зависимости от конкретного выбранного пути введения. Типичные суточные дозы в случае перорального введения человеку массой примерно 70 кг будут находиться в диапазоне от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 2 грамм, или, более конкретно, от 0,1 мг до 500 мг, или, еще более конкретно, от 0,2 мг до 100 мг соединения формулы (I).

Один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с активностью фермента IDO, включающему введение эффективного количества соединения формулы (I) субъекту, нуждающемуся в их лечении. В соответствии с одним вариантом осуществления заболевание или нарушение, ассоциированное с ферментом IDO, представляет собой нарушение клеточной пролиферации.

В соответствии с одним вариантом осуществления в данном документе раскрыто применение соединения формулы (I) в терапии. Соединение может быть пригодным в способе ингибирования активности фермента IDO у субъекта, такого как млекопитающее, нуждающегося в таком ингибировании, включающем введение эффективного количества соединения субъекту.

В соответствии с одним вариантом осуществления в данном документе раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в потенциальном лечении нарушения или заболевания, связанного с активностью фермента IDO.

Композиции

Предполагается, что термин «композиция» в контексте данного документа охватывает лекарственную форму, содержащую определенное соединение в определенном количестве, а также любую лекарственную форму, которая получена в результате, непосредственно или опосредованно, из комбинации определенного соединения в определенном количестве. Предполагается, что такой термин охватывает лекарственную форму, содержащую соединение формулы I, (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных средств. Соответственно, композиции согласно настоящему изобретению охватывают любую композицию, получаемую посредством смешивания соединения согласно настоящему изобретению и одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных средств. Под термином «фармацевтически приемлемый» подразумеваются носители или вспомогательные средства, совместимые с соединением, раскрытым в данном документе, и с другими ингредиентами композиции.

В соответствии с одним вариантом осуществления в данном документе раскрыта композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных средств. Композицию можно получать и упаковывать в насыпной форме, при этом эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению можно экстрагировать, а затем давать субъекту, как например, с порошками или сиропами. В качестве альтернативы, композицию можно получать и упаковывать в стандартной лекарственной форме, при этом каждая физически отдельная единица содержит эффективное количество соединения формулы (I). При получении в стандартной лекарственной форме композиция согласно настоящему изобретению, как правило, содержит от приблизительно 0,1 мг до 2 грамм, или, более конкретно, от 0,1 мг до 500 мг, или, еще более конкретно, от 0,2 мг до 100 мг соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Соединение, раскрытое в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное(вспомогательные) средство(средства), как правило, будут составлены в лекарственную форму, адаптированную для введения субъекту посредством желаемого пути введения. Например, лекарственные формы включают в себя адаптированные для (1) перорального введения, как например, таблетки, капсулы, капсуловидные таблетки, пилюли, пастилки, порошки, сиропы, эликсиры, суспензии, растворы, эмульсии, саше и крахмальные облатки; и (2) парентерального введения, как например, стерильные растворы, суспензии и порошки для восстановления. Подходящие фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные средства будут варьировать в зависимости от конкретной выбранной лекарственной формы. Кроме того, подходящие фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные средства можно выбрать, исходя из конкретной функции, для которой они могут служить в композиции. Например, определенные фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные средства можно выбрать на основании их способности содействовать получению однородных лекарственных форм. Определенные фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные средства можно выбрать на основании их способности к облегчению получения стабильных лекарственных форм. Определенные фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные средства можно выбрать на основании их способности к облегчению переноса или транспорта соединения, раскрытого в данном документе, после введения субъекту из одного органа или части тела в другой орган или другую часть тела. Определенные фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества можно выбрать на основании их способности к улучшению соблюдения пациентом режима и схемы лечения.

Подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные средства включают в себя следующие типы вспомогательных средств: разбавители, смазывающие средства, связующие средства, разрыхлители, наполнители, вещества, способствующие скольжению, гранулирующие средства, покровные средства, смачивающие средства, растворители, сорастворители, суспендирующие средства, эмульгаторы, подсластители, ароматизаторы, маскирующие вкус средства, окрашивающие средства, средства, предотвращающие слеживание, увлажняющие средства, комплексообразующие средства, пластификаторы, повышающие вязкость средства, антиоксиданты, консерванты, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества и буферные средства.

Квалифицированный специалист в данной области техники обладает знаниями и навыками в области техники для выбора подходящих фармацевтически приемлемых носителей и вспомогательных средств в соответствующих количествах для применения в настоящем изобретении. Кроме того, существует ряд ресурсов, доступных квалифицированному специалисту, которые описывают фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества и могут быть пригодными при выборе подходящих фармацевтически приемлемых носителей и вспомогательных средств. Примеры включают в себя Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited) и The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).

Композиции согласно настоящему изобретению получают с применением методик и способов, известных специалистам в данной области техники. Некоторые способы, обычно применяемые в данной области техники, описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение направлено на твердую пероральную лекарственную форму, такую как таблетка или капсула, содержащую эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению и разбавитель или наполнитель. Подходящие разбавители и наполнители включают в себя лактозу, сахарозу, декстрозу, маннит, сорбит, крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно клейстеризованный крахмал), целлюлозу и ее производные (например, микрокристаллическую целлюлозу), сульфат кальция и двухосновный фосфат кальция. Пероральная твердая лекарственная форма может дополнительно содержать связующее средство. Подходящие связующие средства включают в себя крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно клейстеризованный крахмал), желатин, аравийскую камедь, альгинат натрия, альгиновую кислоту, трагакантовую камедь, гуаровую камедь, повидон и целлюлозу и ее производные (например, микрокристаллическую целлюлозу). Пероральная твердая лекарственная форма может дополнительно содержать разрыхлитель. Подходящие разрыхлители включают в себя кросповидон, крахмал-гликолят натрия, кроскармеллозу, альгиновую кислоту и карбоксиметилцеллюлозу натрия. Пероральная твердая лекарственная форма может дополнительно содержать смазывающее средство. Подходящие смазывающие средства включают в себя стеариновую кислоту, стеарат магния, стеарат кальция и тальк.

В случае, когда это уместно, составы в лекарственной форме для перорального введения могут быть микроинкапсулированными. Композицию также можно приготовить таким образом, чтобы продлить или замедлить высвобождение, как например, посредством нанесения покрытия или заключения материала в виде частиц в полимеры, воск или подобное.

Соединения, раскрытые в данном документе, также можно связывать с растворимыми полимерами в качестве нацеливаемых носителей лекарственного средства. Такие полимеры могут включать в себя поливинилпирролидон, пирановый сополимер, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидрокеиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоильными остатками. Более того, соединения согласно настоящему изобретению можно связывать с классом биоразлагаемых полимеров, пригодных в достижении контролируемого высвобождения лекарственного средства, например, с полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидр оксимасляной кислотой, сложными поли-ортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианакрилатами и сшитыми или амфипатическими блоксополимерами гидрогелей.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение направлено на жидкую пероральную лекарственную форму. Пероральные жидкости, такие как раствор, сиропы и эликсиры, можно получать в стандартной лекарственной форме таким образом, чтобы заданное количество содержало предварительно определенное количество соединения, раскрытого в данном документе. Сиропы можно получать посредством растворения соединения согласно настоящему изобретению в подходящим образом ароматизированном водном растворе; в то время как эликсиры получают с применением нетоксичной спиртовой среды. Суспензии можно составлять посредством диспергирования соединения, раскрытого в данном документе, в нетоксичной среде. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты и простые полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, вкусовые добавки, такие как масло мяты перечной, или другие натуральные подсластители, или сахарин, или другие искусственные подсластители и т.п.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение направлено на композиции для парентерального введения. Композиции, адаптированные для парентерального введения, включают в себя водные и неводные стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и растворенные вещества, которые делают состав изотоничным с кровью предполагаемого реципиента; а также водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать в себя суспендирующие средства и загустители. Композиции могут присутствовать в контейнерах с единичной дозой или несколькими дозами, например, в запечатанных ампулах и пузырьках, и их можно хранить в высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии, приготовленные для немедленного введения, можно приготовить из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Комбинации

Соединение, раскрытое в данном документе, можно применять в комбинации с одним или несколькими другими активными средствами, в том числе, без ограничения, с другими противораковыми средствами, которые применяют в предупреждении, лечении, контроле, ослаблении или снижении риска конкретного заболевания или состояния (например, нарушений клеточной пролиферации). В соответствии с одним вариантом осуществления соединение, раскрытое в данном документе, комбинируют с одним или несколькими другими противораковыми средствами для применения в предупреждении, лечении, контроле, ослаблении или снижении риска конкретного заболевания или состояния, для которого пригодны соединения, раскрытые в данном документе. Такие другие активные средства можно вводить посредством пути и в количестве, обычно применяемых для них, одновременно или последовательно с соединением согласно настоящему изобретению.

