Способ получения нуклеопротеида вируса гриппа
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДВТВЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свна-ву (22) ЗаявлЕно 11.05.77 (21) 2484384/28-13
""650625
Союз Советских
Социалистических
Республик (51) М. Кл с присоединением заявки №
А 61 К 37/10
A 61 К 35/76, Гаеударственнвй квинтет
СССР на делам нзебретеннй н аткрытнй (23) Приоритет
Опубликовано 05.03,79Зюллетень № 9
Дата опубликования описания 08.03.79 (53) УДК 576.8. . 095. 17 2 (088.8) Л. Я, Закстепьская, В. Т. Иванова, А, А. Маныкин и С. М. Клименко (72) Авторы изобретения
Институт вирусологии имЛ. И. Ивановского АМН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИДА
ВИРУСА ГРИППА
Изобретение относится к области медицины, а именно к вирусологии.
Известен способ получения нукпеопротеида вируса гриппа путем обрабоч ки детергентом с последующим выделением целевого продукта экстракцией эфиром и градиентным центрифугированием jl) ., Однако препарат, полученный известным способом, загрязняется попипептидами оболочки.
Белью изобретения является повыше« ние чистоты препарата.
Эта цепь достигается тем, что вирус предварительно обрабатывают бромпайном, выделяют субвирусные частицы дифференциальным центрифугированием и обрабатывают их детергентом.
Способ осуществляют следующим образом.
Концентрированные и очищенные препараты вирусов, полученные из аллантоисной жидкости зараженных куриных эмбрионов, обрабатывают бромпайном в
4 течение 18 часов при температуре 37 С при соотношении 2 части бепка бромпайна на 1 часть белка вируса.
Субвирусные структуры-вирусы, лишенные наружных обопочечных белков, 5 осаждают центрифугированием при
30 000 об/мпн в течение 1 часа и сус пендируют в буфере Трис-НС1 рН 7,4.
Затем их подвергают дополнительной очистке центрифугированием в ппотностl0 ном градиенте хлористого цезия, сернокиспого цезия ипи тартрата калия при плотности 1,30-1,05 г/см при
22 000 об/мин в течение 18 часов.
Фракции, содержащие субвирусные частицы, отбирают, разводят буфером, осаждают при 30 000 об/мин в течение
1 часа. Степень удаления наружной обопочки контролируется эпектронномикроскопически.
Очищенные субвирусные частицы разрушают детергентами: дезоксихопатом натрия, тритоном и эфиром. Нукпеопротеид их разрушенных субвирусных чао650625
Составитель С. Малютина
Редактор О, Иванова Техред Ю. Ниймет Корректор О. Билак
Заказ 677/6 Тираж 671 Подписное
ЫНИИПИ Государственного комитета СССР по депам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП Патент, F, Ужгород, уп. Проектная, 4 тиц попучают центрифугкрованием в пинейном градиенте концентрации глицерина 15-30% при 16 000 об/мин в течение 18 часов. Фракции нукпеопротеида диапизуют в течение 18 часов при 4 С против буфера Трис-НС1 0,02 М рН 7,4, содержащего 0,02 M К аС1 0,002 М
ЭДТА.
Чистота препарата нукпеопротеида контропируется эпектронномикроскопичеоки и иммунопогически. Препарат содержит только спирали нукпеопротеида диаметром около 15 нм.
Препарат нукпеопротеида, полученный предлагаемым способом, антигенно монопитен, стимулирует при введении крысам преципитирующие антитела только к нукпеопротеиду, но не к обопочечным белкам. В реакции преципитации выявпяется одна поноса, отражающая взаимодействие антисыворотки с Нукпеопротеидным антигеном испытуемого вируса гриппа рода А. Реакция преципитации не набпюдается с хозяйским компонентом хориоаплантоисной оболочки куриного эмбриона нуклеотидным антигеном штамма 8 /Lee/40 и парагриппозного вируса . Сендай;
Предпагаемый способ позвопяет попностыо устранить загрязнение препарата побочными бенками, что в свою очередь, предотвращает ошибки при изучепии ампнокислотного состава, пептидных карт и морфопогических характеристик при исследовании эпидемически активных штаммов вируса гриппа на молекулярнобиологическом уровне.
Высокая степень чистоты и антигенная гомогенность препарата нукпеопротеида позвопяют использовать его для получения высокоактивных моноспецифи10 ческих антисывороток гриппа А и И, необходимых для тонкого антигейного анализа штаммовых отпичий в нуклеопротеиде, и также выявления роли вирусов гриппа животных в происхождении пандеИ мическис штаммов.
Фор мула изо бретения
Способ попучения нуклеопротеида ви26 руса гриппа путем обработки детергентом с поспедующим выдепением цепевого продукта экстракцией эфиром и градиентным центрифугированием, о т и ич а ю шийся тем, что, с цепью по вышения чистоты препарата, вирус предваритепьно обрабатывают бромпайном, выделяют субвирусные частицы дифференциальным центрифугированием и обрабатывают их детергентом.
Источники информации, принятые во внимание прк экспертизе
1.J.VirÜ ОЩ 1972 10, 795 800.
