Способ очистки растворов антибиотиков неомициновой группы и пенициллина от пигментных примесей
„". ека Я5Д
00 537I12
ОПИСАНИЕ
Союз Советских
Социалистических
Республик
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 19.10.73 (21) 1974017/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет
Опубликовано 30.11.76. Бюллетень № 44
Дата опубликования описания 17.01.77 (51) M Кл С 12D 9/02
Государственный комитет
Совета Вбинистров СССР ао делам изобретений н открытий (53) УДК 615.45:615.779. .9 (088.8) (72) Авторы изобретения
T В. Торгованова, Л. М. Клюева, С. А. Жуковская, В. В. Стефанович и К. М. Смирнова
Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ РАСТВОРОВ АНТИБИОТИКОВ
НЕОМИЦИНОВОЙ ГРУППЫ И ПЕНИЦИЛЛИНА
0Т ПИГМЕНТНЫХ ПРИМЕСЕЙ
10 сн,-(сн,)-н с1
15 где и — 0 — 4:
Изобретение относится к способам очистки растворов антибиотиков от пигментных примесей.
Известны способы очистки растворов антибиотиков- (культур альных жидкостей, нативных растворов, элю атон, органических экстрактов) от сопутствующих им пигментных примесей с применением различных адсорбентов, на пример активированного угля, анионитов и др.
В производстве применение анионитов для освобождения растворов от пигментных примесей ограничено тем, что они вследствие свойственной им избир ательности способны сорбировать только некоторые пигментные вещества, сопутствующие антибиотикам в растворах. По этой причине в .качестве осветляющих агентов аниониты применяют-в производстве лишь немногих антибиотиков. Использование активированного угля для обесцвечивания растворов антибиотиков влечет за собой довольно значительные потери целевого продукта за счет адсорбции и инактивации; необходимость существенного разбавления растворов антибиотиков за счет промывки, а также большую трудоемкость операций и тяжелые санитарные условия труда.
Цель изобретения — усовершенствование способа очистки растворов антибиотиков от пигментных примесей, заключающееся в сокращении расхода активированного угля и упрощении процесса очистки наряду с повышением выхода целевого .продукта.
Это достигается тем, что .в качестве освет5 ляющего агента используют соединения общей формулы
R)ç R и Яз Н> СНз> С2НЗ Я
20 азот пиридина или его гомологов, алифатических или жирноароматических аминов, например полибензилпиридинийхлорид, с последующим отделением осадка извест25 ными, способами.
Исходным материалом служили культуральные жидкости Per. crysogenum штамма Б-2, полученные путем регулируемой ферментации на среде приведенного ниже состава и имею30 щие активность 20000 — 25000 ед/мл, 537112
Состав среды для биосинтеза, %
Аммоний сернокислый
Аммоний азотнокислый
Глюкоза или гидрол
1,25
0,6
15 или 30 соответственно
1,5
Формула изобретения
Составитель Л. Мишустина
Редактор М. Дмитриева Техред E. Петрова Корректор И. Позняковская
Заказ 2540/15 Изд. № 1808 Тираж 575 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Жир кашалотовый
Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,5
Кукурузный экстракт 2,25 — 2,5
Магний сернокислый 0,05
Мел 1,5
Натрий серновати стокислый (гипосульфит) 0,3
Натр едкий 0,4
Натрий уксуснокислый 1,25
Фенилуксусная кислота 1,0
Вода Остальное
Культуральную жидкость .подвергали обработке хлористым кальцием, фосфорнокислым натрием, а затем фильтровали.
Полученный нативный раствор обрабатывали .с целью коагуляции белковых примесей цетазолом, сернокислым аммонием и нитратом натрия с последующим отделением скоагулированного осадка.
Далее нативный раствор депигментировали добавлением раствора веществ общей структурной формулы.
После отделения осадка пигментов из нативного раствора экстрагировали бутилацетатом пенициллин, затем проводили реэкстракцию анти биотика содовым буфером и повторную экстракцию бутилацетатом. Второй бутилацетатный экстракт (БАЭ) очищали активирован ньгм углем до окрашенности 0,01 (по
ФЭКу при синем светофильтре).
Пример 1. К 10 л нативного раствора неомицина с активностью 4000 ед/мл добавляют при:перемешивании полибензилпиридинийхлорид (молекулярный вес 364) в количестве 0,1 вес. % к объему раствора. После двухчасовой выдержки осадок отделяют и раствор с активностью 4000 ед/мл направляют в колонну с катионитом КБ-2 в натриевой форме для сорбции неомицина. После сор|бции и,промывки неомицин десорбируют 7 % -ным .водным раствором аммиака.
Далее выделение антибиотиков ведут известным,методам. В,результате получают 12 г препарата сульфата неомицина с активностью
650 ед/мг. Выход готового продукта,по отношению к количеству антибиотика в нативном растворе составляет 52,4%.
Пр им ер 2. К 300 мл культуральной жидкости пенициллина добавляют при перемешивании полибензилпиридинийхлорид (молекулярный вес 531) в количестве 0,3 вес. % к объему раствора, выдерживают массу в течение 1 час.
Выпавший осадок вместе с мицелием отделяют. Получают нативный раствор с активностью 12700 ед/мл и окрашенностью 3,0 (по
ФЭКу при синем светофильтре). В результате экстракции пенициллина бутилацетатом получают первый бутилацетатный экстракт с окрашенностью 0,21. Второй бутилацетатный экстракт, полученный после вторичной экстракции антибиотика бутилацетатом, очищают активированным углем до окрашенности 0,01.
Расход угля — 0,04 г/млн. ед. Выход антибиотика в условиях опыта составляет 68,5% от содержания пенициллина в нативном растворе.
П р и м ер 3. К аммиачному элюату канамицина с рН 10 добавляют при перемешивании полибензилпиридинийхлорид (молекулярный вес 364) в количестве 0,2 вес. % к объему раствора. Показатель цветности элюата—
0,14. После выдержки в течение 1 час выпавший обильный хлопьевидный осадок отделяют.
Показатель цветности элюата после обработки — 0,09.
Способ очистки растворов антибиотиков неомициновой группы и пенициллина, например культуральных жидкостей, от пигментных примесей, отличающийся тем, что пигментированные растворы антибиотиков обрабатывают соединением общей формулы
45,где п=Π— 4;
R2 и R3 — Н> СНз, С2Нзз
N — — азот пиридина или его томологов, l алифатических или жирноароматических аминов, например, полибензилпиридинийхлоридом, с последующим отделением осадка известными способами.