Когда соединение, раскрытое в данном документе, применяют одновременно с одним или несколькими другими активными средствами, предполагается композиция, содержащая такие другие активные средства дополнительно к соединению, раскрытому в данном документе. Соответственно, композиции согласно настоящему изобретению включают в себя композиции, которые также содержат один или несколько других активных ингредиентов дополнительно к соединению, раскрытому в данном документе. Соединение, раскрытое в данном документе, можно вводить либо одновременно с одним или несколькими другими терапевтическими средствами, либо до или после них. Соединение, раскрытое в данном документе, можно вводить раздельно посредством того же или отличного пути введения или вместе в одной и той же фармацевтической композиции, что и другое(другие) средство(средства).

Продукты, обеспечиваемые в виде комбинированного препарата, включают в себя композицию, содержащую соединение формулы (I) и одно или несколько других активных средств вместе в одной и той же фармацевтической композиции или соединение формулы (I) и одно или несколько других терапевтических средств в раздельной форме, например, в виде набора.

Массовое соотношение соединения, раскрытого в данном документе, и второго активного средства может варьировать и будет зависеть от эффективной дозы каждого средства. Обычно будут применять эффективную дозу каждого средства. Таким образом, например, когда соединение, раскрытое в данном документе, комбинируют с другим средством, массовое соотношение соединения, раскрытого в данном документе, и другого средства обычно будет находиться в диапазоне от приблизительно 1000:1 до приблизительно 1:1000, как например, от приблизительно 200:1 до приблизительно 1:200. Комбинации соединения, раскрытого в данном документе, и других активных средств обычно также будут находиться в пределах вышеупомянутого диапазона, но в каждом случае следует применять эффективную дозу каждого активного средства. В таких комбинациях соединение, раскрытое в данном документе, и другие активные средства можно вводить раздельно или совместно. Кроме того, введение одного элемента можно осуществлять перед введением другого(других) средства(средств), одновременно с ним(ними) или после него(них).

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей соединение формулы (I) и по меньшей мере одно другое терапевтическое средство, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. В соответствии с одним вариантом осуществления терапия представляет собой лечение заболевания или нарушения, ассоциированного с активностью фермента IDO.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к набору, содержащему две или более отдельные фармацевтические композиции, по меньшей мере одна из которых содержит соединение формулы (I). В соответствии с одним вариантом осуществления набор содержит средства для раздельного хранения указанных композиций, такие как контейнер, разделенная бутылка или разделенный пакет из фольги. Примером такого набора является блистерная упаковка, которую, как правило, применяют для упаковки таблеток, капсул и т.п.

Набор, раскрытый в данном документе, можно применять для введения различных лекарственных форм, например, пероральных и парентеральных, для введения отдельных композиций с различными интервалами дозирования или для подбора доз отдельных композиций друг относительно друга. Для содействия соблюдению режима и схемы лечения набор согласно настоящему изобретению, как правило, содержит указания по введению.

В данном документе раскрыто применение соединения формулы (I) для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с активностью фермента IDO, при этом лекарственный препарат готовят для введения с другим активным средством. Настоящее изобретение также относится к применению другого активного средства для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с ферментом IDO, при этом лекарственный препарат вводят с соединением формулы (I).

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с активностью фермента IDO, при этом пациент ранее (например, в течение 24 часов) получал лечение другим активным средством. Настоящее изобретение также относится к применению другого терапевтического средства для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с активностью фермента IDO, при этом пациент ранее (например, в течение 24 часов) получал лечение соединением формулы I, (Ia) или (Ib). Второе средство можно применять через неделю, несколько недель, месяц или несколько месяцев после введения соединения, раскрытого в данном документе.

В соответствии с одним вариантом осуществления другое активное средство является выбранным из группы, состоящей из ингибиторов рецептора фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), ингибиторов топоизомеразы II, ингибиторов белка smoothen, алкилирующих средств, противоопухолевых антибиотиков, антиметаболитов, ретиноидов, иммуномодулирующих средств, в том числе, без ограничения, противораковых вакцин, антагонистов CTLA-4, LAG-3 и PD-1.

Примеры ингибиторов рецептора фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF) включают в себя, без ограничения, бевацизумаб (реализуемый Genentech/Roche под торговым названием AVASTIN), акситиниб, (N-метил-2-[[3-[([pound])-2-пиридин-2-илэтенил]-1Н-индазол-6-ил]сульфанил]бензамид, также известный как AG013736 и описанный в РСТ публикации международной заявки № WO 01/002369), бриванибаланинат ((S)-((R)-1-(4-(4-фтор-2-метил-1Н-индол-5-илокси)-5-метилпирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-илокси)пропан-2-ил)2-аминопропаноат, также известный как BMS-582664), мотесаниб (N-(2,3-дигидро-3,3-диметил-1Н-индол-6-ил)-2-[(4-пиридинилметил)амино]-3-пиридинкарбоксамид и описанный в РСТ публикации международной заявки № WO 02/068470), пасиреотид (также известный как SO 230 и описанный в РСТ публикации международной заявки № WO 02/010192) и сорафениб (реализуемый под торговым названием NEXAVAR).

Примеры ингибиторов топоизомеразы II включают в себя, без ограничения, этопозид (также известный как VP-16 и фосфат этопозида, реализуемый под торговыми названиями TOPOSAR, VEPESID и ETOPOPHOS) и тенипозид (также известный как VM-26, реализуемый под торговым названием VUMON).

Примеры алкилирующих средств включают в себя, без ограничения, 5-азацитидин (реализуемый под торговым названием VIDAZA), децитабин (реализуемый под торговым названием DECOGEN), темозоломид (реализуемый Schering-Plough/Merck под торговыми названиями TEMODAR и TEMODAL), дактиномицин (также известный как актиномицин-D и реализуемый под торговым названием COSMEGEN), мелфалан (также известный как L-PAM, L-сарколизин и фенилаланин-иприт, реализуемый под торговым названием ALKERAN), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (НММ), реализуемый под торговым названием HEXALEN), кармустин (реализуемый под торговым названием BCNU), бендамустин (реализуемый под торговым названием TREANDA), бусульфан (реализуемый под торговыми названиями BUSULFEX и MYLERAN), карбоплатин (реализуемый под торговым названием PARAPLATIN), ломустин (также известный как CCNU, реализуемый под торговым названием CeeNU), цисплатин (также известный как CDDP, реализуемый под торговыми названиями PLATINOL и PLATINOL-AQ), хлорамбуцил (реализуемый под торговым названием LEUKERAN), циклофосфамид (реализуемый под торговыми названиями CYTOXAN и NEOSAR), дакарбазин (также известный как DTIC, DIC и имидазолкарбоксамид, реализуемый под торговым названием DTIC-DOME), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (НММ), реализуемый под торговым названием HEXALEN), ифосфамид (реализуемый под торговым названием IFEX), прокарбазин (реализуемый под торговым названием MATULANE), мехлорэтамин (также известный как азотистый иприт, мустин и гидрохлорид мехлорэтамина, реализуемый под торговым названием MUSTARGEN), стрептозоцин (реализуемый под торговым названием ZANOSAR), тиотепу (также известную как как тиофосфоамид, TESPA и TSPA и реализуемую под торговым названием THIOPLEX).

Примеры противоопухолевых антибиотиков включают в себя, без ограничения, доксорубицин (реализуемый под торговыми названиями ADRIAMYCIN и RUBEX), блеомицин (реализуемый под торговым названием LENOXANE), даунорубицин (также известный как гидрохлорид даунорубицина, дауномицин и гидрохлорид рубидомицина, реализуемый под торговым названием CERUBIDINE), даунорубицин в липосомах (липосомы с цитратом даунорубицина, реализуемый под торговым названием DAUNOXOME), митоксантрон (также известный как DHAD, реализуемый под торговым названием NOVANTRONE), эпирубцин (реализуемый под торговым названием ELLENCE), идарубицин (реализуемый под торговыми названиями IDAMYCIN, IDAMYCIN PFS) и митомицин С (реализуемый под торговым названием MUTAMYCIN).

