Способ количественного определения полиэтиленоксида

 

(72) Авторы иэобретеиия

Л. 3, Элькина, И. И. Гучок, М. И. Шрдсдц J1 A Хащща

); —:- - . - ., 1

I

Институт проблем криобиологин и криомедицины:

АН Украинской CCP

I (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПОЛИЭТИЛЕНОКСИДА

Изобретение относится к медицине, в частности к способам количественного определения полиэтиленоксида, и может быть использовано s терапии, хирургии, экспериментальной и клинической фармакологии, в биологии, в том

5 числе криобиологии.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ количественного определения полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикра о том натрия с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного продукта, основанный на спектрофотометрическом определении комплексов полиэтиленоксидов с катиона15 ми натрия после экстракции их в виде пикратов в 1,2-дихлорэтан. 50 мл водной пробы переносят в делительную воронку на 250 мл со стоп-краном, добавляют 50 мл нитратпикрата натрия (56,6 г нитрата натрия и 0,92 г высушенной в эксикаторе под вакуумом с пятиокисью фосфата пикриновой кислоты растворяют в О,1 н.растворе едкого натра в мерной колбе на 100 мл, объем доводят до метки), перемешивают и дают постоять в течение 1 ч.Затем добавляют 5 мл 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают в течение 3-х мин.органический слой переносят в коническую центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об/мин. Параллельно ставят контроль с 50 мл дистиллированной воды. Спектрофотометрируют при 378 нм в 1-2 см кварцевых кюветах против контроля. Чувствительность способа I--Q 1 мг/л с точностью от — 6 до +SX no анализам в воде (1 ).

Известный способ разработан на примере п-тертнонилфенилового эфира полиоксиэтилена н не пригоден для определения полиэтиленоксида в сложных биологических субстратах, например, крови, растительных соках и, следовательно, не обеспечивает возможности определения токсико- и фармакокинетики, фармакодинамических свойств введенного по3 859 лиэтиленоксида в организм животного или человека. Воспроизведению способа мешают имеющиеся в этих биологических с томах белки и некоторые сахара, обладающие способностью образовывать комплексы с нитратпикратом натрия, а

5 также красный цвет гемоглобина, К недостаткам способа относится и невозможность добиться полного растворения пикриновой кислоты и нитрата нат10 рия в 0,1 н.едком натре в указанных соотношениях.

Цель изобретения — определение полиэтиленоксида в биологических жидкостях.

Поставленная цель достигается тем, что в предлагаемом способе количественного определения полиэтиленоксида путем инкубации пробы с нитратпикратом натрия с последующей экстракцией органическим растворителем и фотометрии полученного раствора, к пробе перед инкубацией последовательно добавляют хлорид бария, 1-2,5Х-ного раствора гидроокиси бария, 5-6Х-ного раствора сульфата цинка, образовавшийся 25 осадок удаляют, а супернатант обрабатывают 10-207-ным раствором сульфата меди, 12-25Х-ным гидроокиси калия, затем смесь инкубируют 15-20 мин при перемешивании и полученный осадок уда- 30 ляют.

Способ осуществляют следующим образом, К 0,5-1 мл биологического материала, содержащего полиэтиленоксид для 35 осаждения белков, последовательно добавляют 0,5-1 мл 20-1ОХ-ного хлорида бария, 1-2 мл 1-2,57.-ной гидроокиси бария, 1-2 мл 5-6Х-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавле- 40 ния каждого реагента, оставляют стоять 10-15 мин и затем центрифугируют

15-20 мин при 2500-30DO об/мин. Недостаток переносят в другую пробирку и для осаждения сахаров добавляют 2- 45

4 мл 20-10Х-ного сульфата меди CuSO и 2-4 мл 25-12Х.-ной гидроокиси кальция

Са(ОН)2, смесь энергично взбалтывают

15-?О мин, затем центрифугируют 5l0 мин при 2000-3000 об/мин. Лишенный so белков и сахаров надосадок переносят в другую пробирку и добавляют 3-5 мл комплексообразующего реагента нитратпикрата натрия (1,5-2,2 И нитрата натрия и 0,015-0,01 И пикриновой кислоты Ss на 0,15-0,1 н.едком натре), смесь взбалтывают и экспонируют в течение

50-60 мин. Затем прибавляют 4-5 мл

l,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают втечение 3-5 мин. Центрифугируют 1015 мин при 2000-2500 об/мин. Органический слой переносят в другую пробирку и определяют оптическую плотность спектрофотометрически при 378 нм. Расчет количества ПЭО проводят по калибровочной кривой.

Пример, К мл крови, взятой из вены после внутривенного введения

ПЭО-1500 последовательно добавляют

1 мл !07-ного хлорида бария, 2 мл

2,57.-ной гидроокиси бария, 2 мл 5Е-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавления каждого реагента и спустя !О мин после прибавления последнего из них центрифугируют 15 мин при

3000 об/мин, Недостаток переносят в другую центрифужную пробирку, добавляют 2 мл 202-ного сульфата меди и 2 мл

25Х.-ной гидроокиси кальция, смесь взбалтывают первые 5 мин непрерывно и последующие 10 мин периодически, затем центрифугируют 10 мин при

3000 об/мин. Надосадок переносят в другую пробирку, добавляют 5 мл реагента нитратпикрата натрия. Смесь тщательно перемешивают, выдеоживают в течение 1 ч при комнатной температуре.

Затем добавляют в 5 мл 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают в течение

3-х мин и центрифугируют 10 мин при

2000 об/мин. Оптическую плотность органического экстрата определяют спектрофотометрически (на спектрофотометре

СФ-16) при 378 нм и толщине слоя см.

Плотность исследуемого образца составляет 0,115, что по калибровочной кривой соответствует 0,046 мг ПЭО-1500 в данном объеме крови .

Предлагаемый способ обеспечивает возможность определения полиэтиленоксида в малых объемах (до мл) сложных биологических материалов (например, кровь, стекловидное тело, соки растений, амниотическая жидкость и др.). Способ специфичен — положительную реакцию дают только вещества, содержащие оксиэтильные (СН вЂ” СН -О) группы. Положительной реакции не дают спирты, альдегиды, кетоны. Способ высокочувствителен — обеспечивает определение полиэтиленоксида в концентрациях 0,0025-0,01Х.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения токсикои фармакокинетики и фармакодинамических свойств полиэтиленоксидов при

Составитель А. Бражникова

Редактор М. Лысогорова Техред 3,Фанта Корректор М. Демчнк

Заказ 7538/67

Тираж 907 Подписное

ЗНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушакая наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 859927 d введении их в организм человека и жи- биологических жидкостях, к пробе певотных и тем самьм способствовать раз- ред инкубацией последовательно добавработке национальных доэ препарата ляют хлорид бария, 1-2,5Х-ного растпри его парентеральном введении. вора гидроокиси бария, 5-6Х-ного раствора сульфата цинка, образовавшийся осадок удаляют, а супернатант обрабаФормула изобретения тывают 10-20Х-ныл раствором сульфата меди, 12 25X-ным гидроокиси калия, Способ количественного определения затем смесь инкубируют 15-20 мин.при полизтилеиоксида путем инкубации пробы1я пеРемешивании и полученный осадок с нитратпикратом натрия с последующей удаляют. зкстракцией органическим растворителем Источники информации, и фотометрии полученного продукта, принятые во внимание при экспертизе отличающийся тем, что, с 1. Hyly Trieste Analyt. 1976, целью определения полизтиленоксида в j v. 101, р. 198-200.