Способ разделения клеток костного мозга

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

(54} СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА

Иэобретенн относится к медицине, а именно гематологии, Известен способ разделения клеток костного мозга путем центрифугирования их в градиентных растворах 11 ).

Однако известный способ является трудоемким, так как требует длительного центрифугирования для приведения клеток в равновесное состояние в соответствии с их удельным весом, кроме того, для разделения клеток используют дефицитный импортный препарат фнколл.

Цель изобретения вЂ” упрощение способа.

Указанная цель достигается тем, что способ разделения клеток костного мозга осуществляют путем центрифугирования их в градиентных растворах, цеитрифугнрование ведут в градиенте плотностей верографина 1,064-1,067 и

l 075-1,078.

Пример. Перед приготовлением градиентных растворов верографина

600 мл дистиллированной воды подвергают четырехкратной перегонке с помощью бидистиллятора. Растворы верографина с плотностями i 065 г/см и

1,077 г/см готовят по следующей прописи: раствор верографина с плотностью 1,065 г/см (рН 7,2): 42 мл 60Хного верографина + 162 мл четырежды перегнанной воды + 1 мл 0,1 н.раство30 ра едкого натра;. раствор верографина с плотностью 1,077 г/см (рН 7,2):

: 42 мп 60Х-ного верографина„+ 130,8мл четырежды перегнаииой воды + 0,6 мл

0.,1 н,раствора едкого натра.

Для разделения 2,5 мп костного мозга берут из грудины щприцом,. обработанным стерильныи раствором трилоиа

Б, и переносят в пробирку с 12,5 мп

0,85Х-ного раствора хлористого натрия, содержащего О,ЗХ трилона Б. Полученную клеточную взвесь ресуспендируют и осторожно наслаивают на двухслойный градиентный раствор верографина с шотностями 1,065 и 1,077 г/см и ценЭ

59926 4. ростков кроветворения (91,2X), Примесь лимфоидных элементов в последней фракции составляет всего 1,8Х, Количество миелокариоцитов в

lмкл исходного мозга

Диагноз заболевания

Фракция костного моэза, обогащенная созревающими и зрелы-. ми элементами различных ростков кроветворения, Х

79/2

52000

Цирроз печени

91,2/1,8

85,2/1, 2

Первичный рак печени 340000

Язвенная болезнь 70000

52,4

Язвенная болезнь 12ти перстной кишки

83,2/5,6

88000

61,5

Рак поджелудочной железы

Рак желудка

74/5,7

86,8/2,8

83,8/4

93000

40,5

67,2

Язвенная болезнь

Опухоль эабрюшинного пространства

88,8/2,8

79/0,8

58/3,2

87/0,6

70,4

20000

34000

Рак желудка

Цирроз печени

37500.

62000

Холецистит

Рак желудка с метастазами в печень

95,2/0,2

68,5

70000

Послеоперационная вентральная грыжа

71,6/0,7

68/4

69,5/3,2

82/5

65200

45,5

42000

Холецистит

Цирроз печени

Язвенная болезнь

83000

Тромбоцитопеническая пурпура

85,6/3,2

80,5/2,8

37500

54071

58,7

54071«+

+5838

80, 5+2-,4/

/2, 8+0,4

58,7+2,7 вЂ” примесь лимфоидных элементов в данной фракции, 3 8 трифугируют 30 мин при 500 g. После центрифугнрования клеточную взвесь разделяют на две фракции. Дпя иден тиФихации выделенных клеточных элементов из каждой фракции делают мазки, которые после окрашивания исследую методом световой микроскопии. В супер натанте концентрируют фракцию, обогащенную бластными и лимфоидньвии клетками (55X), а в осадке над эритроцитами вЂ” фракцию, обогащенную созревающими и зрелыми элементами различных

Предлагаемый способ применен на костном мозге 17 больных с различной хирургической патологией. Разделение клеток костного мозга больных с различной хирургической патологией в гради10 енте плотности рентгеноконтрастного препарата верографина приведено в таблице.

Фракция костного моз

ra, обогащенная бластными и лимфоидны» ми.элемента1ми 9

Формула изобретения

Составнтеаь С. Малютина

Редактор М. Лысогорова Техред 3,Фанта Корректор М, Демчик

Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауюская наб., д. 4/5

Заказ 7538/67

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 8599

Из таблицы видно, что исходное количество миелокариоцитов в исследуемых образцах костного мозга составляет в среднем 54071+5838 в 1 мкл. После фракционирования клеточные элементы в зависимости от их удельного веса разделяются на две фракции фракцию, расположенную в сунериатанте, обогащенную бластными и лимфоидными клетками (58,7+2,7X) и фракцию, расположен- 1е ную над эритроцитарньи осадком, в которой концентрируется 80,5+2,4Х созревающих и зрелых элементов различных ростков кроветворения с прикесью лимфоидных элементов 2,8+ 0,4Х. 1з

Предлагаемый способ менее трудоемок не требует; значительных материальных затрат, позволяет заменить дефицитный препарат фиколл.

Способ разделения клеток костного мозга путем центрифугирования их в градиентных растворах, о. т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения способа, центрифугирование ведут в градиенте плотностей верографина

l,064-1,067 и,1,075-1,078, Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

). Evans W. Н,, Wolf И. M., Chabr

ner В. А. Concentration of Irrrnature and

mature granu2ocytes from norma2 human

Ьопе marrow. вЂ” "Proceeding of soc. ехр. 02o2. and med. 1974, ч. 146, У 2, р. 526-529.

Способ диагностики неспецифического воспалительного заболевания легких // 859861

Способ скрининга антгельминтиков // 855500

Способ определения возраста человека // 853471

Способ определения жизнеспособностисердца и легких трупа // 851264

Способ диагностики рожистоговоспаления // 845052

Способ диагностики степени иммуннойреактивности организма при туберкулезелегких // 840701

Способ приготовления гистологическогопрепарата костной ткани // 834439

Способ получения коррозионных анатоми-ческих препаратов для электронной микро-скопии // 834437

Способ приготовления гистологическогопрепарата // 834436

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750