Примеры антиметаболитов включают в себя, без ограничения, кладрибин (2-хлордезоксиаденозин, реализуемый под торговым названием LEUSTATIN), 5-фторурацил (реализуемый под торговым названием ADRUCIL), 6-тиогуанин (реализуемый под торговым названием PURINETHOL), пеметрексед (реализуемый под торговым названием ALIMTA), цитарабин (также известный как арабинозилцитозин (Ara-С), реализуемый под торговым названием CYTOSAR-U), цитарабин в липосомах (также известный как Аrа-С в липосомах, реализуемый под торговым названием DEPOCYT), децитабин (реализуемый под торговым названием DACOGEN), гидроксимочевину (реализуемую под торговыми названиями HYDREA, DROXIA и MYLOCEL), флударабин (реализуемый под торговым названием FLUDARA), флоксуридин (реализуемый под торговым названием FUDR), кладрибин (также известный как 2-хлордезоксиаденозин (2-CdA), реализуемый под торговым названием LEUSTATIN), метотрексат (также известный как аметоптерин, метотрексат натрия (МТХ), реализуемый под торговыми названиями RHEUMATREX и TREXALL) и пентостатин (реализуемый под торговым названием NIPENT).

Примеры ретиноидов включают в себя, без ограничения, алитретиноин (реализуемый под торговым названием PANRETIN), третиноин (полностью транс-ретиноевая кислота, также известная как ATRA, реализуемая под торговым названием VESANOID), изоретиноин (13-с/s-ретиноевая кислота, реализуемая под торговыми названиями ACCUTANE, AMNESTEEM, CLARA VIS, CLARUS, DECUTAN, ISOTANE, IZOTECH, ORATANE, ISOTRET и SOTRET) и бексаротен (реализуемый под торговым названием TARGRETIN).

«Антагонист PD-1» означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, которые блокируют связывание PD-L1, экспрессируемого на раковой клетке, с PD-1, экспрессируемым на иммунной клетке (Т-клетке, В-клетке или NKT-клетке), и предпочтительно также блокирует связывание PD-L2, экспрессируемого на раковой клетке, с экспрессируемым на иммунной клетке PD-1. Альтернативные названия или синонимы для PD-1 и его лигандов включают в себя: PDCD1, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCD1L1, PDL1, В7Н1, В7-4, CD274 и В7-Н для PD-L1; и PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. В любом из способа лечения, лекарственных препаратов и применений согласно настоящему изобретению, в которых лечение получает индивид-человек, антагонист PD-1 блокирует связывание человеческого PD-L1 с человеческим PD-1 и, предпочтительно, блокирует связывание как человеческого PD-L1, так и PD-L2 с человеческим PD-1. Аминокислотные последовательности человеческого PD-1 можно найти в NCBI по номеру локуса: NP_005009. Аминокислотные последовательности человеческих PD-L1 и PD-L2 можно найти в NCBI по номеру локуса: NP_054862 и NP_079515, соответственно.

Антагонисты PD-1, пригодные в любом из способа лечения, лекарственных препаратов и применений согласно настоящему изобретению, включают в себя моноклональное антитело (mAb) или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно, специфично связывается с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1. mAb может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело, и оно может включать в себя человеческий константный участок. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления человеческий константный участок является выбранным из группы, состоящей из константных участков IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в соответствии с предпочтительными вариантами осуществления человеческий константный участок представляет собой константный участок IgG1 или IgG4. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления антигенсвязывающий фрагмент является выбранным из группы, состоящей из Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv и Fv фрагментов. Примеры антагонистов PD-1 включают в себя, без ограничения, пембролизумаб (реализуемый под торговым названием KEYTRUDA) и ниволумаб (реализуемый под торговым названием OPDIVO).

Примеры mAb, которые связываются с человеческим PD-1 и являются пригодными в способе лечения, лекарственных препаратах и применениях согласно настоящему изобретению, описаны в патентных документах US 7488802, US 7521051, US 8008449, US 8354509, US 8168757, WO 2004/004771, WO 2004/072286, WO 2004/056875, и US 2011/0271358.

Примеры mAb, которые связываются с человеческим PD-L1 и являются пригодными в способе лечения, лекарственных препаратах и применениях согласно настоящему изобретению, описаны в патентных документах WO 2013/019906, WO 2010/077634 А1 и US 8383796. Специфические mAb к человеческому PD-L1, пригодные в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных препаратах и применениях согласно настоящему изобретению, включают в себя MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C и антитело, которое содержит вариабельные участки тяжелой цепи и легкой цепи с SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 21, соответственно, из международной заявки WO 2013/019906.

Другие антагонисты PD-1, пригодные в любом из способа лечения, лекарственных препаратов и применениях согласно настоящему изобретению, включают в себя иммуноадгезин, который специфично связывается с PD-1 или PD-L1 и, предпочтительно, специфично связывается с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1, например, гибридный белок, содержащий внеклеточную или связывающуюся с PD-1 часть PD-L1 или PD-L2, слитую с константным участком, таким как Fc участок молекулы иммуноглобулина. Примеры иммуноадгезивных молекул, которые специфично связываются с PD-1, описаны в международных заявках WO 2010/027827 и WO 2011/066342. Специфические гибридные белки, пригодные в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных препаратах и применениях согласно настоящему изобретению, включают в себя АМР-224 (также известный как B7-DCIg), который представляет собой гибридный белок PD-L2-FC и связывается с человеческим PD-1.

Примеры других цитотоксических средств включают в себя, без ограничения, триоксид мышьяка (реализуемый под торговым названием TRISENOX), аспарагиназу (также известную как L-аспарагиназа и L-аспарагиназа Erwinia, реализуемую под торговыми названиями ELSPAR и KIDROLASE).

Экспериментальная часть

Предусмотрено, что следующие примеры являются только иллюстративными и не ограничивают никаким образом. Используемыми аббревиатурами являются такие, которые являются традиционными в области техники, или следующие.

ACN - ацетонитрил

°С - градусов Цельсия

DCM - дихлорметан

DMA - диметиламин

DMF - N,N-диметилформамид

DMSO - диметилсульфоксид

EtOAc - этилацетат

EtOH - этанол

г - грамм

ч - час(ы)

HPLC - жидкостная хроматография высокого давления

кг - килограмм

л - литр

LC - жидкостная хроматография

LCMS - жидкостная хроматография и масс-спектрометрия

МеОН - метанол

MS - масс-спектрометрия

МТВЕ - метил-терет-бутиловый эфир

мин - минуты

мл - миллилитр(ы)

m/z - отношение массы к заряду

нм - нанометр

нМ - наномолярный

н - нормальность

ЯМР - ядерно-магнитный резонанс

КТ или к.т. - комнатная температура

нас. - насыщенный

TEA - триэтиламин

FA - трифторуксусная кислота

THF - тетрагидрофуран

Промежуточные соединения

Промежуточное соединение А: 4-Амино-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамид

Малононитрил (15 г, 227 ммоль) в 2 н HCl (200 мл) перемешивали до растворения. При поддержании температуры реакции от 15°С до 20°С раствор нитрита натрия (31,3 г, 454 ммоль) в 45 мл воды добавляли по каплям и перемешивали при условиях окружающей среды дополнительно 16 ч. Добавляли водный раствор гидроксиламина гидрохлорида (35,0 г, 504 ммоль) в 25 мл воды и значение рН раствора доводили приблизительно до 10 добавлением 10 н NaOH при поддержании температуры ниже 20°С. Температуру реакции доводили до 30°С в течение 1 ч, затем нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. Нагревание останавливали и реакционную смесь постепенно охлаждали до к.т. всю ночь. Реакционную смесь охлаждали в ледяной бане, значение рН доводили до 8 при помощи 6 н HCl и перемешивали в течение 30 мин. Твердые вещества фильтровали и промывали холодной водой с получением указанного соединения. MS: 144 (М+1). ¹³С ЯМР (500 МГц, CD₃OD): δ 154.5, 144.3, 139.8.

