Способ получения модифицированных поли- -лизинов

 

0sv

ОПИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕН И Я

К ПАТЕНТУ

00 474I37

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимый от патента (22) Заявлено 28.04.73 (21) 1914705!23-4 (51) М. Кл. С 07с 103/52 (32) Приоритет 03.05.72 (31) 7215696 (33) Франция

Опубликовано 14.06.75. Бюллетень ¹ 22

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 547.964.4.07 (088.8) Дата опубликования описания 25.03.76 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Ги Бура и Родольф Марграф (Франция) -Иностранная фирма

«Рон-Пуленк С.А.» (Франция) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОДИФИЦИРОВАННЫХ

ПОЛИ-L-Л ИЗ И НОВ

5 N — (СНз) 2, 1-оо-он-мн — )

1 (Ц214

МН2 (Г) (- (. 0 — (11-X EC- )

1 (СН,1, ! к (ij — NH — (СНз) з — $0зН.

Изобретение относится к способу получения новых модифицированных поли-1 -лизинов, которые могут быть использованы в качестве фармацевтических препаратов.

Известен способ получения поли-L-.÷èçèíoB, заключающийся в том, что получают карбоксиангидрид в-карбобензокси-L-лизина, который полимеризуют известным способом. С полученного поли-в -карбобензокси - 1 - лизина удаляют защитные группы обработкой НВг— — СНзСООН, получают поли-I -лизин.

Предлагается способ получения модифицированных поли-1 -лизпнов, содержащих и звеньев формулы 1 и т звеньев формулы II образующих статистическую полипептидную цепь со значением и+т большим 2000, где

m может быть равным О, à R — один из следующих радикалов — NH — $0зН; — NH — (СН2) „— $0зН, где р =! — 4; — NH — (СНз) з — СООН;

-- -NH — СΠ— СН,СН,ОН; — NH — СО (СН2) 2 — $03Н; — NH — СΠ— NH; — NH — С вЂ” ХН,; — ОН;

) (NH заключающийся в том, что на поли-L-лизин действуют любым известным реагентом, переводящим радикалы ХНз в радикалы R, имею10 щие указанные значения.

Пример 1. К раствору 2,3 г бромгидрата поли-1 -лизина (степень полимеризацип—

4000 звеньев полимерной цепи 1 -лизина) в

15 100 мл воды добавляют 2,7 г карбоната калия и 1,22 г пропансульфона.

После нагревания в течение 3 ч при 50 С вновь добавляют 1 г пропансульфона и продолжают подогрев при 50 С в течение 8 ч.

20 Затем раствор диализуют через целлюлозную мембрану, регенерируемую 10 л дистиллированной воды в течение 48 ч, после добавления этанола полимер выпадает в осадок и его высушивают. В результате получают 1,0 г

25 сульфопропиленового поли-1 -лизина, состоящего из 61% звеньев формулы II полимерной цепи и 39% звеньев формулы I, где R представляет собой группу

474137

Пример 2. При тех же условиях, что и в примере 1, добавляют 3,75 г карбоната калия и подогревают 5 ч при 50 С. После диализа, осаждения и сушки получают 0,3 г сульфопропиленового поли-L-лизина, состоящего из

83 /о звеньев формулы II и 17 /о звеньев формулы I, где R представляет собой группу — NH — (СНа) з — 50зН.

П р имер 3. При тех же условиях, что и в примере 2, после 5 ч подогрева добавляют в раствор 700 г КзСОз и 1,22 r пропансульфона; оставляют смесь на 5 ч при 50 С; последнюю операцию последовательно повторяют пять раз.

После диализа, осаждения и сушки получают 1,0 г полностью сульфопропиленового поли-I -лизина, 100 /о звеньев формулы I, где

R представляет собой группу — NH — (СНа) з — SO3H.

Пример 4. В перемешиваемую суспензию, состоящую из 50 мл метиленхлорида и

0,385 г поли-L-лизина <а лиофильной основе со степенью полимеризации, равной 4000, добавляют 95 мкл р-пропилактона и, помешивая, выдерживают в течение 20 ч при 20 С.

