Способ диагностики ишемической болезни сердца

 

ОП КСАН И

ИЗОБРЕТИ Н ИЯ и АВТОИ:КОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Свез Соевтсиии

Социаиистичвсиик

Рвспубаи» (61) Дополнительное к авт. свид-ву—

{22)Заявлено 2911.77(21) 2548299/28-1 с присоединением заявки и†(2З) Приоритет

Опубликовано . 23. I О. 81, Бюллетень №

Дата опубликования описания 26 . 10. (72) Автор изобретения

Н. Б. Одушко (71) Заявитель

Иркутский государственный медицинский ннс (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА

Изобретение относится к медицийе, а именно к способам диагностики и контроля за эффективностью лечения ишемической болезни сердца.

Известен способ диагностики ише-. мической болезни сердца путем вьщеS ления из крови эритроцитов с последующим определением в них содержания фосфолипидов (!).

Однако известный способ не позволяет достаточно точно и дифференцировано поставить диагноз клинических форм заболевания.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики ишемической болезни сердца путем вьщелення из крови эритроцитов с последуюкуе определением в них содержания фосфолипидов, дополнительно определяют свободный холестерин, эфиры иолестврина, свободные жирные кислоты н при содержании общих фосфолипидов 18,852

23,4Х, свободного холестерина 50,65-51,377., эфиров холестерина 17,3621,35Х, свободных жирных кислот 0,810,89Х от общего количества липидов . диагностируют ишемнческую болезнь сердца.

Способ осуществляют следующим образом.

Из локтевой вены берут l 5 мл крови, смешивают ее с О, 2 мп 3,6%-ного раствора цитрата натрия и центрифуги-. руют в течение 15 мин при 3000 об,/мин;

После этого из полученного центрифу.. гата отсасывают плазму, а к эритроцитам, находящимся в осадке, добавляют 10 мл физиологического раствора хлористого натрия и содержимое перемешивают. Затем вновь эритроциты осаждают центрифугированием при тех же условиях (и-"3000 об/мин, t 15 мин) и указанный процесс отмывания зритро 1 цнтов осуществляют еще два раза. После третьего отмывания берут 0 5 мл эритроцитов и гемолизируют их добав3 874031 4 лением 0,5 мл дистиллированной воды. считая от линии. нанесения экстракта

Полученный гемолизат переносят в плос- липидов. Для этого требуется 20-25 мин. кодонную колбу с 10 мл хлороформмета- После пропнтывания растворителем хроноловой смеси (2:!) и экстрагируют ли- матографическне пластинки извлекают лиды в течение двух часов при пос- > из камеры, высушивают на воздухе до тоянном перемешиванни. Затем смесь исчезновения запаха растворителей и фильтруют через обезжиренный бумаж- проявляют опрыскиванием 10Х-ным спирный фильтр, колбу дважды промывают товым раствором фосфорномолибденовой

2-3 мл хлороформ метаноловой смеси кислоты. Указанный раствор готовят (2:1) . К полученному фильтрату до >0 растворением фосфорномолибденовой бавляют 2 мл дистиллированной воды, кислоты в 96о этиловом спирте при повстряхивают и оставляют в холодиль- догреванин до кипения, а затем.фильтнике до разделения смеси на 2 фазы. руют. После опрыскивания фосфорноЗатем верхний водный слой отсасывают, молибденовой кислотой (1ОХ-ным спира нижнюю хлороформиую фазу выпаривают 1 товым раствором) пластинки нагревают в в вакууме при подогревании не выше сушильном шкафу при 80 С в течение

40 С. Для этой цели наиболее подходят нескольких минут до появления интено конические колбы, в которых липидный сивного окрашивания пятен липидов в экстракт находится в узкой нижней час- синий цвет на желтом фоне. Длительти. После упаривания сухой липидный ное нагревание может привести к ок20 остаток сразу же растворяют 0,25 мл . рашиванию в синий цвет фона, что в хлороформ-метаноловой смеси (2:1) и дальнейшем будет мешать при денсийспользуют для осуществления процес- тометрии. В эритроцитах здоровых лю-, са тонкослойной хроматографии. дей на хроматограммах обнаруживают

Для разделения липидов на классь1

25 пять,. пятен, которые идентифицнроваиспользуют .готовые пластинки Si Iufoi ны с .известными представителями лий/ 251, изготавливаемые в Чехословакии, пидов и по цветным реакциям. На старна которых нанесен тонким слоем си- те остаются фосфолнпиды (первое пятно) ликагель закрепленный крахмалом. Раз- второе пятно соответствует свободноФ деление липидов осуществляют одно- му холестерину, третье — свободным

30 мерной восходящей хроматографией в жирным кислотам, четвертое — триглисистеме растворителей : н-гексан-эфир- церидам и пяток — эфирам холестерина. ледяная уксусная кислота (80;20:1) . Интенсивность окраски пятен липидов