Промежуточное соединение В: 4-Амино-N-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбимидоила хлорид

К раствору 4-амино-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида (5,09 г, 35,6 ммоль) в 70 мл воды добавляли АсОН (35 мл) и 6 н хлорид водород (17,78 мл, 107 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 40°С до полного растворения всех твердых веществ. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды и добавляли твердый хлорид натрия (6,24 г, 107 ммоль), перемешивали, затем реакционную смесь охлаждали до 0°С. Раствор нитрита натрия (2,5 г, 35,6 ммоль) в 8,4 мл воды добавляли по каплям в течение 3 ч и реакционную смесь перемешивали при 0°С еще 1,5 ч, затем нагревали до 15°С в течение 15 мин. Твердые остатки фильтровали и промывали холодной водой с получением указанного продукта. MS: 163 (М+1). ¹³С ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆): δ 154.4, 142.3, 126.8. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆): δ 13.41 (s, 1H), 6.29 (s, 2Н).

Промежуточное соединение С: 4-Фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-амина гидрохлорид

Стадия 1: 3-(2-бром-4-фторфенил)акрилонитрил

К раствору 2-бром-4-фторбензальдегида (400,0 г, 1,97 моль) и диэтил(цианометил)фосфоната (401,0 г, 2,266 моль) в THF (7 л) добавляли 2-метилпропан-2-олят калия (254 г, 2,266 моль) порционно при 0°С. Через 16 ч при 25°С добавляли воду (2,5 л) и смесь перемешивали еще 10 мин. Слои разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом (1,5 л × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (2,0 л), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (SiO₂, элюировали с петролейным эфиром) с получением указанного соединения.

Стадия 2: 3-(2-бром-4-фторфенил)пропаннитрил

К раствору 3-(2-бром-4-фторфенил)акрилонитрила (160,0 г, 708 ммоль) в THF (1,5 L) добавляли LiBH₄ (30,0 г, 1377 ммоль) при 0°С порционно в течение 5 мин. Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин с последующим добавлением метанола (20 мл) по каплям, нагревали до 20°С и перемешивали в течение 16 ч. Смесь гасили добавлением 2,0 М водного раствора KН₂РО₄ до значения рН~7, экстрагировали этилацетатом (500 мл × 2). Органические слои промывали солевым раствором (нас. 100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (SiO₂, элюировали с петролейным эфиром/этилацетатом = 50:1 - 30:1) с получением указанного соединения в виде масла.

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.28-7.40 (m, 2Н), 7.04 (td, J=8.0, 2.8 Гц, 1H), 3.07 (t, J=7.2 Гц, 2H), 2.67 (t, J=7.2 Гц, 2H).

Стадия 3: 4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрил

К перемешиваемому раствору диизо пропил амина (0,222 л, 1579 ммоль) в THF (1,5 L) добавляли н-BuLi (0,631 л, 1579 ммоль) (2,5 М, в гексане) по каплям при -78°С в атмосфере N₂. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин перед добавлением 3-(2-бром-4-фторфенил)пропаннитрила (90,0 г, 395 ммоль) в THF (500 мл) по каплям в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при -78°С в течение 3 ч, нагревали до к.т., гасили водн. HCl (1,7 л, 1 М) до значения рН~8, экстрагировали этилацетатом (500 мл × 2). Органические слои промывали солевым раствором (200 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (SiO₂, элюировали с петролейным эфиром / этилацетатом = 50:1 - 30:1) с получением указанного соединения в виде масла.

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.04-7.16 (m, 2Н), 6.92-7.00 (m, 1H), 4.21-4.25 (m, 1H), 3.62-3.68 (m, 1H), 3.45-3.53 (m, 1H)

Стадия 4: 4-Фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновая кислота

К перемешиваемому раствору 4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбонитрила (73,0 г, 496 ммоль) в EtOH (700 мл) и воде (140 мл) добавляли гидроксид калия (97,0 г, 1736 ммоль) при 25°С. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 1,5 ч, охлаждали до к.т. и концентрировали при повышенном давлении. Остаток растворяли в воде (500 мл) и экстрагировали DCM (300 мл). Водную фазу подкисляли добавлением водной HCl (6 М) до значения рН ~3, затем экстрагировали этилацетатом (800 мл × 2). Органические слои промывали солевым раствором (400 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного соединения в виде твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.04-7.07 (m, 1H), 6.92-6.97 (m, 2Н), 4.30 (t, J=4.0 Гц, 1H), 3.43-3.45 (m, 2Н).

Стадия 5: трет-Бутил(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)карбамат

К перемешиваемому раствору 4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-карбоновой кислоты (26,0 г, 156 ммоль) в трет-BuOH (100 мл) добавляли триэтиламин (32,7 мл, 235 ммоль) и дифенилфосфоразидат (51,7 г, 188 ммоль). Смесь перемешивали при 85°С в течение 4 ч в атмосфере N₂, охлаждали до к.т. и концентрировали при повышенном давлении. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этил ацетат = 50: 1~ 30:1) с получением указанного соединения. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.07-7.14 (m, 1Н), 6.96-7.03 (m, 1Н), 6.94 (dd, J=7.9, 2.2 Гц, 1Н), 5.07 (br s, 1Н), 3.54 (br dd, J=14.1, 4.4 Гц, 1Н), 2.97 (br d, J=14.1 Гц, 1Н), 1.49 (s, 9Н).

Стадия 6: 4-Фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-амина гидрохлорид

К раствору трет-бутил(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)карбамата (25 г, 105 ммоль) в EtOAc (200 мл) добавляли HCl (100 мл, 400 ммоль) (4 M в диоксане) при к.т. Смесь перемешивали в течение 2 ч при к.т. (~ 26°С). При помощи LCMS и TLC (петролейный эфир : этилацетат = 5:1) наблюдали отсутствие исходного вещества. Осадок собирали фильтрацией с получением 4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-амина гидрохлорида (16,0 г, 92 ммоль) в виде твердого вещества. ESI MS m/z 138.1 [М+Н⁺]. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.24-7.30 (m, 1Н), 7.15-7.22 (m, 1Н), 7.12 (dd, J=7.5, 2.2 Гц, 1Н), 4.79-4.84 (m, 1Н), 3.63-3.71 (m, 1Н), 3.24 (br d, J=14.5 Гц, 1Н).

Промежуточные соединения D и Е: (S)- и (R)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он

Стадия 1: 4-амино-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамид

К раствору 4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-амина гидрохлорида (15 г, 86 ммоль) в EtOH (150 мл) добавляли 4-амино-N-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбимидоила хлорид (16,85 г, 104 ммоль) и гидрокарбонат натрия (18,15 г, 216 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 1 ч, охлаждали до к.т. и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир/AcOEt: 10:1-4:1) с получением указанного соединения (18,0 г, 68,4 ммоль) в виде твердого вещества. LC/MS: MS (ESI) m/z: 264.1 [М+Н⁺].

Стадия 2: 3-(4-амино-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он

К раствору 4-амино-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида (18,0 г, 68,4 ммоль) и CDI (11,09 г, 68,4 ммоль) в THF (180 мл) добавляли Et₃N (19,06 мл, 137 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 26°С в течение 2 ч в атмосфере N₂ (баллон), затем концертировали при повышенном давлении. Остаток разделяли между водой (300 мл) и DCM (300 мл). Водный слой экстрагировали DCM (300 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (300 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при повышенном давлении. Остаток очищали методом колоночной хроматографии (SiO₂, петролейный эфир/этил ацетат 10:1-3:1 в качестве элюента) с получением указанного соединения (16,5 г, 57,0 ммоль) в виде твердого вещества.