Затем фильтруют, промывают и сушат. Получают 0,280 r сухого продукта, который перемешивают в течение трех дней при температуре окружающей среды в 50 мл водного раствора соляной кислоты 0,1 н. Полученный таким образом раствор фильтруют, затем диализуют на целлюлозной мембране, регенерируемой 10 л дистиллированной воды. После лиофилизации остатка получают 0,18 г сополимера (1 - лизин)-(Ne - (карбоксил - 2этил)-1 -лизина), растворимого в воде и состоящего из 72,5 звеньев II и 27,5 /о звеньев

I, где R представляет собой группу — NH — (СН ) g — СООН.

Пример 5. 0,45 г бромгидрата поли-1лизина (степень полимеризации 4000) растворяют в 25 мл дистиллированной воды, охлажденной до 0 С, и при помешивании по капле добавляют 2,15 мл водного раствора NaOH.

Добавляют 0,27 мл р-пропилактопа и перемешивают в течение 90 ч при температуре окружающей среды. Раствор фильтруют, диализуют на целлюлозной мембране, регенерируемой 10 л дистиллированной воды в течение

48 ч; после добавления метанола содержимое выпадает в осадок, который промывают эфиром и высушивают.

В результате получают 0,30 г сополимера (Мe- (гидрокси-3 - пропинол) - 1 -лизина)- (Ие(карбокси-2-этил) -L — лизина), растворимого в воде и состоящего исключительно из звеньев полимерной цепи I, где R представляет собой группу — NH — СΠ— СНзСНзОН (75/о) и группу NH — (СНз)з — СООН (25%).

Пример 6. 1,05 г бромгидрата поли-1 -лизина (степень полимеризации 4000) растворяют в 40 мл дистиллированной воды, добав5

4 ляют 0,45 г цианата калия, перекристаллизованного из воды, и перемешивают в течение

20 ч при 20 С. Раствор диализуют на целлюлозной мембране, регенерируемой 10 л дистиллированной воды в течение 48 ч; при добавлении метанола содержимое выпадает в осадок, который высушивают.

В результате получают 0,7 г сополимера (1 -лизина) - (е-уреидо-1.-норлейцина), растворимого в воде и состоящего из 25 /о звеньев полимерной цепи II, HBr и 75 звеньев полимерной цепи I, где R представляет собой группу — NH — СΠ— NH>.

При тех же условиях, после воздействия в течение 20 ч цианата калия, повторно добавляют 0,45 r цианата калия и вновь оставляют смесь на 20 ч при 20 С. После диализа, выпадения в осадок и сушки получают поли(в-уреидо-L-норлейцин), содержащий 100% звеньев полимерной цепи I, где R представляет собой группу — МН вЂ” СΠ— NHq.

П р и м ер 7. В раствор 1,045 г бромгидрата поли-1 -лизина (степень полимеризации 4000) в 50 мл 0,1 н. водного раствора бромистого водорода, охлажденного до 0 С, добавляют раствор 1,0 г NANO> в 20 мл воды.

Смесь оставляют реагировать в течение

20 ч при температуре окружающей среды.

Раствор диализуют на целлюлозной мембране, регенерируемой 20 л дистиллированной воды в течение 48 ч; после добавления этанола выпадает осадок, который высушивают.

В результате получают 0,8 r сополимера (1 -лизин) - (е-гидрокси-1 -норлейцина), состоящего из 12 /о звеньев полимерной цепи 11, НВг и 88 /о звеньев полимерной цепи формулы I, где R представляет собой группу — ОН.

Пример 8. 1,254 r бромгидрата поли-1лизина (степень полимеризации 4000) растворяют в 100 мл дистиллированной воды.

В полученный прозрачный раствор добавляют 6 г тетрабората натрия (Na>B„O>. .1ОН.О), затем охлаждают до 0 С и устанавливают рН, равным 9,8, путем добавления водного раствора 1 и. NaOH.

Затем добавляют 2,0 г комплексного соединения серного пиридинангидрида, энергично перемешивают, поддерживая температуру

0 С и рН, равное 9,8, путем добавления водного раствора 1 и. NaOH. Реакцию заканчивают, когда все комплексное соединение переходит в раствор, а рН больше не изменяется.

Раствор фильтруют и подвергают диализу на целлюлозной мембране, дважды регенерируемой 10 л дистиллированной воды, зазем

10 л 0,1 и. водного раствора бромистого водорода, а затем снова дважды 10 л дистиллированной воды. 320 мл концентрируют до

30 мл путем ультрафильтрации па мембране

AMICONXM 100 (задерживая частицы, превышающие 10 Дальтон) и подвергают лиофилизации. В результате получают 1,0 r сополимера (L-лизина)-(в-сульфамино-L - норлейцина), состоящего из 20 /о звеньев поли474137

5 мерной цепи II и 80О/о звеньев полимерной цепи I, где R-группа — iNH — $0зН.