Предварительно пластинки трижды про- .на хроматограммах оценивают на денсимывают в этой же системе раствори- тометре> например типа БИВАЛ в QT телей. Используют пластинки размером Зз раженном свете. Полученные количест15х15см, которые разрезают на 2 части венные данные при денситометрии кажи на каждой из них разделяют 2 образ- дой фракции липидов суммируют и их ца линидов. Липидный экстракт по сумму принимают за IOOX, а из полу0,05 мл наносят в виде узкой полосы ченной суммы высчитывают процентную длиной около 1 см, отступая на l 5 см 40 концентрацию каждой фракции лнпидов. от края, Для нанесения используют мик- Пример l. У обследуемого Ц., ропипетку с оттянучъ>м концом с введен- у которого при обьективйом клиничесной внутрь нитью. Это дает возможность ком обследовании не выявлено патолонаносить липидный экстракт узкой по- гии сердечно-сосудистой системы, взялосой не повреждая тонкого слоя силн- 4> та кровь и по указанной методике из

t кагеля. Пластинку помещают в верти- эритроцитов выделены липиды, раздекальном положении в хроматографичес- лены иа классы и определены количесткую камеру с системой растворителей, венио. Содержание в эритроцитах у насыщенную его парами. В качестве данного обследуемого эфиров холестехроматографической камеры может быть 50 рина составило 47,18Х, триглицеридов использована стеклянная банка с притер- 3,89Х,свободных жирных кислот 1,73Х, той крышкой. Высота камеры 15-20 см. свободного холестерина 31,16Х н фосСистему растворителей наливают в хро- фолипидов 15,15Х, матографическую камеру в таком коли- Пример 2. Больной И. Клиничесчестве, чтобы высота слоя не превы- sS кий диагноз: Ишемическая болезнь сердшала 1 см. Тонкий слой на хромато- ца 1 степени. Стенокардия напряжения. графической пластинке должен пропиты- При исследовании липидов эритроцитов ваться растворителями на высоту 10 см, оказалось, что эфиры холестерина со!

874 ,20Х, свофолиини5

Формула изобретения

Составитель 10. Алмазов

Редактор С. Патрушева Техред Л.Пекарь Корректор Ю. Макаренко

Заказ 9110/7 Тираж 690 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент",. г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 0 ставляют 20,22%, триглицериды 7 свободные жирные кислоты 1,39% бодный холестерин 47,09%, а фос лиды 24,10%, Пример 3. Больная Н. Кл ческий диагноз: Ишемичная болезнь сердца il степени, Стенокардия покоя.

Содержание в эритроцитах эфиров холестерина составило 15,93%, триглицеридов 9,73%, свободных жирных кислот 0,88Х, свободного холестерина

49,56Х и фосфолипидов 23,90%.

Пример 4. Больная М.Клинический диагноз: Острый инфаркт миокарда.

При исследовании по предложенной методике липидов эритроцитов оказалось, что содержание эфиров холестерина составляет 30,89%,триглицеридов 5,02Х, свободных жирных кислот 1,54Х, свободного холестерина 39,77Х н фосфолипидов 22,78%.

Способ применен на 53 больных и

20 здоровых людях. При этом установлено, что применение предложенного способа позволит получить более четкие, достоверные данные по изменению липидного спектра эритроцитов у .больных ишемической. болезнью сердца по сравнению с плазмой крови. Так, у больных с ишемической болезнью сердца достоверно понижается процентное содержание эфиров холестерина, свободных жирных кислот и увеличивает+ ся содержание свободного холестерина и фосфолипидов по сравнению с конт35 ролем, причем содержание эфиров холестерина снижается, менее выражено при остром инфаркте миокарда 29,0+

22,63Х против 37,55+ 2,04% в контро40

31 6 ле, более значительно — при ишемической болезни сердца, стенокардии напряжения 21,35 + 1,52Х и наиболее резко — при ишемической болезни сердца, стенокардия покоя 17,3611,19Х, что позволяет не только диагностировать ишемическую болезнь сердца, но дифференцировать ее клинические формы..

Таким образом, предложенный способ обеспечивает более точную, достоверную и быструю биохимическую диагностику ишемической болезни сердца по сравнению с известным способом.

Способ диагностики ишемической болезни сердца путем выделения из крови эрнтроцитов с последующим определением в них содержания фосфолипидов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно определяют свободный холестерин, эфиры холестерина, свобод- ные жирные кислоты и при содержании обших фосфолипидов 18,85-23,4% свободного холестерина 50,65-51,37Х, эфиров холестерина 17,36-21,35, свободных жирных кислот 0,81-0,89% от общего количества лнпидов диагностируют ишемическую болезнь сердца.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

I. Боринский Ю. Х. и Сидоренков М.И, Иекоторые показатели липидного обмена в мембранах эритроцитов в плазме крови при коронарном атеросклерозе и инфаркте миокарда.-"Советская медицина", 1975, N 10, 143/145.