Стадия 3: 4-(4-фторбицикло [4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он

К перемешиваемому раствору 3-(4-амино-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (15 г, 51,9 ммоль) в TFA (1000 мл) добавляли пероксид водорода (174 мл, 51,9 ммоль, 30%) при 0°С.Реакционную смесь перемешивали при 15°С в течение 15 ч, экстрагировали DCM (1500 мл × 8). Органические слои промывали солевым раствором (200 мл × 3), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением указанного соединения (70,2% выход) в виде твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃Cl) δ 7.05 (br d, J=6.6 Гц, 2Н), 6.73 (br d, J=6.8 Гц, 1H), 5.65 (br d, J=3.1 Гц, 1H), 3.79 (dd, J=1.5, 5.0, 14.7 Гц, 1H), 3.41 (br d, J=14.8 Гц, 1H)

Стадия 4: (S)- и (R)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он

Вышеуказанное рацемическое соединение рассматривали при помощи хирального разделения SFC (колонка OD 250 мм × 50 мм, 10 мкм; подвижная фаза: А: СО₂ В: этанол; градиент: 15% В; скорость потока: 180 мл/мин). Два хиральных промежуточных соединения F и G получали в виде твердых веществ:

Промежуточное соединение F (пик 1): ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃Cl) δ 7.05 (br d, J=6.6 Гц, 2Н),6.73 (br d, J=6.8 Гц, 1Н), 5.65 (br d, J=3.1 Гц, 1H), 3.79 (ddd, J=1.5, 5.0, 14.7 Гц, 1H), 3.41 (br d, J=14.8 Гц, 1H)

Промежуточное соединение G (пик 2): ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃Cl) δ 7.05 (br d, J=6.6 Гц, 2Н), 6.73 (brd, J=6.8 Гц, 1H), 5.65 (br d, J=3.1 Гц, 1Н), 3.79 (ddd, J=1.5, 5.0, 14.7 Гц, 1H), 3.41 (brd, J=14.8 Гц, 1H)

Общие схемы синтеза

Соединения формулы I, (Ia) или (Ib) могут быть получены способами, известными из области органического синтеза, как изложено в части при помощи следующих схем синтеза и процедур синтеза и условий для иллюстративных промежуточных соединений и примеров.

В описанных ниже схемах является хорошо понятным, что защитные группы для нестойких или реакционноспособных групп использовались по необходимости согласно общим принципам или химии. Защитные группы обрабатывали согласно стандартным способам органического синтеза (Т.W. Greene and P.G.M. Wilts, «Protective Groups in Organic Synthesis», Third edition, Wiley, New York 1999). Такие группы удаляли на подходящем этапе синтеза соединения с применением способов, которые очевидны специалистам настоящей области техники.

Описанные в настоящем изобретении соединения могут быть получены из коммерчески доступных исходных веществ или синтезированы с применением известных органических, неорганических и/или ферментативных процессов.

Приводимые в качестве примера схемы синтеза описаны ниже.

Схема 1.

На схеме 1 способы получения соединений, например, соединений примеров 1-4, описаны более подробно ниже в разделе примеров.

Примеры

Пример 1. (S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-(2-(сульфамоиламино)этокси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимид амид

Стадия 1. 2-((трет-Бутилдифенилсилил)окси)этанамин

К перемешиваемому раствору 2-аминоэтанола (20,0 г, 327 ммоль) и TBDPSCl (100 г, 362 ммоль) в DCM (800 мл) добавляли 1H-имидазол (49 г, 720 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 15 ч, разбавляли водой (400 мл), экстрагировали DCM (500 мл × 2). Органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир/EtOAc 20:1-10:1-5:1) с получением 2-((трет-бутилдифенилсилил)окси)этанамина (52 г) в виде масла.

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.68 (dd, J=7.8, 1.6 Гц, 4Н), 7.3-7.5 (m, 6Н), 3.6-3.7 (m, 2Н), 2.8 (t, J=5.2 Гц, 2H) 1.1 (s, 9Н); ESI MS m/z = 300.1

Стадия 2. трет-Бутил-N-(2-((трет-Бутилдифенилсилил)окси)этил)сульфамоилкарбамат

К раствору сульфуризоцианатидитхлорида (6,14 г, 43,4 ммоль) в DCM (100 мл) медленно добавляли раствор t-ВuОН (3,22 г, 43,4 ммоль) в DCM (50 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин перед добавлением 2-((трет-бутилдифенилсилил)окси)этанамина (10 г, 33,4 ммоль) небольшими частями для поддержания внутренней температуры ниже 10°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С еще 5 мин перед тем, как медленно добавляли TEA (10,4 мл, 74,6 ммоль) для поддержания внутренней температуры ниже 10°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч, гасили насыщенным водным раствором NH₄Cl (100 мл), затем экстрагировали DCM (250 мл × 3). Органические слои промывали солевым раствором (100 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир / этилацетат = 100%-50%) с получением трет-бутил-N-(2-((трет-бутилдифенилсилил)окси)этил)сульфамоилкарбамата (7,5 г) в виде твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.67 (dd, J=1.5, 7.7 Гц, 4Н), 7.45-7.37 (m, 6Н), 3.76 (t, J=6.2 Гц, 2Н), 3.17 (t, J=6.2 Гц, 2Н), 1.44 (s, 9Н), 1.04 (s, 9Н)

Стадия 3. трет-Бутил-N-(2-гидроксиэтил)сульфамоилкарбамат

К перемешиваемому раствору трет-бутил-N-(2-((трет-бутилдифенилсилил)окси)этил)сульфамоилкарбамата (7,5 г, 15,67 ммоль) в THF (35 мл) в атмосфере аргона добавляли уксусную кислоту (9,41 г, 157 ммоль) при 0°С, а затем по каплям раствор тетрабутиламмония фторида в THF (1,0 М, 22 мл, 22,0 ммоль). После добавления реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 15 ч, гасили насыщенным раствором NH₄Cl (50 мл), затем экстрагировали EtOAc (150 мл × 2). Органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир / EtOAc 100% - 50%) с получением трет-бутил-N-(2-гидроксиэтил)сульфамоилкарбамата (2,81 г) в виде твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 3.63 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 3.10 (t, J=6.0 Гц, 2Н), 1.49 (s, 9Н).

Стадия 4. N-(2-гидроксиэтил)сульфамид

Трет-бутил-N-(2-гидроксиэтил)сульфамоилкарбамат (500 мг, 2,08 ммоль) растворяли в растворе HCl-метанола (5 мл, 4,0 М, 20,00 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 2 ч, затем концентрировали в вакууме с получением указанного соединения (292 мг) в виде масла.

Стадия 5. (S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-(2-(сульфамоиламино)этокси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамид

К перемешиваемому раствору (S)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (1,33 г, 4,16 ммоль) и N-(2-гидроксиэтил)сульфамида (583 мг, 4,16 ммоль) в THF (30 мл) добавляли NaH (499 мг, 60%, 12,48 ммоль) небольшими частями при 15°С. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 15°С в течение 1 ч перед медленным добавлением водн. NaOH (3,0 мл, 3,0 ммоль, 3М). Реакционную смесь перемешивали при 15°С еще 1 ч. Затем добавляли водный раствор HCl (6,0 М) до доведения значения рН ~5. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом HPLC на приборе GILSON 281, оборудованном Waters XSELECT С18 150 × 30 мм × 5 мкм с применением воды (0,1% FA)-CH₃CN с получением указанного соединения (710 мг) в виде твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7.13 (dd, J=7.9, 4.0 Гц, 1Н), 6.97-7.05 (m, 1Н), 6.90 (br d, J=7.5 Гц, 1Н), 5.08 (m, 1Н), 4.55 (t, J=5.2 Гц, 2Н), 3.49-3.55 (m, 3Н), 3.05-3.08 (m, 1Н); ESI MS m/z 387.1 [М+Н⁺].

Пример 2. (S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-((1-(2-гидроксиацетил)азетидин-3-ил)окси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамид

Стадия 1. (S)-трет-Бутил-3-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)азетидин-1-карбоксилат

К перемешиваемому раствору трет-бутил-3-гидроксиазетидин-1-карбоксилата (163 мг, 0,940 ммоль) в сухом THF (6,3 мл) добавляли трет-бутилат калия (1,0 М в THF, 689 мкл, 0,689 ммоль) при к.т. Смесь перемешивали при к.т. приблизительно 2 мин перед добавлением (S)-(4-(4-фторбицикло [4.2.0] окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (200 мг, 0.627 ммоль). Смесь перемешивали при к. т. в течение 2 ч, гасили добавлением HCl (1,0 М в воде, 689 мкл, 0,689 ммоль), затем разделяли между EtOAc (20 мл) и водой (20 мл). Водный слой трижды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии с применением системы Isco (40 г силикагель, золотая колонка RediSep, 0-60% EtOAc/гексан в качестве элюирующего растворителя) с получением указанного соединения в виде твердого вещества (225 мг). LCMS m/z: 446.1 (М+Н).

