Способ получения рибонуклеозид-5-три фосфатов или сахарофосфатов

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (ц) 522190

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) 3а явлено 06.01.75 (21) 2092898/04 (51) М, Кл.и

С 07 H 19/00

А 61 К 31/70 с присоединением заявки №

Государственный комитет

Совета Министров СССР но делам иэабретений и отирытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.07.76Бюллетень № 27 (4б) Дата опубликования описания 06.09.76 (53) УДК 547.963.32.

02(088 8) (72) Авторы изобретения

С. Э. Ансберга, А. М. Ирген, И. И. Брод, В. P. Кесгере и В. П. Каула

Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени (71) Заявитель научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕОЗИД-5 -ТРИФОСФАТОВ

ИЛИ САХАРСФОСФАТОВ

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения рибонуклеозид-5 -трифосфатов и сахарофосфатов, широко применяемых в биологии, генетике и медицине. Ь

В производстве нуклеозидфосфатов и сахарофосфатов распространен метод биологического фосфорилирования нуклеоэидов и нуклеозидмонофосфатов (окислительное фосфори- лирование). В атом случае биосинтез осу- 1ð шествляется катализом ферментов пивных и пекарских дрожжей для плазмолиза которых используют голуол.

В атих способах за процессом следят по i5 снижению содержания неорганического фосфора, что является трудоемким и долгим процессом и влечет за собой снижение выхода продукта (1. 23.

Известен способ получения рибонуклеоэид-М

-5 «трифосфатов и сахарофосфатов биохимическим фосфорилированием сахаров и их производных ферментными системами пивных дрожжей. Фосфорилирующим агентом являют ся неорганические фосфаты. Процесс биосин- Ы

2 теэа протекает при 20-40оС и рН среды

6;5-7,5.

Контроль за процессом ведется по снижению количества неорганического фосфора в среде, выход (степень фосфорилирования)

75-82% (31.

В известном способе, однако, наблюдается снижение выхода целевого продукта за счет недостаточного контроля процесса биосинтеэа, гак как возможны потери при разложении целевых продуктов.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и обеспечение контроля и регулирования направлейного бис свите эа.

Биосинтез рибонуклеозид-5-трифосфатов или сахарофосфатов регулируется прибавлением дополнительного количества биокагалиэатора (пивные дрожжи) и о ходе реакции биосинтеэа судят по изменениям рН среды, что контролируется автоматически рН-метром.

В процессе биофосфорилирования при остановке снижения рН с 6,50 до 6,55 ввс» дят дополнительное количество пивных дрож3

5 жей, равпэе - - объема среды, и прекрат ша..-эт процесс i pê остановке повышения рН.

Предлагаемый способ дает возможность повысить выход целевых продуктов до 9899% (степень биофосфорилирэвания).

Пример 1. 200 r аденозина растворяют в 7,6 л воды. К раствору прибавляют 0,,74 кг неорганических фосфатовКН РО :

7 :Ма Нр 0, 32.Н<О в соотношении 1:4Ä 14,4г

"„,(;1, 14,4 г Mg С1.; 6И О, 0,4 кг сахарозы, 9,5 л пивных дрожжей, 0,6 л толуола (pH среды 7,0 при 37ОС).

За ходом фосфорилирования следят по изменению рН автоматической регистрацией рН-ме тром., Реакцию фосфорилирования прекращают при рН среды 6,75.

Для прекращения реакции прибавляют2 кг трихлоруксусной кислоты при Остановке повышения рН, Степень биофосфорилирования 98%. Выход 200 r аденозин-5 -трифосфата.

Пример 2. 20 г натриевэй соли цитидпп-5 монофосфэрной кислоты растворяют

1 в 760 мл воды. К раствору прибавляют 63,8г неорганических фосфатов К Н РО4 . йп НтО Р Н т О в соотношении 1:4, 1,44 г Mg << ", 6 Н, О, 40 г сахарэзы, 1 л пивных дрэжжейи 60млтолуола(рН среды 7,0при37ОС).

3а ходом фосфорилирования следят по из-менению рН автоматической регистрацией рН.=метром. Реакцию фосфорилирэвания прекращают при рН среды 6,75.

Для прекращения реакции прибавляют

200 г трихлоруксусной кислоты при остановке,. повышения рН.

Степень биофосфорилирования 90%. Вы=

I ход 15 г цитиднн-5 — трифосфата.

Пример 3, 20 г йатриевой соли уридин--5 -монофосфорной кислоты раствори1 ют в 760 мл воды. К pecraopy прибавляют

98,94 г неорганических фосфатов КН тО

4 : Na. НРО, 12 И О в соотношении .1:4, 1 г К 61 в

1 r +gCI 6H G, 33,3 г сахарозы, 1 л пив ных дрожжей„60 taJl толуола (pH среды

7,0 при 37OC).

За ходом фосфорилировання следят llo изменению рН автоматической регистрацией

4 рН-метром. Реакцию фосфорилирования пре-. кращают при рН среды 6,75.

Для прекращения реакции прибавляют

200 r трихлоруксусной кислоты при останонке повыше н ие р Н.

Степень биофосфорилирования 90%. ВыФ ход 15 r уридин-5 -трифосфата.

Пример 4. 110 г сахарозы, 33 г неорганических фосфатовКН РО: Na. HPO

4 12Я О в соотношении 1:4, 5 г Ng5 бУ О, 39

5 r КС1 растворяют в 60 мл воды, прибавляют 200 r пивных дрожжей и 27 мл толуола.

Биофосфорилирование проводят при 37ОС и рН среды 7 О.

За ходом фосфэрилирования следят по из-. менению рН автоматической. регистрацией рН-метром. Для прекращения реакции прибавляют 200 r трихлоруксусной кислоты прн оотвновие повышения рН.

Степень фосфорилирования 95%, Выход

110 г бариевой соли 1,6-дифэсфата фруктозы.

Формула изобре гения

М

Ф

Способ получения рибонуклеозид-5 -трифосфатов или сахарофосфатов путем биохимического фосфэрилирования сахаров или их производных в присутствии ферментных

@ систем пивных дрожжей при 35-38 С и рН

6,9-7,0 с последующим выделением целевого продукта, î r л и ч а ю щ н и с я тем, что, с целью повышения выхода и обесцечения контроля и регулирования направленного биосинтеза, в процессе биофосфорили» рования при остановке снижения рН в пределах от 6,50 до 6,55 дополнительно вводят пивные дрожжи в количестве - - объема б среды и прекращают процесс при остановке повышения рН, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе изобретения:

1. Патент CIIIA ¹ 2174475, кл.195-12, 1937 г.

45 2. Авторское свидетельство СССР

¹ 395082, М.Кл. A 61 К 19/00, 19733.

3. Патент США ¹ 3138539, кл. 195-28, 23,06.1964 г. (прототип).

Составитель С. ЧеpHGBG

Редактор Д, Пинчук Texpeg И, Кова, Корректор A. Гриценко овине,оо75г318 Тирвы 575 Подл ис н Ое

ЫНИИПИ Государственнэгэ комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35„Раушская наб., д. 4/5 г

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4.