Способ определения гистонов

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

О Il И С А Н И Е,1))423026

ИЗОБРЕТЕ Н ИЯ

Союз Советскил

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 13.09.71 (21) 1700938, 31-16 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.04.74. Бюллетень № 13

Дата опубликования описания 10.09.74 (51) М. Кл. С Oln 27/26

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 612.398.139;616

-074 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Шляховенко и Г. 3. Негрей

Институт проблем онкологии АН Украинской ССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТОНОВ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в цитологии, генетике и биохимии.

Известен способ определения гистонов путем их электрофоретического разделения и выявления белковых зон красителем амидочерным. Однако этом способ не lIIозволяет выделять фракции с определенным аминокислотным составом.

Целью изобретения является обнаружение фракции гистонов, богатой лизином. Для этого электрофореграммы, отмытые от избытка амидо-черного, обрабатывают в растворе частично полимеризованного красителя тиазинового ряда, например, толуидинового синего.

Пример 1. На первом, этапе известным образом получают электрофореграмму гистонов на 15%-ном полиакриламидном геле, которую окрашивают в 1%-ном растворе амидо-черного в с меси метанол вЂ” уксусная кислота вЂ во (в соотношении 5:1:5) в течение часа при комнатной температуре. Затем блок геля с проявленной электрофореграммой отмывают от избытка амидо-чер|ного в 1н. растворе уксусной кислоты в течение 24 вЂ” 48 час, меняя экстрагирующую среду через каждые 3 вЂ” 4 час. Конец экстракции определяют визуально по достижению бесцветного фона.

Дальнейшую обработку проводят следующим образом.

В 100 мл дистиллированной воды вносят

50 мг толуидинового синего (ЧДА) H перемешивают при нагревании или выдерживают при комнатной температуре несколько суток. В по5 лученньш 0,05%-ный раствор микропипеткой по капле вносят 0,15 вЂ” 0,20 мл 0,1%-ного раствора рибонуклеиновой кислоты (РНК) в

0,05 М ацетатом буфере (рН 5,5) встряхивая до выпадения частично полимеризованноIo го на РНК красителя в виде фиолетово-синих хлопьев. Суспензию выдерживают в течение часа при комнатной температуре, после чего осадок отделяют центрифугированием, дважды промывают водой, заливают осадок 1 н.

>s раствором уксусной кислоты и через 1 вЂ” 2 час смесь нновь цеитрифугируют. отбрасывая осадок. Полученньш прозрачный раствор гото в к использованию для окраски электрофореграмм.

2п В указанный раствор погружают блок полиакриламидного геля, полученного на первой стадии, на 1 вЂ” 2 часа, отмывают в 1 н. растворе уксусной кислоты в течение 12 вЂ” 24 час, меняя среду через каждые 3 вЂ” 4 час, и используют для анализа известным образом. Богатые лизи ном фракции гистонов имеют красно-фиолетовый цвет на фоне темно-синих зон, свидетельствующих о присутствии прочих белков.

Пример 2. Все операции по подготовке

ЗО электроферограммы, окрашенной амидо-чер423026

Составитель С. Щенева

Редактор T. Каранова Техред Л. Богданова Корректор М. Лейзерман

Заказ 2309/10 Изд. Ма 703 Тираж 651 11одписиое

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ным, и их обработке раствором частично по.лимеризованного красителя тиазинового ряда производят, как в примере 1.

Раствор красителя приготовляют следующим образом (по экспресс-методу) . Известным образом готовят блоки чистого 10 вЂ” 15%ного полиакриламидного геля объемом 2000вЂ”

2500 мм в виде прямоугольных параллелепипедов, (в данном случае размер 60Х20Х2 мм), которые в течение 30 вЂ” 60 мин пропитывают

0,5 /о-ным раствором РНК в ацетатном буфере, после чего быстро споласкивают водой.

Затем эти блоки на 20 мин погружают в

0,05%-ный водный раствор толуидинового синего и вновь споласкивают водой. После выдержива н ия в течение часа обработанных таким образом блоков в 1 н. уксусной кислоте получают требуемый, реактив в виде раствора.

В этом случае яркость окраски по сравнению с результатами обработки по примеру 1 повышается. Упрощается и ускоряется процесс подготовки окрашивающего раствора.

5 Срок хранения в среднем 3 вЂ” 4 недели, возможно использование в течение трех месяцев.

Готовые электрофореграммы хранят в 1 н. растворе уксусной кислоты.

Предмет изобретения

Способ определения гистонов путем их электрофоретического разделения и выявления белковых зон красителем амидо-черным, отличающийся тем, что, с целью обнару15 жения фракции гистонов, богатой лизином, электрофореграммы, отмытые от, избытка амидо-черного, обрабатывают в растворе частично полимеризованного красителя тиазинового ряда, например, толуидинового синего.

Патент 418783 // 418783

Патент 416602 // 416602

Патент 412551 // 412551

О п и с а н и изобретения // 405071

Способ определения величины магнитного момента ферромагнитной частицы сферической формы // 396642

Способ количественного определения белковых фракций // 372498

Электрохимический способ анализа газов // 371495

Способ определения электрофоретической подвижности дисперсных частиц суспензий // 363907

Диффузионный кулонометрический датчик для измерения влажности газов // 354336

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049