Стадия 2. (S)-3-(4-(азетидин-3-илокси)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он, HCl

Смесь (S)-трет-бутил-3-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)азетидин-1-карбоксилата (220 мг, 0,494 ммоль) в растворе HCl и диоксана (4,0 М, 6,17 мл, 24,7 ммоль) перемешивали при к.т. в течение 1 ч, а затем концентрировали в вакууме с получением требуемого продукта в виде твердого вещества, которое использовали сразу на следующей стадии. LCMS m/z 346.1 (М+Н);

Стадия 3. (S)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-((1-(2-гидроксиацетил)азетидин-3-ил)окси)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он

К перемешиваемому раствору гликолевой кислоты (19,92 мг, 0,262 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазола (HOAt) (23,18 мг, 0,170 ммоль) и N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида гидрохлорида (EDC, 32,6 мг, 0,170 ммоль) в CH₂Cl₂ (1,3 мл) и DMF (0,2 мл) добавляли (S)-3-(4-(азетидин-3-илокси)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-он, HCl (50 мг, 0,131 ммоль) и DIEA (68,6 мкл, 0,393 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч, разбавляли DCM (10 мл), промывали 1,0 н водной HCl (~5 мл), а затем нас. водным NaHCO₃ (~ 5 мл). Органическую фазу сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде желтого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS m/z 404.1 (М+Н).

Стадия 4. (S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-((1-(2-гидроксиацетил)азетидин-3-ил)окси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамид

К смеси (S)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-((1-(2-гидроксиацетил)азетидин-3-ил)окси)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (58,5 мг, 0,145 ммоль) в THF (1,7 мл) и воде (690 мкл) добавляли NaOH (2 M в воде, 218 мкл, 0,435 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 60 мин, нейтрализовали добавлением HCl (2,0 М в воде, 218 мкл, 0,435 ммоль) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали масса-направленной HPLC с обращенной фазой (19×100 мм, колонка Waters CSH С18, размер частиц 5 мк, скорость потока 25 мл/мин, линейный градиент, 8% ACN/H₂O - 50% ACN/H₂O, буферизация 0,16% муравьиной кислотой) с получением указанного соединения в виде твердого вещества после лиофилизации. LCMS m/z 378.3 (М+Н) ¹H ЯМР (500 МГц, CD₃OD): δ 7.11 (dd, J=5 Гц, J=8 Гц, 1H); 7.02-6.98 (m, 1Н); 6.95-6.93 (m, 1H); 5.42-5.37 (m, 1H); 5.05 (br, s, 1Н); 4.78-4.73 (m, 1H); 4.50-4.42 (m, 2Н); 4.20-4.14 (m, 1Н); 4.12 (br, s, 2Н); 3.53(d, J=15 Гц, 1H); 3.09 (d, J=15 Гц, 1H)

Пример 3. (S)-N-(2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)этил)ацетамид

Стадия 1. (S)-N-(2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)этил)ацетамид

На основе подобной процедуры, как описано на стадии 1 примера 2, указанное соединение получали в виде твердого вещества. LCMS m/z 376.1 (М+Н)⁺.

Стадия 2. (S)-N-(2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)этил)ацетамид

На основе подобной процедуры, как описано на стадии 4 примера 2, указанное соединение получали в виде твердого вещества. LCMS m/z 350.3 (М+Н)⁺; ¹H ЯМР (500 МГц, CD₃OD): δ 7.13-7.09 (m, 1H); 7.03-6.99 (m, 1H); 6.94-6.91 (m, 1H); 5.00 (s, br, 1H); 4.48 (t, J=5.0 Гц, 2Н); 3.65 (t, J=5 Гц, 2Н); 3.52 (d, J=10.0 Гц, 1Н); 3.09 (d, J=10 Гц, 1H); 1.94 (s, 3Н)

Пример 4. (S)-2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)-N-(2-гидроксиэтил)ацетамид

Стадия 1. трет-Бутил(S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)ацетат

К перемешиваемому раствору трет-бутил-2-гидроксиацетата (267 мг, 2,02 ммоль) в сухом THF (16,8 мл) добавляли гидрид натрия (60% в масле) (62,0 мг, 1,55 ммоль) при к.т. Смесь перемешивали при к. т. приблизительно 2 мин перед добавлением (S)-4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-3-(4-нитро-1,2,5-оксадиазол-3-ил)-1,2,4-оксадиазол-5(4Н)-она (430 мг, 1,347 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч, гасили холодной водой (20 мл), экстрагировали EtOAc (50 мл × 3). Органические фазы объединяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии (система Isco, силикагель 80 г, золотая колонка, 0-60% EtOAc/гексан в качестве элюирующего растворителя) с получением указанного соединения в виде масла. LCMS m/z 405,0 (М+Н)⁺.

Стадия 2. (S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)уксусная кислота

Смесь трет-бутил-(S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)ацетата (540 мг, 1,335 ммоль) в CH₂Cl₂ (8,3 мл) и TFA (8,2 мл) перемешивали при к.т. в течение 2 ч, затем концентрировали в вакууме с получением указанного соединения в виде твердого вещества. LCMS m/z 349.1 (М+Н)⁺.

Стадия 3. (S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)-N-(2-гидроксиэтил)ацетамид

К перемешиваемому раствору (S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)уксусной кислоты (45 мг, 0,129 ммоль), 1-гидрокси-7-азабензотриазола (22,86 мг, 0,168 ммоль) и EDC (32,2 мг, 0,168 ммоль) в CH₂Cl₂ (1,0 мл) добавляли раствор этаноламина (15,6 мкл, 0,25 ммоль) в DMF (500 мкл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч, разбавляли DCM (10 мл), промывали водой (5 мл) и нас. водным NaHCO₃ (5 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS m/z 392.1 (М+Н)⁺.

Стадия 4. (S)-2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)-N-(2-гидроксиэтил)ацетамид

К раствору (S)-2-((4-(4-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-5-оксо-4,5-дигидро-1,2,4-оксадиазол-3-ил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)-N-(2-гидроксиэтил)ацетамида (50,5 мг) в THF (1 мл), воде (0,5 мл) и метаноле (0,5 мл) добавляли NaOH (2M в воде, 0,323 мл, 0,645 ммоль). Смесь перемешивали при к.т. в течение 0,5 ч, гасили добавлением TFA (0,080 мл, 1,032 ммоль), затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом масса-направленной HPLC с обращенной фазой (19×100 мм, Waters CSH С18 колонка, 19×100 мм, размер частиц 5 мк, скорость потока 25 мл/мин, линейный градиент, 20% ACN/H₂O - 55% ACN/H₂O, общее время прогона 8 мин, буферизация 0,16% TFA) с получением указанного соединения в виде твердого вещества. LCMS m/z (М+Н) рассчит.: 366.1; получено (М+Н): 366.4. ¹Н ЯМР (500 МГц, CD₃OD): δ 7.13-7.10 (m, 1H); 7.03-6.93 (m, 2Н); 5.20 (br, s, 1H); 4.94 (br, s, 2Н); 3.66 (m, 2Н); 3.57 (d, J=10 Гц, 1Н); 3.40 (m, 2Н), 3.10 (d, J=10 Гц, 1Н).

С применением общей методологии, раскрытой на схеме 1, примеры 1-4, и общедоступных сведений в органическом синтезе получали соединения таблицы 1.

Биологические анализы

Анализ фермента IDO1

Соединения, подлежащие исследованию, подвергали серийному разведению в DMSO в десять этапов с 3-кратным разведением на каждом из них, начиная с 10 мМ маточных растворов в DMSO. Разведенные соединения или только DMSO затем распределяли из планшета для разведения в 384-луночный черный планшет для анализа Greiner (№ в каталоге 781086) с помощью акустического устройства для манипуляций с жидкостью Echo 555 (Labcyte).

