Способ диагностики угрозы прерывания беременности

 

ОП ИСАКИИ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕВЬЮВУ п>876111

Союз Советскик

Соцналнстнческнн республнк

1 .Ф ф J М

i", /

> (6I ) Дояолннтельнве к авт. санд-ву(22) Заявлено ) 7. l 0. 29 (2) )2828396/28- ) 3 (51)М. Кл.

А 6! В 10/00 с нрнсееднненнем заявкн М— (23)Приорнтет3есуаарстнсннын кнннтет

СССР (53)УЙК 6)8,3 (088. 8) ав делан нзнбрнтеннй к вткрыткЯ

Опубликовано 30. lp.8l. бюллетень М 40

Дата ояублнкованмя описания 30 lÎ 8l, т 1

В.С. Толмачев, И. Б. Беклемишев, Е! И. Боровицкая.и Б.П.Шабаев (72) Авторы изобретения

1

1 r

Казахский ордена Трудового Красного:Знамени, государственный университет им.С И .- Кттрова. и Научно- исследовательский институт акушерства и гинекологии (73) Заявители (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ УГРОЗЫ ПРЕРЫВАНИЯ

БЕРЕИЕННОСТИ

Изобретение относится к медицине, а именно, к акушерству.

Известен способ диагностики угрозы прерывания беременности путем выделения лнмфоцитов крови,с последующей . инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым и измерения интенсивности флуоресценции fl).

Однако известный способ обеспечи" вает низкую точность диагностики и не позволяет проводить раннюю диагностику, что ограничивает область его использования.

Цель изобретения — повышение точности способа и ранней диагностики.

Указанная цель достигается тем, 15 что при осуществлении способа диагностики угрозы прерывания беременО ности путем выделения лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски акридиновым оранжевым (АО) и измерения интенсивности флуоресценции, в среде предварительно до внесения.лнмфоцитов инкубируют

/.эритроциты обследуемой в течение

5-60 мин, далее эритроциты удаляют, после инкубации лимфоцитов интенсивность флуоресценции измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывания беременности.

Способ осуществляют следующим образом.

Берут кровь из локтевой вены пациента в количестве 5-10 мл, осаждают эритроциты, надосадочную жидкость с лимфоцитами отделяют от эритроцитов.

Эритроциты трехкратно отмывают от плазмы в 0,85Х-ном растворе хлористо

ro натрия в объеме,З-х кратно превышающем объем эритроцитов. Затем иэ эритроцитарной массы и раствора Рин-гера-Локка в объемном отношении !:2 готовят взвеси и помещают в диффузи онную камеру, две полукамеры которой, разделены мембранным фильтром с диаметром пор 0.,4 мкм. Эритроциты инку876111 4

5 мин

5

5 бирурт и течение 30 мин при периодическом встряхивании для предотвраи ения их оседания.

В результате инкубации эрнтроцитарный белок диффуэно проникает в

5 полукамеру с раствором Рингера-Локка.

По истечении срока инкубации раствор

Рингера-Локка с проникшими туда эритроцитарными белками извлекают и добавляют в культуру с лимфоцитами, ко. торые инкубируют на покровных стеклах в течение 5-60 мин. После инкубации покровные стекла с приклеившимися лимфоцитами вынимают и фиксируют в смеси спирт-ацетон (1:1) в течение

30 мин при 4 С.

Препараты с клетками окрашивают в следующей последовательности.

Этиловый спирт lOOOC

То же 90 20

Бидистиллнро- . ванная вода

Лцетатнь и буфер (pH 4, 4)

Раствор AO на буфере (10 м) 15

Раствор АО на буфере (10 м) 5 30

То же 5

Препараты заключают в каплю буферного раствора, содержащего краситель

А0 (10 и), и помещают на предметное стекло, края которого окантовывают йарафином или резиновым клеем.

Измерение интенсивности связывания красителя АО с клетками проводят на цитофлуоринефелометре.

Причем интенсивность флуоресценциь измеряют в начале и в конце инкубации и при возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации ди" агностируют угрозу прерывания беременности.