П р им ер 9. 1,3 г основного лиофилизированного поли-I -лизина (степень полимеризации 4000) растворяют при помешивании в

100 мл муравьиной кислоты при температуре окружающей среды. Затем добавляют 2 мл водного 30 /о-ного раствора муравьиного альдегида и подогревают в течение 1 ч при

35 С. Вновь добавляют 2 мл 30 /О-ного формалина и в течение 1 ч продолжают подогрев при 35 С.

В вакууме испаряют муравьиную кислоту, осадок промывают этиловым эфиром, снова добавляют 100 мл водного раствора 1 н.

NaOH.

Осуществляют ультрафильтрацию на мембране АМ1СОХ ХМ 100 (задерживающей частицы, превышающие 10 Дальтон) до рН в ультрафильтрате, равном 7, и производят лиофилизацию.

В результате получают 1 г поли-(е-диметиламин-L-норлейцина), состоящего исключительно из звеньев полимерной цепи I, где Rгруппа — N (СН ) >.

11р и м ер 10. 1!ри тех же условиях, что и в примере 8, добавляют 1,2 г комплексного соединения серного пиридинангидрида, энергично перемешивают и путем добавления 1 н.

NaOH поддерживают температуру, равную

0 С, и рН, равное 9,8.

Через 2 ч повторно добавляют 1,2 г комплексного соединения и продолжают поддерживать ту же температуру и рН. Через 2 ч в третий раз добавляют 1,2 r комплексного соединения, что в общем составляет 3,6 г комплексного соединения серного пиридинапгидрида, и продолжают в течение 2 ч поддерживать рН 9,8.

Затем смесь выдерживают в течение 15 ч при 0 С и очищают, как указано в примере 3.

Получают 1,160 г поли-(в-сульфамино-1норлейцина), состоящего из 100 /о звеньев полимерной цепи 1, где R имеет значение — 11Н вЂ” SO Н.

Проверяют отсутствие лизина путем динитрофенилирования по способу SAiU GER.

П р и м ер 11. Растворяют 0,209 r бромгпдрата поли-1-лизина со степенью полимеризации, равной 4000, в 15 мл дистиллированной воды.

В полученный прозрачный раствор добавляют 0,5 г тетрабората натрия (NaqB407.

I0H O), затем охлаждают до 0 С и путем добавления едкого натра устанавливают рН, равный 9,8.

Затем шестью равными порциями добавляют 13,6 г Р-сульфопропионового ангидрида, имеющего формулу

15 0

6 поддерживая температуру 0 С, и путем добавления 20 мл едкого натра поддерживают рН 9,8.

Реакцию заканчивают, когда рН больше не изменяется.

Прозрачный раствор ультрафильтруют через ультрафильтрационную мембрану, задерживающую частицы с молекулярным весом, превышающие 10 Дальтон. Остаток разбавляют дистиллированной водой до тех пор, пока удельное сопротивление ультрафильтрата не превысит 10" Ом.

После этого остаток лиофилизуют. Получают 0,168 г сополимера (L-лизин)-(в-(сульфо-3-пропинил) - I - лизина), состоящего из

75% звеньев полимернои цепи 11 и 25 "/о звеньев полимерной цепи I, где К представляет собои —, Н вЂ” СΠ— (СН ) — SO Н.

I1p и м е р 12. В 15 мл воды растворяют

0,209 г бромгпдрата поли-L-лизина со степенью полимеризацпи 4000. В полученный прозрачный раствор добавляют по капле при перемешииании 0,3 мл триэтиламина; смесь охлаждают до 0"С. 11олучают белый гель.

4,16 г гидразинокарбоцил -2-этансульфата натрия (моногидрат) растворяют при 0"С в

50 мл соляной кислоты. Небольшими порциями добавляют 3,45 г нитрита натрия и оставляют реагировать в течение 30 мпн при 0 С. г1збыток азотистой кислоты удаляют затем с помощью потока азота. 11олученный таким ооразом прозрачный раствор добавляют в изготовленный гель.