Белок IDO1 с HIS-меткой рекомбинантно экспрессировали в Escherichia coli с применением аутоиндукционной среды ZYP5052, дополненной 500 мкМ дельта-аминолевулиновой кислотой в течение 48 часов при 16 градусах Цельсия. Белок IDO1 очищали с применением Ni²⁺-аффинной смолы и гель-хроматографии. Очищенный белок затем разводили в буфере для анализа (50 мМ Tris, рН 7,0, 1% глицерин, 20 мкМ метиленовый синий, 0,05% Tween-20, 20 мМ аскорбат натрия, 100 единиц/мл каталазы) с получением конечной концентрации IDO1, составляющей 40 нМ. Раствор IDO1 (30 мкМ) или только буфер (30 мкМ) распределяли в лунки планшета для анализа с применением дозатора жидкости BioRAPTR (Beckman Coulter). Планшеты для анализа, содержащие соединение и фермент IDO1, инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут. После этого 10 мкл 400 мкМ триптофана в буфере для анализа добавляли в каждую лунку планшета для анализа с применением дозатора жидкости BioRAPTR. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут и реакционные смеси гасили посредством добавления 10 мкл 0,5 М метилизонипекотата в диметилсульфоксиде. Планшеты запечатывали и инкубировали при 37 градусах Цельсия в течение 4 часов или при 50 градусах Цельсия в течение 2 часов. Планшетам позволяли охладиться, а затем центрифугировали в течение 1 минуты при 1000 × g. Возникающую в результате флуоресценцию измеряли на планшет-ридере Envision (Perkin Elmer) с фильтром длины волны возбуждения на 400/25 нм и фильтром длины волны эмиссии на 510/20 нм.

Интенсивность флуоресценции в каждой лунке корректировали к фоновому значению, наблюдаемому в лунках, которые не получали IDO1, и выражали в виде доли интенсивности, наблюдаемой в лунках, которые получали фермент IDO1 и только DMSO. Значения активности рассчитывали с помощью подбора линейной функции методом наименьших квадратов по четырехпараметрическому логистическому уравнению для IC50.

Клеточный анализ IDO1 в клетках Hela, стимулируемых IFNγ

Клетки Hela культивировали в полной среде для культивирования Hela (90% ЕМЕМ, 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки) и разращивали приблизительно до 1×10⁹ клеток. Клетки затем собирали и замораживали в количестве 10×10⁶ клеток/флакон в 1 мл среды для замораживания (90% полной среды для культивирования Hela, 10% DMSO)

Соединения, подлежащие исследованию, подвергали серийному разведению в DMSO в десять этапов с 3-кратным разведением на каждом из них, начиная с 10 мМ маточных растворов в DMSO в малообъемном планшете(планшетах) Echo. Разведенные соединения или только DMSO затем распределяли из планшета(планшетов) для разведения в 384-луночный черный планшет(планшеты) для анализа Greiner (№ в каталоге 781086, 50 нл/лунка) с помощью акустического устройства для манипуляций с жидкостью Echo 550 (Labcyte).

Замороженные клетки Hela размораживали и переносили в среду для анализа Hela (99% полной среды для культивирования Hela, 1% пенициллина/стрептомицина) в объеме 20 мл среды/пузырек с клетками. Клетки осаждали центрифугированием при 250 g в настольной центрифуге в течение 5 мин. и суспендировали в одинаковом объеме среды для анализа Hela. Клетки затем подсчитывали и корректировали их количество до плотности 2×10⁵ клеток/мл в среде для анализа Hela. Стерильный L-триптофан добавляли к клеткам с конечной концентрацией L-триптофана, составляющей 300 мкМ. Небольшую аликвоту (2 мл/планшет) клеток Hela откладывали и не подвергали обработке IFNγ, чтобы она служила в качестве Мах-Е контроля. Остальные клетки Hela добавляли со стерильным IFNγ (№ в каталоге 285-IF, R&D systems) в конечной концентрации, составляющей 100 нг/мл.

Клетки Hela с IFNγ и без него распределяли в соответствующие лунки 384-луночных планшетов для анализа, содержащих соединения. Планшеты инкубировали в течение приблизительно 48 часов при 37°С в инкубаторе с 5% СО₂. После этого 12 мкл 0,5 М метилизонипекотата в диметилсульфоксиде добавляли в каждую лунку и планшеты запечатывали и инкубировали при 37°С без СО₂ в течение ночи. Планшеты центрифугировали в течение 1 мин. при 200 × g. Возникающую в результате флуоресценцию измеряли на планшет-ридере Spectramax (Molecular Devices) с фильтром длины волны возбуждения на 400 нм и с фильтром длины волны эмиссии на 510 нм.

Интенсивность флуоресценции в каждой лунке корректировали к фоновому значению, наблюдаемому в лунках с клетками, не получавшими обработку IFNγ, и выражали в виде доли интенсивности, наблюдаемой в лунках с клетками, получавшими обработку IFNγ и только DMSO. Значения активности рассчитывали с помощью подбора линейной функции методом наименьших квадратов по четырехпараметрическому логистическому уравнению для IC₅₀.

Данные о биологической активности с применением анализа фермента IDO1 и клеточного анализа IDO1, описанного выше, кратко изложены в таблице ниже. Соединения, раскрытые в данном документе, обычно имеют IC₅₀, составляющую от приблизительно 0,1 нМ до приблизительно 20000 нМ, или, более конкретно, от приблизительно 1 нМ до приблизительно 10000 нМ, или, более конкретно, от приблизительно 5 нМ до приблизительно 5000 нМ, или, более конкретно, от приблизительно 10 нМ до приблизительно 1000 нМ, или, еще более конкретно, от приблизительно 10 нМ до приблизительно 500 нМ. Такой результат является показателем характерной активности соединений при применении в качестве ингибитора фермента IDO. Данные специфической активности в виде IC₅₀ для иллюстративных соединений, раскрытых в данном документе, представлены в следующей таблице.

Анализ человеческой IDO1 в цельной крови

Соединения, подлежащие исследованию, подвергали серийному разведению в DMSO в десять этапов с 3-кратным разведением на каждом из них, начиная с 10 мМ. 3 мкл разведенных соединений или только DMSO затем распределяли из планшета для разведения в полипропиленовый 96-луночный планшет для анализа, содержащий 97 мкл RPMI с помощью акустического устройства для манипуляций с жидкостью Echo 555 (Labcyte). LPS и IFNγ готовили в RPMI в концентрации, 10-кратно превышающей конечную концентрацию, (1000 нг/мл), конечная концентрация составляет 100 нг/мл.

Цельную кровь человека забирали в покрытых гепарином натрия пробирках у здоровых внутренних доноров. Двести сорок мкл крови переносили в каждую из лунок 96-луночного планшета с v-образным дном. Тридцать мкл соединения переносили из промежуточного планшета для разведения и инкубировали в течение 15 мин. Тридцать мкл из стимуляторов затем переносили в кровь и тщательно смешивали. Планшет накрывали воздухопроницаемой мембраной и инкубировали при 37°С в течение ночи (18 часов).

На 2 сутки меченый изотопом стандарт кинуренина и триптофана готовили в воде в 10-кратной концентрации и 30 мкл добавляли в кровь в конечной концентрации 3 мкМ. Планшеты для анализа центрифугировали при 300 × g в течение 10 мин. при отсутствии торможения для отделения плазмы от эритроцитов. Шестьдесят мкл образцов плазмы удаляли, не потревожив эритроциты. Плазму разводили RPMI в соотношении 1:1 и белки осаждали с двумя объемами ацетонитрила. Планшеты центрифугировали при 4000 × g в течение 60 мин. Двадцать мкл супернатанта аккуратно переносили в 384-луночный планшет, содержащий 40 мкл 0,1% муравьиной кислоты в воде и анализировали с помощью LC/MS/MS (жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией).