Клинико-лабораторные исследования с использованием предлагаемого способа показали (табл. 1), что интенсивность флюоресценции повышается в 2 раза при действии среды, где инкубировали эритроциты больных. Действительно, сравнивая столбец 2, где дана интенсивность флуоресценции лимфоцитов донора с собственной сывороткой, со столбцом 4, где дана интенсивность флуоресценции при добавлении сыворотки больной видно, что флуоресценция уменьшается в среднем на 7,5Х (столбец 5) . В то вр мя как добавление в 5-минутную культуру среды, где инкубировали эритроциты этих же больных, показало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6) в 2 раза и составило 167" (столбец 8).

Следует обратить внимание, что в тех случаях, когда процент отличий интенсивности флуоресценции под действием сыворотки больных был низок (столбец 5, номера по.порядку 4,5,6) и затруднял постановку диагноза, то под действием среды, где инкубировали эритроциты пациентов, процент отличий достоверно увеличился (столбец 8) и позволял поставить точный диагноз угрозы выкидыша.

60-минутное культивирование лимфоцитов донора с сывороткой крови больных показало (табл.2), что ин" тенснвность флусресценции лимфоцитов (столбец 4) увеличивается .в среднем на 67 (столбец 5), в то время как добавление в культуру среды, где инкубировали эритроциты пациентов, вызывало увеличение интенсивности флуоресценции (столбец 6) почти в

3 раза и составило в среднем 18Х (столбец 8), что,способствовало установлению более точного диагноза.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение точности диагностики, а также позволяет проводить более раннюю диагностику угрозы прерывания беременности.

876}}}

О О

«В

° О

СЧ О а л

° ОО ч С3 О

В Э

СЪО

С Ъ О е в

С Ъ О

СЪ О

Ф д О

I ° 03

Р С0

03 а

О,а Е

B x

I л я ч я ч я я v

03 1 Х

etoa

03аои

С3 Х Р

ОО 1-Х

R 4 30 3 ь

О Х 30 х с х оа

Х Р.О Ъ У

Д,д,.

00 .О

С»\

+3 л

СЧ

СЧ

I ц!

Э Р х

3/\

О

Ф

СЧ

+1

СЧ

СЧ

CO ь

Ф

С Ъ

+t о

С Ъ

СЧ

О

«

С"Ъ

+3

СЧ

ССЪ

СЧ

С»Ъ

В

l+

+! С

CV

СЧ

+1 л

С»Ъ

CV о 1

)wl

1 х

I f5

» fu хео

03 K l х U x

О 03 1

U 03Ф. и о

О 03<

3Х О 03.

333с а

О314Х а3- ьн

00 О

С Ъ

+!

О

3СЪ

О

СЧ ф!

Ch л

CO

О

° ь

С»Ъ

+l л л

3СЪ

О

Ю

СЧ

+! л

00! I

+1

3СЪ

О

СЧ

+!

О

О

1»

Ц 01

Я3 О

1

03 N IO и о

0l о ах

° 4 03

В ь (»

О 5

f и о

C3;(a °

О 03 М М

CL 333 1» 1

О1-ОО

С»Ъ

«

СЪ

+I

РЪ

О

СЧ

CO

Ф

ИЪ

+3 л о

СЧ

+3 оъ

03Ъ

t3 л оъ

0Г

l/l м v

3,." О

03 Х

6 00

С0 5 Х

30 03 Х

ome

< И Х

ХеС3

Р.аэ

a3 CC

Р.О g

Х О 03

О Р,333 р х (о х Й. . ! хох .5o }

03 Ъ3 03

ovW

gl g

Х C Р о х

03 03 L

Х 1»

ie 03

СОО<

0Я CJ 4

«а 3 а .3а «а а За ся

<,1 1 ° 1.

О 333 03 03

Ц 3:3 !»

CV Ch 00

10«gtV ЯсЧ

1 О о

cv o а л ео 1 ц V

+ lj о î а л ао л

Сл) СМ

00 о )

+I

Ch

1

4ф о

Ц о

CO

О и (2

М а ю а

С Ъ л

LA

+I л

CV

CV

00 о а

0 3 н

СЧ

Q Х

ЮЮ о а а

Э

+ь + с Ъ Я:1 о э

СЧ ла

I л ао

876!)! ( 0 е» ,Ы1

il I (!