Смесь выдерживают в течение 1 ч при перемешивании и при температуре 0 С, а полученный прозрачный раствор оставляют а

15 ч при 20 С, заiем, добавляя 10 í. NaOH, устанавливают рН, равный 13. После этого производят ультрафильтрацию, как указано в примере 11.

11осле лиофилизации получают 0,254 г сополимера (L-лизин)- е- (сульфо-3-пропионил)1 -лизина J, состоящего из 25% звеньев полимерной цепи II и 75",% звеньев полимерной цепи 1, где R имеет значение

1 идразпнокарбонил-2-этансульфонат натрия (моногидрат) получают следующим образом.

В 13,6 г р-сулыропропионового ангидрида в безводном тетрагидрофуране при 0 С добавляют 500 мл 0,2 Я этилата натрия, выпадает осадок. После промывки и сушки получают

20 г этоксикарбоннл-2-этансульфоната натрия.

1(11,1 г последнего продукта добавляю г

6 мл гпдратпрованного гидразина и 9 мл дистиллированной воды. Подогревают в течение

2 ч с обратным холодильником, затем добавляют 20 мл воды и 75 мл этанола. После охлаждения продукт кристаллизуется. После фильтрации и сушки получают 9,3 г гидразинокарбонил-2-этансульфоната натпия (моногидр ага) .

474137 (,0 — 1И вЂ” МИ-

1 ((1 24 !

R (i) - С0 — С)1 — Х ?т — i

1

1(,Нг) 4

""г (Г1) 15

NH

=,,1Н -ЯН, 1!

) Та — ХН вЂ” С вЂ” NH; — ОН; — N (CH3)

Предмет изобретения

Составитель Л. Фомина

Texpeä Е. Подурушина

Редактор Е. Хорина

Корректор О. Тгорина

3;и;аз 3!0 9 Изд. ¹ 1658 Тираж 529 Подписное

Ц11ИИГ111 Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, ир, Сапунова, 2

Пример 13. Сополимер (1 -лизин)-(1-гомоаргинин).

В 50 мл дистиллировашкй воды при 20 С последовательно добавляют 1,045 г бромгидрата поли-L-лизина со степенью полимеризацпи 4000, а затем 1,9 г тетрабората натрия (1 1азВ40т 10Н О).

Затем по капле при помешивании добавляют 12,5 мл водного раствора 1 í. NaOH, прн этом рН р" ñòâîðà с 9,7 изменяется до

10,9.

B этот однородный раствор добавляют

1,0 г сульфата S-метилизотиоуронила и, помешивая, нагревают в течение 30 мин при

70 С.

Раствор, охлажденный до 20 С, йильтруют через ультрафильтрационную мембрану, задерживая вещества с молекулярным весом, превышающим 10" Дальтон, растворяя сстаток с помощью едкого натра 10 — " н. до тех пор, пока ультрафильтрат не содержит ионы бромида, а затем, растворяя дистиллированной водой, до получения ультрафильтрата с удельным сопротивлением, превышающим ! 0 — Ом.

Путем лнофилизации остатка получают

0,825 r сополимера (1 -лизина) - (1 -гомоаргиннна), состоящего из 50о звеньев полимерной цепи 1 и 50% звеньев полимерной цепи

11, где R имеет значение

Способ получения модифицированных .поли1-лпзинов, содержащих п звеньев формулы 1 и и звеньев формулы 11 образующих статистическую полипептндную

10 цепь со значением n+m большим 2000, где и может быть равным О, а К вЂ” один нз следующих радикалов — -МН -SQgH; NH (СН ) д ЯОзН, где р= l — 4; — JH — (СН2) 2 — СООН; — NH — СΠ— СН,СН,ОН;

Х Н СО (СНз) в 503Н, — NH — СΠ— КН,; — NH — С вЂ” МН,; — ОН;

1 — N (СНз),.

25 о т л н ч а ю Ill и и с я тем, что в поли-l.-лизине е-Аминогруппы переводят в радикалы следующих формул: — NH — ЯОзН; — NH — (СНз) „— ЬОзН, r„e р=l — 4;

Зо NH (СН2) СООН, NH СО СН2СН ОН вЂ” NH — СО (СН,),— ЯОзН; — NH — СΠ— ХН,; взаимодействием с соответствующим реаген4О том с последующим выделением целевого продукта известным способом.