Анализы LC/MS/MS осуществляли с применением системы Thermo Fisher LX4-TSQ Quantum Ultra. Эта система состоит из четырех насосов для бинарных смесей для высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) Agilent и тройного квадрупольного MS/MS инструмента TSQ Quantum Ultra. Для каждого образца 5 мкл впрыскивали на колонку Atlantis Т3 (2,1 мм × 150 мм, размер частиц 3 мкм) от Waters. Градиент подвижной фазы, прокачиваемой со скоростью 0,8 мл/мин., использовали для элюирования анализируемых веществ из колонки при 25°С. Элюирование начинали при 0% В с линейным повышением до 25% В в момент времени 6,5 мин., выдерживанием при 25% в течение 1 мин., повторным уравновешиванием до 10 мин. Подвижная фаза А состояла из 0,1% муравьиной кислоты в воде. Подвижная фаза В состояла из 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле. Данные получали в режиме регистрации положительных ионов с применением HESI интерфейса. Рабочие параметры для инструмента TSQ Quantum Ultra представляли собой напряжение на капилляре источника для электрораспыления 4000В, температуру капилляра 380°С, температуру испарителя 400°С, давление покровного газа 60 условных единиц, давление вспомогательного газа 20 условных единиц, цилиндрическая линза 85 и давление газа для соударений 1,2 мторр. SRM-хроматограммы для кинуренина (Q1: 209,2>Q3: 94,0) и внутреннего стандарта (Q1: 215,3>Q3: 98,2) получали в течение 90 секунд. Площадь пика интегрировали с помощью программного обеспечения Xcalibur Quan. Соотношения между кинуренином, образовавшимся в реакционной смеси, и 2D6-кинуренином, добавляемым в качестве внутреннего стандарта, использовали для получения значений процентного ингибирования и IC₅₀. Соединения титровали и значения IC₅₀ рассчитывали с помощью 4-параметрической формулы для подбора сигмовидной кривой.

Данные биологической активности селективных соединений с применением анализа человеческой IDO1 в цельной крови, описанного выше, кратко изложены в таблице ниже.

Несмотря на то что настоящее изобретение было описано и проиллюстрировано со ссылкой на определенные конкретные варианты его осуществления, специалисты в данной области техники поймут, что различные адаптации, изменения, модификации, замены, удаления или добавления процедур и протоколов могут быть произведены без отступления от идеи и объема настоящего изобретения.

1. Соединение формулы (Ib) или его фармацевтически приемлемая соль

(Ib),

где

m представляет собой 1 или 2;

R выбран из группы, состоящей из:

(a) -(C=O)-(NH)_q-R^c, где q представляет собой 0 или 1; и R^c выбран из группы, состоящей из:

(i) водорода,

(ii) -C_1-4алкила, необязательно замещенного одним-двумя -OH,

(iii) -C_3-6циклоалкила, необязательно замещенного -OH;

(b) -S(O)₂-NH₂; и

(c) -S(O)₂-C_1-4алкила;

каждый случай R¹ независимо выбран из группы, состоящей из (a) водорода и (b) галогена; и

каждый случай R² независимо выбран из группы, состоящей из (a) водорода и (b) –OH.

2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где m представляет собой 2;

R выбран из группы, состоящей из: (a) -S(O)₂-NH₂, (b) -S(O)₂-CН₃, (c) -S(O)₂-CН₂СН₃ и (d) S(O)₂-CН₂CН₂СН₃;

R¹ выбран из группы, состоящей из: (a) водорода, (b) -F и (c) -Cl; и

каждый случай R² представляет собой водород.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, причем соединение выбрано из группы, состоящей из:

(S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-(2-(сульфамоиламино)этокси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

(S)-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидрокси-4-((1-(2-гидроксиацетил)азетидин-3-ил)окси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

(S)-N-(2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)этил)ацетамида,

(S)-2-((4-(N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1(6),2,4-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил)-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси)-N-(2-гидроксиэтил)ацетамида,

N-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}-2-гидроксиацетамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{2-[(метилсульфонил)амино]этокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-N-[(2S)-1-гидроксипропан-2-ил]ацетамида,

2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-N-[(2R)-1-гидроксипропан-2-ил]ацетамида,

2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-N-[(2S)-2-гидроксипропил]ацетамида,

2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-N-[(2R)-2-гидроксипропил]ацетамида,

4-[2-(карбамоиламино)этокси]-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-(2,3-дигидроксипропил)-2-({4-[N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил]-1,2,5-оксадиазол-3-ил}окси)ацетамида,

2-[(4-{N-[(1S)-6-фтор-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-N-(2-гидроксиэтил)ацетамида,

2-({4-[N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил]-1,2,5-оксадиазол-3-ил}окси)-N-(2-гидрокси-2-метилпропил)ацетамида,

4-{2-[карбамоил(2-гидроксиэтил)амино]этокси}-N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(2R)-2,3-дигидроксипропил]-2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]ацетамида,

2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]ацетамида,

4-[3-(карбамоиламино)пропокси]-N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

2-({4-[N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил]-1,2,5-оксадиазол-3-ил}окси)-N-(2-гидроксиэтил)-2-метилпропанамида,

(2R)-N-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}-2,3-дигидроксипропанамида,

4-[(азетидин-3-ил)окси]-N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}-1H-1,2,4-триазол-3-карбоксамида,

2-({4-[N-(4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил)-N'-гидроксикарбамимидоил]-1,2,5-оксадиазол-3-ил}окси)-N-(2-гидроксиэтил)пропанамида,

N-[(1S)-6-фтор-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]-N'-гидрокси-4-[2-(сульфамоиламино)этокси]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(3S)-1-(гидроксиацетил)пирролидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

(2S)-N-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}-2,3-дигидроксипропанамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-[2-(метилсульфонил)этокси]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-[2-(4H-1,2,4-триазол-4-ил)этокси]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-(3-сульфамоилпропокси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[1-(1H-1,2,4-триазол-3-карбонил)азетидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(3R)-1-сульфамоилпирролидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(3S)-1-сульфамоилпирролидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}пропанамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-(2-сульфамоилэтокси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{1-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-2-метилпропан-2-ил}-2-гидроксиацетамида,

N-{цис-3-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]циклобутил}ацетамида,

N-{транс-3-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]циклобутил}ацетамида,

N-{цис-3-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]циклобутил}-2-гидроксиацетамида,

N-{1-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-3-гидроксипропан-2-ил}ацетамида,

N-{(2S)-2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]пропил}ацетамида,

метил-{2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]этил}карбамата,

4-{[цис-3-(карбамоиламино)циклобутил]окси}-N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[цис-3-(сульфамоиламино)циклобутил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{2-[(3R)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-2-оксоэтокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{2-[(3S)-3-гидроксипирролидин-1-ил]-2-оксоэтокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{(2S)-2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]пропил}-2-гидроксиацетамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[1-(1-гидроксициклопропан-1-карбонил)азетидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-({1-[(2S)-2-гидроксипропанoил]азетидин-3-ил}окси)-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-[(1-сульфамоилпиперидин-4-ил)окси]-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[1-(гидроксиацетил)пиперидин-4-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{(2R)-1-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-3-гидроксипропан-2-ил}ацетамида,

N-{(2S)-1-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-3-гидроксипропан-2-ил}ацетамида,

N-{(2S)-3-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-2-гидроксипропил}ацетамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(2S)-1-(гидроксиацетил)азетидин-2-ил]метокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-{(2S)-2-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]-3-гидроксипропил}ацетамида,

N-{транс-3-[(4-{N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидроксикарбамимидоил}-1,2,5-оксадиазол-3-ил)окси]циклобутил}-2-гидроксиацетамида,

4-{[транс-3-(карбамоиламино)циклобутил]окси}-N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(2R)-1-(гидроксиацетил)пирролидин-2-ил]метокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида,

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[1-(гидроксиацетил)азетидин-3-ил]метокси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида и

N-[(7S)-4-фторбицикло[4.2.0]окта-1,3,5-триен-7-ил]-N'-гидрокси-4-{[(3R)-1-(гидроксиацетил)пирролидин-3-ил]окси}-1,2,5-оксадиазол-3-карбоксимидамида.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении IDO, причем композиция содержит инертный носитель и эффективное количество соединения по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Применение соединения по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения или предупреждения связанного с IDO заболевания или нарушения.

6. Способ лечения или предупреждения связанного с IDO заболевания или нарушения у субъекта-млекопитающего, который включает введение субъекту эффективного количества соединения по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Способ по п. 6, в котором связанное с IDO заболевание или нарушение представляет собой рак, вирусную инфекцию, HCV инфекцию, депрессию, нейродегенеративные нарушения, травму, разновидности старческой катаракты, трансплантацию органа и аутоиммунные заболевания.

8. Способ по п. 7, в котором рак представляет собой рак ободочной кишки, поджелудочной железы, молочной железы, представительной железы, легкого, головного мозга, яичника, шейки матки, яичек, почки, головы и шеи, лимфому, лейкоз или меланому.

9. Применение соединения по любому из пп. 1-3 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения или предупреждения связанного с IDO заболевания или нарушения.