876lll

)О

1 1

1 м

Й бх х

СЪ О

° л О

О О

О Î л л л

-О <О

О О л л

ОО

1 О

° л

ВО л л

00 О

C)

СЪ О л л

ОО

О О

) ОЪО а

I б0 бХ

1 I

u W

11- хс;

)v cg c1

00 О а ч

+ aI

1! ч и а ч g ч !

Са A, д л ql

O e t0

«о э а

Ф а х о ию

1» 0ъ

Х 10 4

O 0I X а о

Е А, Э о ц " 5 ! х э

I!0 g

3 о <

1- а э

6"" а и о х х— ф .э х х хео

СЪ

СЮЪ л ю

+!

Сб!

С 4

О л

СбЪ со<

C) л

C) л

СбЪ

О

СбЪ ф!

С»!

С0

%»б л

4 Ъ

+1

ССЪ

CV.1.1 бО

СбЪ

СЧ

<-1

СЪ

С4 (В-л

1» бО

I о

l !!

10Х о

l f Ä Ц

lo m

1Хе О

I 10 f !

ХИ Х ие ы

1Х а О

1 а Дб.

ССЪ

О (»!

+1

С»1

С»Ф

О л

С Ъ н

С»!

МЪ

О л

CV .1-! л

СЧ л а! бО

Cl

С»1

o э )g и о

V 10 0( хoe I

mOA, 1 ох -х. о о о х дv . — -- — б

+1

С 4

t х э

1 5" а с «. э ж " э! эбхю

Ж о

I Я Х

° î z

О. A

»Ч лб

l ° 3

Еид

l! в

1 о

tt 1 э I

1„

v. и

J! Ы

С1

Ф Щ

Ъ

Х бС

Е»

u o о а .

Ф 3

x u! ф б Щ а СФ с! о1 йС С! СС!l

l ! »0 Х

1 t" Х и о х

I Х Е

l0 х и

u e х а е о

1 f .>

I Х 3

l о

СГ

Ю

m o о и

1 >Х хио х

orna

Май хо! ц х и

О

С"Ъ

+!

ССЪ

МЪ

О л . л СЧ

М 41 л О оъ ch, С Ъ

° 1

ССЪ

+1

«h

С»С

О л

ССЪ

Ф! О

СЧ!

» С I о е

oх

3 о

1 4

1 и

1 A

I

00 б

D ю х у. э с

f" 0I С х ц о эох © A о 4 R

0!Ь э х v

Х

О 3 хх С» Д ах о оэа хк1о х х а

% оох

f A б» Щ 10

О,0 O

1. О 1".

v Об

Э О л00

1 " а. !хнеvv о о х х х х е» х х и ее

o me z х f. э

Ф И A х1о х о

VOflA х v v э о к

l, Х Х хххх ж х э

X ® хо аа

ХОЭЭ е» ю а х э

С0 ХО

z ðõõ

f С0 Сб

0аО х3а а 4 и е >б

О С»! С Ъ сО СбЪ

СМ

° » »» С»1

11 ! С 4 I

I !

1 с

I I ! сО о I ) l

876 I I

Формула изобретения

Составитель Л.Соловьев

Редактор Т.Макаревич Техред Ж. Кастелевич Корректор С. 0!омах

Заказ II458 Тираж 690 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий.!!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Ilfltl,ïâòåHò звк. Зб 04

Способ диагностики угрозы прерывания беременности путем вселения лимфоцитов крови с последующей инкубацией их в среде, окраски .акридиновым оранжевым и измерения интенсивности флуоресценции, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повыше.. ния способа и ранней диагностики, в среде предварительно до внесения лимфоцитов инкубируют эритроциты обследуемой.в течение 5-60 мин, далее. эритроциты удаляют, после инкубации

I2 лимфоцитов интенсивность флуоресценцин измеряют в начале и в конце инкубацни и прн возрастании интенсивности флуоресценции к концу инкубации диагностируют угрозу прерывания бе" ременности.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

I. RiqJer R. MIcrofluorimetric

characterization of intracel lular nucleic acids nuclooorateinsby ac idine

oranqe".!- Acta Physio).Seand". l966, ч 67, стр.267.